Universidad NacionalAutónoma de México Facultad de Estudios Superiores Zaragoza Laboratorio de Ciencias Básicas III “Cromatografía (espinaca)” Alumna: Banda Sandoval Nayelli Jocelyn Grupo: 4303 Profesora: Q. Ma. Estela Jiménez Encarnación Resumen: Tenemos espinaca la cual vamos a extraer su pigmento por el método se maceración sin agregar algún disolvente hasta tenerla de manera cómo masa le agregamos acetona para empezar a disolverla más, lo agregamos a un embudo de decantación donde ya posteriormente agregamos éter de petróleo, ya haciendo los lavados se dejara en reposo con sulfato de sodio que funciona como absorbente, en ese tiempo del reposo se hará una suspensión preparada con gel de sílice y acetato de etilo, se preparan 10 placas que cada una será para cada disolvente. Ya habiendo reposado un cierto tiempo vamos a filtrar el extracto de la espinaca, puntearemos las placas y dejaremos que cada disolvente suba por la placa. Elegimos los eluyente correspondientes para volver hacer cromatografía en capa fina, así podemos elegir el eluyente más adecuado para seguir con la cromatografía en columna; empacamos la columna adecuadamente (hexano, algodón, gel de sílice para columna, sal, pigmento vegetal y la mezcla de eluyentes ya elegida posteriormente) esperamos que el pigmento baje a punto de salir de la columna para poder colocar un mililitro en los tubos de ensayo para volver a hacer la cromatografía en capa fina punteando en cada placa el extracto principal y el extracto obtenido por la cromatografía en columna que se encuentra en los tubos de ensayos ya terminado esto solo seleccionamos el eluyente más adecuado. Abstric We have spinach which we are going to extract its pigment by the maceration method without adding some solvent until having it in a way as we add acetone to begin to dissolve it more, we add it to a funnel of decanting where already later we add ether of petroleum, already doing The washes are allowed to stand with sodium sulfate as an absorbent, at which time a suspension prepared with silica gel and ethyl acetate is made, 10 plates are prepared which will each be for each solvent. Having rested for some time we will filter the extract of the spinach, we will tap the plates and let each solvent go up the plate. We choose the corresponding eluent to return to make thin layer chromatography, so we can choose the most suitable eluent to continue with column chromatography; We packed the column properly (hexane, cotton, silica gel for column, salt, vegetable pigment and the eluent mixture already chosen later) we expect the pigment to come down from the column in order to place a milliliter in the test tubes To re-do the thin layer chromatography by puncturing in each plate the main extract and the extract obtained by the column chromatography that is in the finished test tubes, this only selects the most suitable eluent. Objetivos Extraer los pigmentos de un producto natural asignado (espinaca) haciendo uso de la técnica de más adecuado. Elegir mediante la capa fina el eluyente o mezcla del eluyente para separación los diferentes pigmentos de la espinaca por cromatografía. Verificar en la cromatografía capa fina que se logró la separación de pigmentos en cromatografía de columna. Hipótesis Se seleccionará un buen sistema de elucción a partir de la cromatografía en capa fina por lo tanto se obtendrá los compontes vegetales (clorofilo) de la espinaca promedio de la cromatografía en columna. Antecedentes: Un rasgo característico de la cromatografía es la presencia de dos fases; dispuestas de tal manera que mientras una permanece estacionaria dentro del sistema (fase estacionaria), la otra se desplaza a lo largo de él (fase móvil). La clave de la separación en cromatografía es que la velocidad con la que se mueve cada sustancia depende de su afinidad relativa por ambas fases (equilibrio de distribución). En el experimento de Tswett, la separación de los