Universidad Andrés BelloFacultad de Ciencias de la Salud Departamento de Ciencias Biológicas Laboratorio de Biología Celular BIO 035 TRABAJO PRACTICO N°4 COMPONENTES QUIMICOS DE LA CELULA Alumnos: Luis Alarcón Fabián Escobar Catalina Negri Alondra Barraza Sección: 3 Profesoras: Fernanda Rodriguez Agustina Undabarrena 2015 se manifiesta un precipitado rojo ladrillo que corresponde al oxido cuproso. en el momento de aplicar calor en presencia de un hidrato de carbono reductor (glucosa). ya sea. procesar información. La presencia de lípidos se puede determinar gracias a su condición hidrofóbica y la de algún ion inorgánico mediante reacciones específicas que presenten precipitados. lípidos y ácidos nucleicos. Para reconocer dichos azucares en cuestión se utiliza el método de reacción de Somogyi. cada uno de estos compuestos cumplen una función de gran importancia en la célula. Para la identificación de polisacáridos es factible utilizar la prueba de lugol. el cual brinda a la muestra un color azul-violeta que permite identificar la presencia de proteínas.Introducción Las células son unidades estructurales sumamente complejas las cuales son capaces de crecer. la cual consiste en una mezcla de yoduro de potasio con yodo la cual al encontrarse con el polisacárido produce una coloración azul-violeta.1 En conceptos generales. responder a diversos estímulos y llevar a cabo una gran variedad de reacciones químicas.2 Siendo así que surge la siguiente interrogante . permitiendo íntegramente su identificación. proteínas. iones inorgánicos y moléculas orgánicas tales como hidratos de carbono. Este color producido es debido a que el yodo queda atrapado entre dos tipos distintos de cadenas que conforman la estructura química de este. lo que forman hidróxido de cobre y hace que este compuesto tome un color azulado. Los monosacáridos y algunos disacáridos muestran una importante capacidad reductora que posibilita su reconocimiento en distintos tipos de muestras. Las proteínas también tienen una acción enzimática conocida como la enzima catalasa la que convierte el peróxido de hidrogeno en agua y oxigeno por lo que su presencia se puede determinar permitiendo esta reacción. reproducirse. Para la identificación de proteínas se puede utilizar el reactivo de Biuret que se describe como una solución alcalina de cobre el cual reacciona con los enlaces peptídico de las proteínas específicamente con los grupos aminos formando un enlace coordinado. Para reconocer dichos compuestos en la célula de cada sustancia en estudio se tienen diversos métodos que nos permiten identificarlos. En este método. compuesto por sulfato de cobre e hidróxido de sodio. como la orina y la leche. como componentes estructurales o funcionales. que servirá de marcador. las células están compuestas por agua. . Reconocer la presencia de sustancias específicas de origen tanto orgánico como inorgánico presentes en diversas soluciones. Reconocer y entender la efectividad en el uso de tinciones mediante la utilización de soluciones y métodos asociados.¿Mediante estas reacciones es posible obtener no solo resultados cualitativos sino que también cuantitativos aproximados? Objetivos. que debían estar preparados con una concentración al 1%. Luego se procedió a llenar cada tubo de ensayo con un 1 ml. almidón hidrolizado. Posteriormente. almidón. 1ml de Somogy a cada una de las muestras. de las cuales sus componentes eran desconocidos. ya que fueron presentados como compuestos incógnitos. no se requiere la aplicación de calor u otro procedimiento específico. Este es un reactivo que necesita calor. pero si se necesita agitar delicadamente el tubo de ensayo para poder mezclar debidamente ambos compuestos y así poder . es decir. los tubos debieron ser extraídos del calor con mucho cuidado. la actividad número 2. agua destilada. se agregó de la misma manera. Luego se procedió a preparar cada uno de los compuestos. consistió en la detección de polisacáridos en los compuestos. para poder visualizar el resultado de la reacción. a través de la utilización del reactivo de Lugol. agua destilada. para así poder llenar de manera exacta cada tubo de ensayo. la profesora realizo una introducción de la célula y sus diferentes componentes específicos. los alumnos por su cuenta debían descubrir. vertido debidamente con la pipeta. 