Cruces Monohíbridos y Dihíbridos de“Drosophila Melanogaster” Informe de Ingeniería Genética Alumnos: Cárdenas Hurtado Rosmery 4-12-2013 Muy prolífica (cada hembra puede generar de 300 a 500 individuos). es un excelente material de laboratorio y. Los científicos estudian modelos biológicos simples con el objetivo de comprender los principios que se pueden aplicar a sistemas más complejos. algunas de las ventajas de D. -Distinguir las diferencias morfológicas entre el macho y la hembra. Brevemente. Introducción En el presente trabajo se utilizaron individuos que pertenecen a la especie Drosophila melanogaster. Esta universalidad permite comprender la complejidad de los sistemas biológicos. Presencia de cromosomas politénicos en las glándulas salivales de las larvas de tercer estadío Color transparente de la larva. Muchas de las investigaciones están basadas en el estudio de los genes homólogos de Drosophila. . por ello. un número de descendientes muy elevado en una sola generación y la gran variedad de mutantes fenotípicos que se conocen. conocida vulgarmente como la mosca del vinagre o de la fruta. melanogaster como organismo modelo son: Método sencillo y poco costoso de crianza. destacan su mantenimiento sencillo y económico. Organismo eucariota. Gran cantidad de mutaciones espontáneas o inducidas que han permitido hacer un mapa genético y citológico completo. que permite conservar un gran número de líneas interesantes por sus características genéticas de una forma rutinaria. las características del dimorfismo sexual. con sistema nervioso relativamente complejo. Entre las múltiples ventajas que ofrece. Genoma secuenciado y anotado. incluyendo los vertebrados. la genética y los fenotipos/genotipos de diferentes mutantes. Ciclo de vida corto (10 a 14 días dependiendo de la temperatura). en un espacio reducido. por lo que es de gran utilidad para inmunohistoquímica. ha jugado un papel muy importante en el desarrollo de la Genética.Cruces Monohíbridos y Dihíbridos de “Drosophila Melanogaster” Objetivo Los objetivos específicos son: -Conocer el ciclo de vida y la morfología de las diferentes fases del desarrollo de Drosophila. la capacidad de producir. es decir genes con estructura y función similares a otros animales. y se estudio el ciclo de vida. Drosophila melanogaster. pupa y. por lo que es común encontrarla en los mercados y alrededor de los depósitos de basura en las casas. larva. aunque es más abundante en las estaciones cálidas en sitios donde se fermentan frutas como los plátanos. La tabla 1 muestra una cronología aproximada del desarrollo de D. melanogaster desde huevo a adulto es de unos 10 días. Ciclo de vida de Drosophila melanogaster . La duración de su ciclo de vida depende de varios factores ambientales. Pequeño tamaño del genoma. 2n=8) con un par sexual XY en el macho y XX en la hembra y 3 pares de autosomas (el cromosoma 4 es muy pequeño con muy pocos genes funcionales). es preciso conocer los diversos estados de su desarrollo y diferenciar los sexos con toda claridad. mientras que a 20ºC son necesarios 15 días para ello. Se puede considerar a Drosophila como cosmopolita. tales como la temperatura y la humedad. etc. con reducido número de cromosomas (n=4. El ciclo de vida de Drosophila Las moscas Drosophila son dípteros holometábolos que durante su desarrollo pasan por las fases de huevo.. finalmente. A una temperatura de 25ºC y una humedad relativa del 60%. melanogaster que nos servirá para entender la planificación de nuestros experimentos con esta especie. el ciclo de D. Figura 1. insecto adulto (Figura 1). Con el objeto de utilizar Drosophila en forma adecuada para los estudios en laboratorio. las uvas. el insecto adulto rompe la cubierta de la pupa y emerge. los insectos adultos se reconocen fácilmente porque no están completamente pigmentados. finalmente.5 pigmentación de las quetas 214 9 emergencia: adulto con alas plegadas Tabla 1. melanogaster . Se ven pálidos e hinchados y sus alas aún no se han desplegado. Las pupas se distinguen porque la cubierta externa de la larva se va endureciendo y oscureciendo progresivamente. Una vez que ha terminado la metamorfosis que consiste en la degradación y reabsorción de los tejidos de la larva y la producción de nuevos órganos a partir de unas agrupaciones celulares larvarias llamadas discos imaginales.El apareamiento consiste en la deposición del esperma en el receptáculo seminal y el posterior almacenamiento en la espermateca a nivel del útero de la hembra. Inmediatamente después de la emergencia. Horas Días Estadío del desarrollo 0 0 fecundación: embrión 22 1 eclosión: primer estadio larvario 47 2 primera muda: segundo estadio 70 3 segunda muda: tercer estadio 118 5 Formación del puparium 119 5 puparium amarillo 120 5 puparium pigmentado 122 5 muda prepupal 130 5. Estas larvas pierden movilidad de forma progresiva y. Cronología del desarrollo de D. al final de las cuales se obtienen las llamadas larvas de tercer estadio. Los huevos son fertilizados dentro del útero y a continuación son depositados (u ovoposición). muy activa y voraz. del huevo eclosiona una larva pequeña y blanca. alas y patas 167 7 pigmentación de los ojos 184 7.5 formación de la cabeza. hasta adquirir una tonalidad amarillenta o anaranjada. El crecimiento rápido de la larva le produce dos mudas sucesivas. se fijan al sustrato y comienzan a transformarse en insectos adultos: es la pupación. Al cabo de unas horas. se desarrolla la embriogénesis en la que tiene lugar una gran proliferación y reorganización celular. mientras que el de las hembras es más puntiagudo y presenta 7 segmentos. En segundo lugar. Dimorfismo sexual en Drosophila melanogaster. . Figura 2. B) Visión ventral de las estructuras de las placas genitales del macho y de la hembra adultos. los machos son algo más pequeños. Finalmente. y pueden llegar a alcanzar hasta los tres meses de vida.Características del insecto adulto. Identificación de los sexos. La longevidad depende en gran parte de la disponibilidad de alimento y de la temperatura. el abdomen de los machos es redondeado y presenta sólo 5 segmentos. si bien la tasa de ovoposición desciende a partir del décimo día. Para distinguir los dos sexos hay que tener en cuenta diferentes características. Además. A) Visión dorsal de los insectos adultos de ambos sexos. C) Detalle de la pata anterior de los adultos. la pigmentación de la zona dorsal del extremo del abdomen es diferente en machos y hembras: en los machos forma una mancha negra continua sobre los segmentos terminales del abdomen (de ahí le viene el nombre de "melanogaster": extremo del abdomen oscuro). melanogaster (aunque algunas de estas características no son comunes a todas las especies del género). Para poder realizar los cruzamientos en condiciones controladas se deben reconocer inequívocamente los sexos y conocer el tiempo a partir del cual los individuos emergidos son capaces de aparearse. Los machos presentan el peine sexual (sex combs). Se pueden señalar diferentes características morfológicas que permiten distinguir fácilmente los machos de las hembras de la especie D. La capacidad reproductora se conserva a lo largo de toda la vida. El sexo de los adultos es más fácil de distinguir en esta especie (Figura 2). en los machos se observa el peine sexual que consiste en diez cerdas gruesas en la superficie de una de las partes de las patas anteriores (Figura 2). En primer lugar. Los adultos pueden aparearse a las pocas horas de la eclosión y las hembras comienzan a poner huevos poco después. . Propiónico 4 ml agar: 10 g sacarosa: 40 g Esto es para 1 litro de comida OBSERVACIONES Y RESULTADOS Observación de moscas para el Cruce Con ayuda del estereomicroscopio o con una lupa se pudo observar las características Guiándonos con las