pigmentos vegetales se logró gracias a que cada uno de ellos tenía una afinidad diferente por las fases. En general, los componentes más afines a la fase estacionaria avanzan lentamente (más retenidos) mientras que los más afines a la fase móvil (menos retenidos) se mueven con mayor rapidez. Por consecuencia, el medio cromatográfico (columna, placa o papel) funciona como un controlador de la velocidad de cada sustancia que constituye la mezcla, logrando así su separación y mediante el uso de un detector, su caracterización química. Aunque los principios fundamentales son los mismos, se acostumbra clasificar los métodos cromatográficos según el estado físico de la fase móvil: Cromatografía líquida. La fase móvil es un disolvente o mezcla de disolventes y la fase estacionaria un sólido que interactúa con las sustancias que se desea separar (cromatografía líquido-sólido), o bien un líquido inmiscible con la fase móvil, depositado en la superficie de un sólido (cromatografía líquido-líquido). Esta forma de cromatografía puede realizarse con diferentes arreglos experimentales: en columna, en capa delgada o en papel. En el primer caso, la fase estacionaria se encuentra rellenando un tubo; en el segundo, se dispersa sobre una lámina de vidrio o aluminio formando un lecho de espesor uniforme; en la cromatografía en papel, la fase estacionaria es la solución acuosa contenida en el interior de las celdas formadas por las fibras de la celulosa, y es por tanto una forma de cromatografía líquido-líquido Cromatografía de gases. En este caso la fase móvil es un gas inerte (helio o nitrógeno) y la fase estacionaria es un sólido (cromatografía gas-sólido) o un líquido “sostenido” por un sólido inerte (cromatografía gas-líquido). Este tipo de cromatografía siempre es en columna, ya que es la única manera de que la fase móvil gaseosa se mantenga fluyendo, confinada dentro del sistema. La columna puede estar rellena con la fase estacionaria, en forma semejante a la cromatografía líquida, o bien la fase estacionaria puede depositarse sobre las paredes de un tubo muy delgado (0.25mm de diámetro) y largo (hasta 100m). Este tipo de columnas se conocen como columnas capilares y proporcionan la mayor capacidad de separación. De acuerdo con el mecanismo de retención, la cromatografía se puede clasificar en los siguientes tipos: adsorción (normal, de fase reversa) partición líquido-líquido intercambio iónico permeación sobre gel de afinidad Las áreas de aplicación son muy diversas y abarcan prácticamente todas las actividades en las que interviene la química, por ejemplo: se emplea en: El análisis de drogas y fármacos en fluidos biológicos como la saliva, la sangre, la orina; Seguir la transformación de las sustancias responsables de la transmisión neurológica; Determinar la presencia de contaminantes en el medio ambiente; Descifrar la composición de los combustibles fósiles; Realizar el control de calidad de los productos químicos y farmacéuticos manufacturados; en fin, la lista de ejemplos es interminable. Cromatografía en capa fina La cromatografía en capa fina se basa en la preparación de una capa, uniforme, de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro soporte. Los requisitos esenciales son, pues, un adsorbente, placas de vidrio, un dispositivo que mantenga las placas durante la extensión, otro para aplicar la capa de adsorbente, y una cámara en la que se desarrollen las placas cubiertas. Es preciso también poder guardar con facilidad las placas preparadas y una estufa para activarlas. La fase móvil es líquida y la fase estacionaria consiste en un sólido. La fase estacionaria será un componente polar y el eluyente será por lo general menos polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen con mayor velocidad serán los menos polares. Polaridad de los compuestos orgánicos en orden creciente: hidrocarburos < olefinas < flúor < cloro < nitro < aldehído < ester < alcohol < cetonas < aminas < ácidos < amidas La cromatografía en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros métodos cromatográficos (en columna, en papel, en fase gaseosa) ya que el utillaje que precisa es más simple. El tiempo que se necesita para conseguir las separaciones es mucho menor y la separación es generalmente mejor. Pueden usarse reveladores corrosivos, que sobre papel destruirían el cromatograma. El método es simple y los resultados son fácilmente reproducibles, lo que hace que sea un método adecuado para fines analíticos. Al realizar la elección del adsorbente se debe tener en cuenta el tamaño de las partículas del adsorbente, cuanto más finamente dividido esté mayor será su adhesión al soporte, aunque también se le puede añadir un adherente. En la elección del eluyente influyen varios factores: Precio. Pureza. No utilizar mezclas de eluyentes (reproducibilidad). No utilizar compuestos muy volátiles. Evitar que contengan trazas de metales (catalizadores). La elección del eluyente se realiza de forma empírica. Hay que estudiar la polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez menos polares. Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo, el cual forma complejos coloreados con los componentes orgánicos (con tonos amarillo-marrón), pero las manchas desaparecen con el tiempo con lo que es conveniente señalar las manchas aparecidas. Otro reactivo revelador bastante utilizado es el ácido sulfúrico, que reacciona con los componentes orgánicos produciendo manchas negras. Sin embargo debe tenerse en cuenta que el tamaño de las manchas no está relacionado con la cantidad de componente separado. Para mejor claridad vamos hacer de manera individual cada proceso para llevar acabo la cromatografía. Proceso 1. Material Reactivos Mortero con pistilo Éter de petróleo Probeta de 50mL Acetona Embudo de decantación Sulfato de Sodio 300mL Soporte Universal Anillo de hierro Embudo de tallo corto Matraz Erlenmeyer 125mL Frasco de vidrio Pasos a seguir: 1. Pesar 20gramos de espinaca ya limpia y seca. Observar la ilustración 1 Ilustración 1 2. Empezar a macerar la espinaca sin ningún disolvente. Observar la ilustración 2 Ilustración 2 3. Agregar 50mL de acetona al mortero. Observar la ilustración 3 Ilustración 3 4. En el embudo de decantación el éter de petróleo 100mL . Observar la ilustración 4 Ilustración 4 5. Filtramos el extracto (acetona y espinaca) y lo vertimos en el embudo de decantación. Observar la ilustración 5 Ilustración 5 6. Mezclarlo de forma que al terminar se pueda distinguir el extracto. Observar la ilustración 6 Ilustración 6 7. Volver a hacerlo ahora con dos lavados de 25mL de acetona. Observar la ilustración 7 Ilustración 7 8. Al extracto ya recuperado se le agregará sulfato de sodio el cual servirá como desecante, pero este se dejará reposar por unos días asegurándose que donde se coloca este cubierto por papel aluminio. Preparación de las placas para la cromatografía en capa fina. Material Reactivos Frasco Transparente Gel de Sílice para capa fina Porta Objetos Éter de petróleo Papel aluminio Hexano Papel Filtro Tolueno Pipeta Graduada 10mL Benceno Capilares Cloroformo Cloruro de etileno Acetato de etilo Acetona Etanol Metanol ¿Cómo se prepara? 1) En el frasco colocar acetato de etilo y gel de sílice tapar y agitar bien para que los componentes se incorporen de manera homogénea. 