1 ml de cada una. Más tarde. a través de la utilización de una pipeta. Terminado el tiempo. para luego dar lugar a la realización de 5 actividades. los tubos de ensayo fueron puestos a baño termorregulador a aproximadamente 90° durante 3 minutos. los cuales eran: glucosa. y las soluciones A y B. leche. hidrolizado y las soluciones A y B) y el mismo volumen. los cuales. los cuales se detallan a continuación: En primer lugar. almidón. NaCl. En este caso. leche.Materiales y Métodos Para la realización del presente laboratorio. Luego se procedió a agregar 1 ml de reactivo de Lugol a cada una de las muestras. Para realizar esta actividad se utilizaron las mismas muestras utilizadas en la actividad anterior (glucosa. La actividad numero 1 consistió en identificar monosacáridos en las diferentes muestras gracias a la reacción con el reactivo de Somogy. Se dispuso de 8 tubos de ensayo destinados a esta actividad los cuales fueron marcados con su respectivo número. por lo cual. NaCl. se siguieron una serie de pasos. almidón. Terminado esto. En el primer tubo de ensayo. Acabado este tiempo. se adiciono agua y la muestra fue puesta a hervir en el baño termo regulado durante 30 minutos. 1 ml de agua. en cada uno. en los cuales. Solución B más Oxido de Amonio. El desarrollo de este experimento fue de la siguiente manera: Se designaron 6 tubos de ensayo. se observaron los resultados obtenidos. solución A y solución B. también fueron colocados unos trozos de hígado. se introdujo un trozo de hígado. se quitó el exceso de agua y se añadió peróxido de hidrogeno. leche. se debió agitar el tubo de ensayo con unos pequeños golpecitos para poder lograr la mezcla de forma adecuada. y luego aplicamos 1 ml de Biuret. la detección de la enzima catalasa. acabados los experimentos. en los cuales. Luego la actividad número 4. la cual consistió en la detección de proteínas en los diferentes compuestos a través de la utilización del reactivo de Biuret. Para este experimento fueron designados 7 tubos de ensayo. se ejecutó la actividad número 6. solución glicina. Posteriormente. luego fue adicionado 1 ml de Peróxido de Hidrogeno y se examinaron los resultados obtenidos. se procedió a tabular los resultados obtenidos en cada una de las actividades realizadas. posteriormente. clara de huevo. Sol A más Oxalato de Amonio y Solución B más Nitrato de Plata. para finalmente agitar la mezcla y así poder observar los resultados obtenidos. la cual consistió en la mezcla de 2 compuestos diferentes y ver la reacción de ello. fue debidamente retirado. y en el segundo 1 ml de aceite más 1 ml de éter. En este caso. específicamente. Para esto. Finalmente. y luego fue debidamente agitado para poder observar si el resultado era un color transparente o un blanco lechoso. se agregó 1 ml de cada compuesto designado para la realización de la mezcla. se colocó. Finalmente. 1 ml de aceite más 1 ml de agua. En el primero. se realizó la actividad número 5. Cacl2 mas Oxido de Amonio. En el segundo tubo de ensayo. la cual consistió en el reconocimiento de enzimas. respectivamente a cada tubo de ensayo. se utilizaron 2 tubos de ensayo. Las mezclas efectuadas fueron las siguientes: CaCl2 mas Nitrato de Plata.visualizar los resultados obtenidos al mezclar cada una de estas sustancias con el reactivo de Lugol. para esto se destinaron 2 tubos de ensayo. se continúa con la realización de la actividad número 3. . consistió en la detección de lípidos. Sol A más Nitrato de Plata. NaCl al 1%. con la ayuda de una pipeta. Posterior a esto. Violeta traslucido Experimento N°1 Reconocimiento de Hidratos de Carbono/ Identificación de monosacáridos mediante la reacción de Somogyi.Resultados N ° 1 Muestra Color Inicial Color Final Reacción Agua Destilada Transparente Negativa (-) 2 Glucosa Transparente Azul traslucido Anaranjado traslucido 3 Almidón Transparente Negativa (-) 4 Transparente Negativa (-) No 5 Cloruro de