CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS, DICIEMBRE 3 AL 7, 20011 UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA DEPARTAMENTO DE FARMACIA GUIA PARA EL RECONOCIMIENTO DE DROGAS VEGETALES POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA Elaborado por: GLORIA AMPARO VALENCIA P. ALEJANDRO MARTINEZ M. Medellín, Diciembre de 2001 Gloria Amparo Valencia P., y Alejandro Martínez M. 3-0. de droga pulverizada se extrae durante 10 minutos con 10 ml de Metanol a 60°C sobre un baño de agua. DICIEMBRE 3 AL 7. y deoxialiína (=S-alil-cisteína). Fase estacionaria: Fase móvil: Revelador: Rf 0. Artemisia absinthium L. Las hojas contienen 0. cistina. sulfóxido de metionina. de 2 ml. La mezcla se filtra y el filtrado se evapora hasta un volumen aprox. 2001 2 Práctica 1 RECONOCIMIENTO CROMATOGRÁFICO DE PLANTAS MEDICINALES APROBADAS EN COLOMBIA RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE AJENJO. . Allium sativum. cicloaliína. Asteraceae Introducción La droga la constituyen las hojas y flores. Extracción 1 g. junto con otros aminoácidos azufrados y sulfóxidos de cisteína. Extracción 25 g. de dientes frescos finamente desmenuzados se extraen en frío (con ayuda de hielo seco) con 2 porciones de 100 ml de metanol al 80%.. y Alejandro Martínez M. controlando las fracciones con Reactivo de Ninhidrina.4 Sílica gel 60F-254 Cloroformo:Metanol 95:5 Liebermann-Burchard/UV 365 nm SIJSTANCIA Absinthina COLOR amarillo ocre RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DEL AJO.CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS.3% de principios amargos (absinthina y anabsinthina). aliína (= sulfóxido de S-alilcisteína).. Gloria Amparo Valencia P.15%. Liliaceae Introducción El bulbo o diente contiene cisteína. Se purifica por cromatografía en columna. mientras que las flores contienen un 0. las cuales contienen sesquiterpenlactonas como cinaropicrina.. 2 ml Fase estacionaria: Fase móvil: Revelador: Sílica gel 60F-254 Acetato de etilo:Acido fórmico:Acido acético:Agua 100 : 11 : 11 : 27 Polietilénglicol para productos naturales/UV 365 nm Rf 0. ácidos fenolcarboxilicos como 1. Acido clorogénico Rutina COLOR Azul fluorescente Amarillo Azul fluorescente Amarillo Gloria Amparo Valencia P. y luteolina-7-O-glucósido.7 0. .4 SIJSTANCIA Cinarina Luteolina-7-0-gluc. y Alejandro Martínez M. grossheimina y cinarina.45 0.7 SUSTANCIA Alicina Aliína COLOR Naranja Azul-violeta RECONOCIMIENTO DE LA ALCACHOFA POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA Introducción La droga la constituyen las hojas. de droga pulverizada se extrae durante 10 minutos con 10 ml de metanol a 60°C sobre un baño de agua.CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS. Extracción 1 g.6 0. DICIEMBRE 3 AL 7.5 0. clorogénico y neoclorogénico. un flavonoide. 2001 3 Fase estacionaria: Fase móvil: Revelador: Sílica gel 60 n-Butanol : n-Propanol : Acido acético glacial : Agua 30 : 10 : 10 : 10 Ninhidrina Rf 0.3dicafeoilquínico. La mezcla se filtra y se evapora hasta un volumen de aprox. Lamiaceae Introducción La droga la constituyen las hojas y ramas jóvenes.Acido sulfúrico SUSTANCIA Linalool Metilchavicol COLOR Azul intenso Rojo violeta RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE LA HIERBABUENA. de droga pulverizada se extrae por agitación durante 15 minutos con 10 ml de diclorometano. y Alejandro Martínez M. acetato de dihidrocarveol. en la placa cromatográfica.. limoneno y felandreno.45% de aceite esencial. Lamiaceae Introducción La droga la constituyen las hojas. alcohol dihidrocuminílico. y se aplican 50-100 mL..1-0. Gloria