2) Meteremos las placas dejando libre aproximadamente 1 cm las limpiamos de los lados y el extremo (Metemos dos Ilustración 8 placas al ingresarlas al frasco). Observar la ilustración 8 3) Lo colocamos dentro de la estufa para activar las placas por 30 min. Observar la ilustración 9 Ilustración 9 4) Filtramos el extracto que dejamos reposado con el sulfato de sodio. Observar la ilustración10 Ilustración 10 5) Punteamos las placas con el extracto de manera que no se expanda el punto en la placa. Observar la ilustración 11 Ilustración 11 6) Lo adentramos a los 10 cámaras cada una con 10mL de cada sustancia. Observar la ilustración 12 Ilustración 12 7) Antes que el disolvente llegue al final del gel de sílice debemos sacar la placa. Observar la ilustración 13 Ilustración 13 8) Elegimos algunos disolventes para poder mezclaros de los cuales tenemos que guiarnos por la polaridad de la sustancia para volver hacer la cromatografía en capa fina y poder elegir el más adecuado. Observar la ilustración 14 Ilustración 14 Las combinaciones adecuadas son las siguientes: Éter de petróleo + Acetona Hexano + Acetato de etilo El cual se harán las siguientes mezclas (5+5), (9+1), (1+9), (8+2), (2+8), (7+3), (3+7), (6+4) y (4+6) Resultados de Éter de Petróleo más acetona. Observar la ilustración 15 Ilustración 15 Resultados de Hexano y Acetato de etilo. Observar la ilustración 16 Ilustración 16 Con los resultados que obtuvimos decidimos utilizar a mezcla de 7 hexano + 3 acetato de etilo. Ya con esto podemos iniciar la cromatografía en columna. Observar la ilustración 17 Ilustración 17 Cromatografía en Columna Material Reactivos Bureta Sal Matraz Erlenmeyer Hexano Algodón Acetato de etilo Vidrio de Reloj Gel de sílice para columna Matraz de bola Embudo Espátula Varilla Pipeta Gradilla Tubos de ensayo El proceso a seguir es el siguiente: A. Colocar el disolvente menos polar (hexano) para sacar el aire de la punta de la bureta. Observar la ilustración 18 Ilustración 18 B. Se adentra un pedazo de algodón sin dejar alguna burbuja de aire. Observar la ilustración 19 Ilustración 19 C. Se pesa 12 gramos de gel de sílice en columna. Observar la ilustración 20 Ilustración 20 D. En el matraz de bola de 100mL se agrega el gel de sílice y hexano aproximadamente medio dedo arriba del gel de sílice. Con ayuda de un embudo lo agregamos con una constante agitación. Observar la ilustración 21 Ilustración 21 E. Agregamos hexano para quitar los residuos de las paredes. Observar la ilustración 22 Ilustración 22 F. Agregamos a próximamente 3cm de sal. Observar la ilustración 23 Ilustración 23 G. Colocamos de nuevo hexano, pero lo volvemos a quitar goteo por goteo. Observar la ilustración 24 Ilustración 24 H. Sin dejar saca la sal pero si con un mínimo volumen de hexano. La ilustración I. Colocar 2mL del 27 nos muestra extracto alrededor de como el toda la sal. Observar la ilustración extracto 25 recorrerá por toda la bureta Ilustración 25 hasta llegar al la mezcla (hexano- J. Vertimos acetato de etilo) en la bureta y se volverá a dejar en el goteo. Observar la ilustración 26 Ilustración 26 Ilustración 27 K. Cuando el extracto llega al final empezamos a extraer 1mL en los tubos de ensayo. Observar la ilustración Ilustración 28 28 De nuevo realizaremos cromatografía en capa fina, pero comparando el extracto original y lo obtenido en la cromatografía en columna. Estos fueron los resultados: Ilustración 29 Observar la ilustración 29 del lado derecho se encuentra el punteo de los tubos de ensayo y del lado izquierdo el punteo del extracto original. CUESTIONARIO DE CROMATOGRAFÍA ¿A qué grupo de compuestos pertenecen los pigmentos? Carotenoides y xantofilas. ¿A qué se debe que estos compuestos sean coloridos? Carotenoides: son los responsables de la gran mayoría de los colores amarillos, anaranjados y rojos pres entes en los alimentos vegetales. Entre mayor sea la intensidad de color, mayor será el contenido de carotenoides. Xantofilas: son compuestos químicos pertenecientes al grupo de los carotenoides que poseen uno o más átomos de oxígeno en su estructura. Se encuentran de forma natural en muchas plantas y presentan tam bién acción fotosintética. Estos pigmentos, más resistentes a la oxidación que las clorofilas, proporcionan sus tonos amarillentos y parduzcos a las hojas secas. Explique la diferencia entre cromatografía de adsorción y partición. Cromatografía de partición: La mayoría de las sustancias tendrán distinta solubilidad en diferentes solve ntes. Si una sustancia se pone