características morfológicas entre machos y hembras ya mencionadas. se obtuvieron moscas hembras y moscas machos como se indica en la figura 3. se observan otras características: si apretamos los individuos sobre su dorso. Componentes del medio para la reproduccion de Drosophila polenta 66. mientras que los machos tienen una estructura oscura llamada arco genital (Figura 2).5 g levadura 20 g nipagen 7 ml de solución 46. En las hembras podemos ver una placa genital de color claro. Figura 3. aparecen los aparatos genitales. Proceso de observación de características En el primer cruce F1: Se obtuvo 77 de color canela con alas normales y 23 color café con alas normales.25 g en 250 ml EtOH 100% ac.Empleando la lupa. Genotipo Moscas canela con alas normales Moscas cafés con alas normales Observado Esperados 77 75 23 25 (Ob-Esp)^2/Esp 0.2. 21 cuerpo café con alas normales.213 se encuentra dentro de la zona de no rechazo de la Ho → los resultados obtenidos corresponden a un cruce monohíbrido con un 5% de significancia. Se obtuvo 58 moscas color normal (canela) con alas normales. comparadas con fotografías más claras de moscas sacadas del programa Drosophila Genetics Lab. (A hembra y C macho).053 0. A y C. mosca de cuerpo de color café y alas atrofiadas (B macho y D hembra). En el segundo cruce F2: Figura 4.213 0. 16 canelas con alas atrofiadas o cortas y 8 color café con alas cortas . mosca de cuerpo de color canela y alas normales. Version 6. Diferencias morfológicas vistas desde un estereomicroscopio de las dos cepas utilizadas para el cruce di hibrido. B y D.16 Ho: los resultados obtenidos tienen una proporción de 3:1 Ha: los resultados obtenidos no tienen una proporción de 3:1 GL=1 X2= 0. Para los cruces se recomienda una proporción de 3:1 de hembras y machos respectivamente Se recomendaría realizar los cruces con un menor número de moscas. En caso de mezclar líneas de moscas y se deseé obtener nuevamente razas puras se debe aislar hembras vírgenes y a partir de éstas crear una nueva población.91 0.APLICACIÓN DEL CHI .91 se encuentra dentro de la zona del no rechazo de la Ho → los resultados obtenidos corresponden a un cruce dihibrido con un 5% de significancia. .47 5 6 0. El cruce F1 reveló que cada organismo diploide posee dos alelos para una característica. estos alelos se segregan cuando se forman los gametos y un alelo va hacia cada gameto.071 58 56 21 19 0. CONCLUSIONES: A través de este proyecto se pudo comprobar las leyes postuladas por Mendel. El cruce monohíbrido reforzó el concepto de dominancia ya que en la F1 dos alelos diferentes están presentes en un genotipo pero en el fenotipo se observa solo el rasgo codificado por uno de ellos (el alelo dominante) RECOMENDACIONES: Evitar dejar escapar las moscas ya que se pueden reproducir en el ambiente y esto implicaría un cambio en la naturaleza. DISCUSIÓN Debido a que el medio en donde se encontraba el cruce para la F2 sufrió varios percances como por ejemplo al momento de realizar el primer cruce (ya que se realizó dos veces).16 Ho: los resultados obtenidos tienen una proporción de 9:3:3:1 Ha: los resultados obtenidos no tienen una proporción de 9:3:3:1 GL=3 X2= 0. así mismo no mezclar entre especies de moscas a fin de conservar especies puras en los frascos.21 16 19 0.CUADRADO Fenotipo Cuerpo y alas normales Alas normales cuerpo canela Alas atrofiadas cuerpo normal Alas atrofiadas cuerpo canela Prueba de X2 Observado Esperados (Ob-Esp)^2/Esp 0. este medio se volvió liquido y fue matando a las moscas poco a poco debido a que sus patas se pegaron en el medio volviéndose una trampa para ellas. NY:cold Spring Harbor Laboratory Press. 2006. O’Brien. BIBLIOGRAFIA Ashburner. 2 vols. J... 2009.W. Klug.27. Principios de genética. M.FLYBASE: URL: www.719. Prentice Hall. P.Drosophila:a laboratory handbook and manual.flybase. 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