[email protected] de las chaperonas In vitro Concentración estimada de proteínas de una célula típica = 300 mg/ml DnaJ: 41 kDa Chaperona Factor GrpE: 23 kDa . Dominio ecuatorial Bolsillo unión ATP .14 sub-unidades idénticas 2 anillos de 7 unidades c/u Dominio apical aas hidrofóbicos . Mas heterogéneo en secuencia y estructura Anillos entre 8 y 9 Ausencia de GroES Eucariótica (Tailless complex polipeptido-I) . Citosólicas Chaperona dependiente de ATP Maquinaria multichaperona en el citosol: Hsp70 Peptidil-propil-isomerasas Otras cochaperonas .Complejo multiproteico denominado: foldosoma No actúa en polipéptidos nacientes. Actúa en proteínas con señal de traducción: Receptores de hormonas esteroides Señalización de quinasas Factores de transcripción Es altamente abundante en células eucariotas ˜ 2% prot. 5 a 8.P23 Co-chaperona Estimula hidrólisis ATP Dependiente de disociación Hsp90/sustrato Tamaño de la cavidad: 2.5 nm En GroEL: 6.0 nm .5 a 5. Dominio de unión al ligando INESTABLE . Drosophila No permite la unión a DNA . Regulación de la expresión del monómero INACTIVO “Humanos” .Factor de transcripción (HSF)1 bajo condiciones de NO estrés. P R O T E A S O M A . Proteasoma . .(Ornitina decarboxilasa) NF-B . . ✄ Sistema inmune. ✄ Degradación de proteínas anómalas. músculos requieren aas para convertirlos en glucosa y quemar energía. ejercicio. control de calidad ✄ Activación de procesos celulares. ✄ Comunicación célula/célula ✄ Endocitosis ✄ Trascripción ✄ Reparación DNA ✄ Traducción de señales ✄ Apoptosis . después de cumplir su función. generando péptidos blancos que sean reconocidos por este. ej: ciclo celular. mediante degradación de proteínas inhibitorias criticas. ✄ Metabolismo. Bazo y nódulos linfoides = Inmunoproteasoma.Funciones de Proteasoma poli-ubiquitinación ✄ Degradación de proteínas. . maquinaria enzimática .Vía UBIQUITINA PROTEASOMA .Compleja Involucra 100 componentes (hasta ahora) ✾ ✾ ✾ ✾ Proteasoma = 30 sub-unidades diferentes ubiquitina dependiente ATP dependiente Estructura compleja. . . 30. desdobla proteínas.Mayor proteasa no-lisosomal en células eucariotas.000 proteasomas/célula › › › › 19S Regulador Reconoce sustratos poli-Ubiquitina Actv. Isopeptidasa. corta la Ubiquitina Abre el poro de 20S Actividad antichaperona. . . . 30.3S (-) hidrofóbica V 84 nm3 .2 Mda . 70 kDa Micrografía inmuno-electrónica 20S de placenta humana 45 nm long CAP-19S 18 proteínas (25 a 110 kDa = 700 kDa) . C .OH ı CH3 1(Pre3) Peptidil glutamil hidrolasa. Reconoce después de res. Reconoce sec después de aas básicos 5(Pre2) Quimotripsina.COOı H . hidrofóbicos . después de aas ácidos 2(Pup1) Tripsina.Proteasoma 20S Levadura + H ı H3N .C . Reconoce sec. a chymotrypsin-like. a trypsin-like and a peptidyl glutamyl peptide hydrolysing activity. In all three of these β-subunits an aminoterminal threonine is the catalytically active amino acid. These three different activities are formed by three of the seven different β-subunits.The enzyme contains three different catalytic activities. . . Funciones de mono-ubiquitinación Modificaciones regulatorias ✄ ✄ ✄ ✄ ✄ Transcripción Función histonas Tráfico de proteínas a través de membranas. blancos para los lisosomas Señalización para receptores endocíticos . Elongación de la cadena . reacción alta E. eu. Conjugadora de Ubiquitina. (> que E2) E4: Factor conjugador de cadenas de poli-Ub. ATP. activadora de Ubiquitina (1 sola enzima E1.) E3: Ligasa de la proteína-Ubiquitina. thiol-ester (10 a 30 E2s eu.) E2: Enz.Ubiquitina:76 aas (eucariotes. Coo– G/K) E1: Enz. parece que es el único componente sujeto a regulación. . Activadora Conjugadora Ligasa . deubiqutinante .Unión tioester G76 K48 Enz. . Estructura Jerárquica del sistema ubiquitina . . . . . Proteasoma GroEL . .Gracias. ..