en contacto con dos solventes que no se mezclan entre sí, se distribuirá e ntre los dos solventes en relación a su solubilidad en cada uno. Se llama efecto de partición a la distribuci ón de un soluto entre dos o más solventes que no se mezclan. El solvente o el líquido que es atrapado po r el medio del sostén sea este papel, gel, sílice o alúmina, se llama fase estacionaria. Al solvente revelad or se le llama fase móvil. Cromatografía de adsorción: La cromatografía de adsorción o liquido-sólido, es la forma clásica de croma tografía de líquidos. La adsorción se lleva a cabo cuando hay una concentración más alta en la superficie de un sólido que en la solución circundante. La adsorción se refiere al enlace de una sustancia a la superf icie de otra. Generalmente los adsorbentes usados en cromatografía son el carbón mineral, el gel de sílic e, y la alúmina. ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de la cromatografía en capa fina en comparación co n la cromatografía en columna? Cromatografía en columna: Las separaciones en la cromatografía en columna pueden realizarse por repa rto, adsorción o intercambio iónico. El estado físico del adsorbente ha de ser de tal manera que permita el empaquetamiento uniforme de la columna y el flujo libre de disolvente a través de ella. Cromatografía en capa fina: Cromatografía en papel y electro cromatografía. En todos los casos se emple a una capa plana y relativamente delgada de una materia que a la vez es el soporte o bien que recubre u na superficie de vidrio, plástico o metálica. La fase móvil se mueve a través de la fase estacionaria por ca pilaridad, a veces ayudada por gravedad o por aplicación de un potencial eléctrico. En la actualidad la cro matografía en plano se centra en la técnica de la capa fina, que es más rápida, tiene mejor resolución y es más sensible que su alternativa en papel. Explique la diferencia que existe entre el adsorbente utilizado en cromatografía en capa delg ada y el de columna. Hacer una lista en orden creciente de actividad. En columna: Puede usarse cualquier medio adsorbente siendo los más generales la celulosa,gel de sílice, alúmina oxido de magnesio, oxido de cálcico y carbón activo (para separaciones por adsorción y de intercambio iónico). Se emplea para la separación de mezclas o pur ificación de sustancias a escala preparativa. Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel de síli ce o alúmina dentro de una columna. La elección del disolvente es crucial para una buena separació n. Dicho disolvente pasa a través de la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicación de pr esión (cromatografía flash). La columna se prepara mezclando el soporte con disolvente Capa delgada Sílica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones) Óxido de Aluminio o Alúmina (ácida, neutra o básica) Celulosa (Nativa o micro-cristalina) Poliamidas Estos adsorbentes deben tener las siguientes características: o Tamaño de partícula pequeño o Diámetro de poro grande o Área superficial grande o Homogeneidad o Alta pureza Hacer una lista de los eluyentes usados común menteen cromatografía en columna y capa delgada en orden creciente de polaridad Cloruro de metilo Éter de petróleo Acetato de etilo Hexano Acetona Tolueno Etanol Benceno Metanol Cloroformo Lista de la capacidad de adsorción de los grps. funcionales de los compuestos orgánicos −COOH >−OH >−NH 2>−SH >−CHO≥C=O>−COOR>−−OCH 3 >−CH =CH −¿ ¿Qué compuesto es más retenido una amina o un alqueno, ejemplifique en un a capa Cromatográfica? Un alqueno, por su polaridad ¿Cómo se prepara el capilar para aplicar la muestra en la cromatoplaca? Se le aplica calor para así poder romperlo cuidando que quede un orificio no muy grande. ¿Por qué es necesario que la cámara de elusión esté saturada con los vapores deleluyente? Por que así será más fácil el arrastre de los pigmentos y no se secará la placa Explique cada uno de los siguientes términos: Eluyente: solvente que se usa en técnicas de cromatografía para extraer un compuesto que se quier e separar de otra fase. Eluato: la sustancia que se separa o sale de la columna después de cada extracción. Elución fraccionada: Aparato de elución fraccionada electroforético tiene una columna con una rotación conjunta de sello en el que un delgado chorro de elución búfer es dirigido a través de la luz de la columna electroforética en una dirección perpendicular a la de migración electroforética. El contenido de l a columna se gira en relación con el jet estacionario o se gira el jet con respecto a la columna. El sistema puede emplear electroforesis en solución libre o en columnas empaquetadas. Adsorción: Es un proceso por el cual átomos, iones o moléculas son atrapados o retenidos en la su perficie de otra sustancia o material. Partición: La separación se basa en las diferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases estacionaria y móvil. Elución: se produce por el flujo de una fase móvil a través de la fase estacionaria. Adsorbente: es un sólido que tiene la capacidad de retener sobre su superficie un componente pres ente en corrientes líquidas o gaseosas. Se caracteriza por una alta superficie específica y por su inercia química frente al medio en el que se va a utilizar. Actividad del adsorbente: El nivel de actividad de la adsorción depende de la concentración de la s ustancia en la solución, la temperatura y la polaridad de la sustancia. Afinidad por el adsorbente: es que la sustancia ceda a la capacidad de capilaridad del adsorbente y eluya a través de él. ¿Cómo se clasifica la cromatografía en función de su fase estacionaria? Naturaleza de la fase Clasificacion estacionaria Naturaleza de La fase Liquido Líquido-líquido: partición Líquido-sólido: adsorción, cambio movil iónico, exclusión,afinidad Gas Gas-líquido (CGL) Gas-sólido (CGS) ¿Cuál es la función de la fase móvil y como se lleva a cabo la separación en la cromatografí a de adsorción? Su función es eluir los componentes de la mezcla a separar a través de la fase estacionaria. La crom atografía de adsorción se lleva a cabo mediante el uso de una fase estacionaria donde se observará l a elución de los componentes de la mezcla, los cuales serán eluidos por el disolvente, que es la fase móvil. ¿Cómo se prepara la papilla para la cromatografía en capa fina?, por lo menos dos métodos. Se machaca con ayuda de un mortero y pistilo hasta hacer polvo la sílica, luego se añade el disolvent e. También se puede hacer en un vaso de precipitados y con una varilla de vidrio, agitando constante mente hasta formar la papilla. ¿Cuándo es conveniente activar una placa y cómo se activa? Antes de que se puedan usar las placas generalmente deben ser calentadas para retirar el agua que actúa como una impureza y evita una buena separación. La magnitud de calor depende del tipo de separación que se requiere para compuestos hidrófilos o polares, el secado al aire o con un secad or de pelo son generalmente suficiente; para los compuestos hidrofóbicos o no polares es necesario un calentamiento más intenso. Las placas de óxido de aluminio y de gel de sílice con adhesivo requie ren ser secadas al aire durante aproximadamente 30 min. Y después ser activadas en un horno a 10 0°C alrededor de 30 min. Las placas de celulosa deberán secarse al aire libre durante 30 min. y activarse al horno durante 10 min. a 105°C. ¿Qué espesor debe tener la fase estacionaria en una C.C.D.? No debe ser espesa ni muy aguada, debe deslizarse solo por la placa al momento de prepararla. Al comparar los Rf de dos componentes se encontró que eran iguales, ¿podría pensars e que se trata del mismo compuesto? Explique brevemente. Si, esto se concluye debido a que si ambos componentes eluyen de la misma manera, significa que tienen una polaridad muy semejante, por lo tanto podría inferirse que se trata del mismo componente. Explique brevemente si existe una