Sodio (NaCl) Leche Azul traslucido Azul traslucido Azul lechoso Precipitado denso al fondo de la muestra No Negativa (-) No 6 Almidón Hidrolizado No Solución A Anaranjado opaco Anaranjado claro lechoso Positiva (+) 7 Transparente opaco Transparente No 8 Solución B Transparente Reacciona un poco/ Positiva (+) Negativa (-) Blanco Positiva (+) Azul. N ° Muestra Color Inicial Color Final Reacción Formación de precipitado 1 Agua Destilada Transparente Negativa (-) No 2 Glucosa Transparente Negativa (-) No 3 Almidón Transparente Positiva (+) 4 Cloruro de Sodio (NaCl) Transparente Amarillo traslucido Amarillo traslucido Amarillo Azulado Traslucido Amarillo Traslucido Precipitado denso al fondo de color azul No Negativa (-) . Formación de precipitado No No Experimento N°2 Reconocimiento de Hidratos de Carbono / Identificación de Polisacáridos mediante la prueba del Lugol. . estos no se juntan. Agua transparente y aceite amarillento Éter + Aceite Transparente Los dos compuestos forman una mezcla homogénea.5 Leche Blanco 6 Almidón Hidrolizado Transparente opaco 7 Solución A Transparente 8 Solución B Transparente Blanco lechoso Amarillento Amarillo Azulado Traslucido Amarillo Azulado traslucido Amarillo traslucido Negativa (-) No Positiva (+) Precipitado denso al fondo de color azul Precipitado denso al fondo de color azul No Positiva (+) Negativa (-) Experimento N°3 Reconocimiento de Proteínas / Reacción de Biuret N° Muestra Color Inicial Color Final Reaccion 1 Agua Destilada Transparente Negativa (-) 2 Glicina Transparente Negativa (-) No 3 Clara de Huevo Transparente Amarillento Celeste traslucido Celeste Traslucido Azul intenso – Violeta Formación de precipitado No Positiva (+) 4 Leche Blanco Positiva (+) 5 Transparente Negativa (-) No 6 Cloruro de Sodio (NaCl) Solución A Positiva (+) No 7 Solución B Transparente Violeta lechoso Celeste Traslucido Azul intensoVioleta traslucido Celeste-Violeta traslucido Precipitado muy denso en casi toda la muestra No Positiva (+) No Transparente Experimento N°4 Reconocimiento de Lípidos Muestra Color Inicial Observación Color Final Agua + Aceite Transparente Los dos compuestos no se forman una mezcla homogénea. Experimento N°5 Reconocimiento de Sales Minerales Muestra Cloruro de Calcio + Nitrato de plata Precipitado No Cloruro de Calcio + Oxido Amonio No Solución A + Nitrato de Plata Se forma un precipitado en la solución. estas se concentran más en la orilla del tubo . Solución B + Oxido Amonio No Solución A + Oxido Amonio No Solución B + Nitrato de Plata No Experimento N°6 Reconocimiento de Enzimas Muestra Color Inicial Observación luego de adición de Peróxido de Hidrogeno Hígado Crudo Rojo intenso Hígado Cocido Café claro Se forma una cantidad de burbujas que sobrepasan la capacidad del tubo. Poca formación de burbujas. el hígado burbujea también hasta quedar de un color café muy claro. almidón hidrolizado. NaCl al 1%. En lo que respecta a las demás muestras se obtuvieron resultados similares entre ellas con una tonalidad azul-violeta y celeste. Siendo así como en las muestras tanto de agua destilada. Los resultados obtenidos concuerdan con la información investigada4. nacl. ya que. leche y solución “B” se obtuvo un color amarillo claro. almidón. tornándose cada una de las soluciones con un color azul violáceo. almidón hidrolizado y la respectiva solución “A” cuyo contenido era incognito. para la identificación de monosacáridos presentes en las respectivas soluciones acuosas (glucosa. El objetivo de la actividad número 2 era la identificación de polisacáridos utilizando el mismo método y soluciones que la actividad número 1 pero con el reactivo “Lugol”. el cual en presencia de polímeros de monosacáridos reacciona cambiando también la tonalidad de las soluciones.) fue posible registrar el cambio esperado en la mayoría de las reacciones según el respaldo bibliográfico3 el cual determina que “Cuando el reactivo Somogyi se calienta y está en presencia de un carbohidrato reductor. leche.Discusión Tras la realización del experimento en la actividad 1. No así las muestras que contenían almidón al 1%. glucosa. y las soluciones “A” y “B” (compuestos incognitos)) a través de la reacción de “Somogyi” en presencia de calor aplicado con un baño termorregulador (90°c aprox. se forma una coloración naranja u roja intensa”. dependiendo de las ramificaciones que presente la molécula de polisacáridos es el contraste de colores obtenidos tiñendo a la muestra violeta oscuro. la aparición de un precipitado en el fondo de cada una de estas soluciones que en contraste con la bibliografía se puede predecir tentativamente que se debe a la variación de densidades tanto del reactivo como del reactante utilizados en el experimento. agua destilada. siendo determinantes específicamente en las muestras que contienen Glucosa al 1% obteniéndose un color marrón anaranjado y Leche la cual también se tornó de la misma tonalidad. . siendo así aún más concluyente. lo que se produce gracias a que el yodo del “lugol” queda inmovilizado dentro de las hélices que son el resultado de la unión entre las moléculas del polisacárido5. NaCl al 1%. Tras realizado el procedimiento correspondiente se obtuvo una coloración azul-celestina en cada una de las mezclas siendo considerablemente más intensa esta tonalidad en las muestras que contenían leche . debido a que ambos compuestos son de carácter No polar. clara de huevo y la solución incógnita “A” debido. El aminoácido glicina presento una reacción negativa pese a que tentativamente se podría esperar lo contrario. Solución “B” más Oxido de Amonio. Leche. como se especifico es un aminoácido (estructura básica de una proteína) pero este no genera un enlace peptídico que es necesario para concretar una reacción positiva debido a esto el reactivo de biuret no causo un cambio de coloración en su composición.7 En lo que respecta a la actividad número 4 se llevó a cabo la identificación de lípidos y principalmente la determinación de sus propiedades físicas. en cuanto a su capacidad hidrófoba respecto de sus cargas. sin la aparición de ningún tipo de capa o fenómeno físico que permitiera detectar la presencia de una mezcla. Cacl2 mas Oxido de Amonio. Clara de huevo. ya que. Las cuales se hicieron evidentes en el momento en que las soluciones de Agua y Aceite hicieron contacto entre sí. la solución formada fue totalmente homogénea y ambas sustancias se mezclaron de manera que a ojo descubierto no se era posible detectar diferencia alguna entre una y otra. Sol “A” más Oxido de Amonio y Solución “B” más Nitrato de Plata en sus respectivos tubos de ensayo y obtener diferentes reacciones para así la determinación de las sustancias presentes en las soluciones incógnitas “A” y “B” . es decir. según el respectivo respaldo bibliográfico6. la presencia de enlaces peptídicos (grupo amino con Cu+2 del reactivo) y por consiguiente la presencia de proteínas. glicina. Sol “A” más Nitrato de Plata. De tal forma que al agitar el tubo de ensayo la capa definida se hizo más difusa pero no se perdió tal capacidad hidrofóbica y por consiguiente la aparición de burbujas aisladas de Aceite entre si también se hizo clara y concluyente.8 El objetivo de la actividad numero 5 consistió en la mezcla de CaCl2 mas Nitrato de Plata. en contraste. no presentan densidades de cargas opuestas.Posteriormente mediante la reacción de Biuret se busca identificar en soluciones de Agua destilada. de las cuales se puede . ya que. solución “A” y solución “B”. No así lo sucedido con la muestra que contenía las soluciones de Aceite y Éter. a la cantidad y capacidad proteica presentes en dichas sustancias y la presencia efectiva de enlaces peptídicos. formándose dos capas definidas de una sustancia y la otra. que por consiguiente mantuvo tanto su estructura como su función. debido a que la solución de Nitrato de plata con la solución “A” otorgo una reacción positiva siendo así que la reacción de la solución “B” con oxalato de amonio (el cual reacciona con calcio) otorga una tonalidad transparente destacándose que no hay reacción en ausencia de calcio. Debido a la carencia de bibliografía que respalde de manera concluyente los hechos observados no es posible predecir de manera exacta el contenido de las soluciones “A” y “B” quedando solo explicaciones tentativas9. cambiando su estructura e inhibiendo sus funciones en contraste de una muestra que fue expuesta a temperatura ambiente. el cual reacciono de manera que la muestra expuesta a temperaturas elevadas no mostro una cantidad razonable de espuma. . De manera última se realizó el experimento de la actividad número 6 el cual consistía en la detección de la enzima catalasa mediante la aplicación de temperaturas elevadas mediante un baño termorregulador (94°C aprox. Esto se determinó al aplicar una solución de peróxido de hidrogeno.) que produce la desnaturalización de está. en tanto la muestra expuesta a temperatura ambiente demostró una cantidad de espuma que supero la capacidad del tubo de ensayo que la contenía debido a la característica de descomposición del peróxido de hidrogeno en agua y oxígeno.predecir contienen Cloruro de calcio y Cloruro respectivamente. demostrando la presencia activa de la enzima catalasa en la muestra10. aunque se puede determinar la presencia de compuestos de manera cualitativa. Las soluciones tratadas con Lugol facilitan el reconocimiento de polisacáridos en muestras acuosas. Es así como también podemos concluir de manera específica que: El reactivo de Somogyi. Mediante una muestra de hígado. en consecuencia. Para determinar las cualidades físico-químicas de los lípidos en cuanto a su capacidad hidrófoba se debe hacer en contraste con un disolvente apolar como el éter. en diferencia con una muestra con la enzima y la otra con ella inhibida a través de la desnaturalización por calor. permite identificar la presencia de monosacáridos en soluciones acuosas. Finalmente podemos agregar que los recursos visuales como el color o fenómenos físicos observables entregados por las diferentes reacciones son determinantes a la hora de obtener resultados que permitan un correcto análisis. Siendo así que la interrogante en cuestión se responde de manera negativa. verificar la presencia de proteínas en soluciones acuosas. Mediante el reactivo de Biuret se puede hacer análisis cualitativo de la presencia de enlaces peptídicos.Conclusión Tras la realización del presente práctico de investigación podemos concluir de manera general que la utilización de recursos químicos permite y facilitan la realización de experimentos específicos con el fin de lograr conocimientos profundos de las características y composiciones químicas de la materia considerando un origen tanto orgánico como inorgánico. . se puede reconocer la presencia de la enzima catalasa. ya que. no se puede determinar de manera cuantitativa en ningún caso a no ser que se aplique un criterio que especifique una escala de colores con valores referentes para cada reacción. siendo así el caso aún se requiere de estudios anexos que sean concluyentes. en presencia de calor. unlp.edu/9876667/Determinaci%C3%B3n_de_la_concentraci %C3%B3n_de_az %C3%BAcares_reductores_en_Malus_domestica_Rosaceae_por_un_m %C3%A9todo_fotom%C3%A9trico.mx/revistauniversidadcentralmexico/Revista_1998_2/bitacora. Guía de laboratorio N°4 : COMPONENTES QUÍMICOS DE LA CÉLULA. http://catedras. Zipursky. (Junio del 2006). Pp..net/lizbethdamazogalvez/factores-que-influyen-en-la-actividadenzimtica Fecha de ingreso: 26/05/2015 . UNAM.slideshare.shtml Fecha de ingreso: 26/05/2015 http://m. Matsudaira. Lodish.ar/qo3/Apuntes/Biuret.shtml Fecha de ingreso: 26/05/2015 http://es.academia.quimica.com. curso Bio035 biología general. 2005. 2015 Estela Sandoval Z.edu. Fecha de ingreso: 26/05/2015 4 5 6 7 8 9 10 -Universidad Andrés Bello. 5a edición. Kaiser Krieger. Editorial Médica Panamericana.monografias. Biología Celular y Molecular. Guía de laboratorio N°4: Componentes químicos de la célula.pdf Fecha de ingreso: 26/05/2015 www. curso BIO035 Biología General.smbb. Darnell. Universidad Andrés Bello. Buenos Aires – Argentina. 2015 http://www.pdf Fecha de ingreso: 26/05/2015 http://www.com/trabajos73/analisis-cualitativo-cationes/analisis-cualitativocationes2.com/trabajos16/lipidos/lipidos.monografias. “Técnicas aplicadas al estudio de la anatomía vegetal”.Bibliografía 1 2 3 Berk. 1.