relación entre la cantidad de adsorbente y las dimension es de la columna para una mezcla. Entre más grande sea una columna, más adsorbente se necesitará, esto para observar mejor la sepa ración de los componentes; además de necesitar más disolvente para continuar la elución y evitar la sequedad del sistema. ¿Cómo debe de ser la polaridad del eluyente al empacar una columna? La polaridad del eluyente debe ser mayor Con relación al R x : ¿Cuándo se usa el R x en cromatografía en capa delgada? Cuando no se cuenta con un compuesto con polaridad conocida, y por lo tanto elusión conocida, que se pueda usar como referencia en la C.C.D. ¿Qué significa la obtención de R x igual a uno? Que el compuesto y el eluyente tienen la misma polaridad, incluso hasta mayor la de este último. ¿Cuál es el orden de polaridad en que salen los compuestos de una cromatografía en columna? En la cromatografía de columna las moléculas de una mezcla son separadas en base a la afinidad de las moléculas por la fase estacionaria o por la fase móvil. Si una molécula A tiene más afinidad por la fase estacionaria que la B, B bajará más rápido que A. Éter de petróleo Hexano Tolueno Benceno Cloroformo Cloruro de metilo Acetato de etilo Acetona Etanol Metanol ¿A qué se le llama frente del eluyente en cromatografía en capa delgada? Demuéstrelo en una placa. Es la línea donde acaba la elusión, si se rebasa dicha línea se corre el rie sgo de que los componentes separados se esparzan a lo largo de la parte posterior de la placa. ¿Cómo se controla la salida de los componentes en una cromatografía en columna? Se controla con la llave de la bureta, se va colocando los distintos pigmentos en tubos de ensayo, a los que se les denominará como fracciones. ¿Por qué no debe dejarse secar la columna cromatografía? En caso de que se fracture ¿qué se recomienda hacer? Porque de no ser así la fase estacionaria se contraería y agrietaría. Se de be rehidratar conmás eluyente si esto ocurre. ¿Por qué es importante que las muestras a separar por cromatografía deban estar lo más secas posible? Para que no interfiera el agua con la elución, por medio del disolvente, d e los componentes de la muestra. ¿Por qué al cargar una columna se recomienda que la muestra lleve la mínima cantidad de disolvente? Las cantidades altas de flujo dan malas separaciones, el promedio es de 3a 4mL/min. en una columna de 40 cm de altura aprox. ¿Qué pH presenta la alúmina? Mencione los tres casos. Presenta tres pH: alúmina ácida pH de 4.5, alúmina básica pH de 10.0 y alúmina neutra pH de 8.0. ¿Por qué cuando se usa alúmina como adsorbente no se recomienda usar acetona como eluyente? Porque se desnaturaliza y queda pegada en las paredes de la columna. ¿Cuáles son los pasos a seguir para la preparación de una placa preparativa? Las separaciones en capa fina características se realizan en placas de vi drio o plástico que se recubren con una capa delgada y adherente de partícula s finamente divididas, esta capa constituye Ia fase estacionaria. Las partí culas son semejantes a Ias de Ia cromatografía en columna. Las capas fi nas preparadas sobre vidrio se denominan cromatoplacas o placas simplemente. ¿Cuál es la aplicación de la cromatografía en placa preparativa? La elección de un eluyente ideal para cromatografía en columna. ¿Qué diferencia existe entre cromatografía en capa delgada analítica y cromatografía en placa preparativa? La preparativa se emplea generalmente para elegir un eluyente o mezcl a de eluyentes ideal para cromatografía en columna. La analítica ya cuenta c on un eluyente ideal y registra Rx es decir, se analiza la elusión de los componentes para arrojar un valor numérico final. ¿Cómo se clasifican los reveladores en forma general? Químicos y físicos. Cuando una sustancia orgánica no se revela con I2 o luz UV, ¿qué ot ros reveladores pueden usarse para observar la sustancia? Con reveladores químicos específicos para los componentes separados.