Amparo Valencia P. b) Con Diclorometano 1 g. 62. Ocimum basilicum. El aceite esencial contiene principalmente metilchavicol 55% y linalool. Mentha viridis L. DICIEMBRE 3 AL 7. Extracción a) Por arrastre con vapor de agua Método oficial de la Farmacopea Europea III. El residuo se disuelve en 1 ml de Tolueno. pág. 2001 4 RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE LA ALBAHACA.3 0. pineno. las cuales contienen 0.9 Sílica gel 60 Tolueno : Acetato de Etilo 93 : 7 Vainillina.2% de aceite esencial. . mentol. las cuales contienen 1.CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS. El aceite contiene principalmente L-carvona 42-67%. Fase estacionaria: Fase móvil: Revelador: Rf 0. El filtrado obtenido se evapora a sequedad. 8% en la variedad dulce. Acido sulfúrico concentrado Gloria Amparo Valencia P. safrol. los cuales contienen 2-7% de aceite esencial.Vainillina-Acido sulfúrico 2. DICIEMBRE 3 AL 7. . 62.4-0. Apiaceae Introducción La droga la constituyen los frutos. Foeniculum vulgare.25 0. PMA-Permanganato de potasio 3. El aceite esencial contiene principalmente anetol (50-80% en la variedad dulce. de muestra. metilchavicol. 12-22% en la variedad vulgare). anisaldehído y fenchona (0.CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS. Extracción 1) Destilación por arrastre con vapor de agua Según el método oficial de la Farmacopea Europea III..46 0. y Alejandro Martínez M. 500 ml de agua. utilizando 10 g. pág.7 Sílica gel 60 Tolueno : Acetato de Etilo 93 : 7 Vainillina-Acido sulfúrico SUSTANCIA Alcohol dihidrocumínico Carvona Acetato de dehidrocarveol COLOR Azul intenso Rojo-Violeta Azul intenso RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE HINOJO. Fase estacionaria: Sílica gel 60 Fase móvil: Tolueno : Acetato de Etilo 93 : 7 Reveladores: 1. 2) Extracción con diclorometano Tal como se describió para la albahaca. 200 ml de agua. 2 horas de destilación a un flujo de 3-3.5 ml /min. 60-80% en la variedad vulgare). 2001 5 Extracción 1) Destilación por arrastre con vapor de agua Se utiliza el método oficial de la Farmacopea Europea III pág. 2) Extracción con diclorometano Como se describió para la albahaca Fase estacionaria: Fase móvil: Revelador: Rf 0. 2 horas de destilación a una rata de 2-3 ml /min. 62 con 50 g de muestra. poliínas 1-40%. bisabolol óxidos A y B (ambos 10-25%).CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS. Asteraceae Introducción La droga la constituyen las flores. Malvaceae Introducción La flor contiene la malvina. 1 parte de ácido al 25%). DICIEMBRE 3 AL 7.5-diglucósido COLOR Violáceo RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE LA MANZANILLA MATRICARIA. y Alejandro Martínez M. Gloria Amparo Valencia P. farneseno 15%. las cuales contienen 0. . Extracción 1 g.5% de aceite esencial. de droga pulverizada se extrae por agitación durante 15 minutos con 6 ml de Metanol:Acido Clorhídrico (9 partes de metanol.6 0. 2001 6 Rf 0. un pigmento que le confiere el color característico. El aceite esencial a su vez contiene chamazuleno 0-15%.9 SUSTANCIA Fenchona Anetol REVELADOR 3 1 2 3 COLOR Azul oscuro Rojo-Violeta Rojo-Pardo Azul oscuro Nota: La fenchona no se detecta en estas condiciones para el anís. RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE LA MALVA.4 SUSTANCIA Malvina (=Malvidin-3. Malva sylvestris. bisabolol 10-25%. lo que permite diferenciar las dos plantas. Fase estacionaria: Fase móvil: Reveladores: Sílica gel 60F-254 n-Butanol : Acido acético glacial : Agua 40 : 10 : 20 Ninguno Rf 0. Se utilizan 25 ml del filtrado para la cromatografía. Matricaria chamomilla.5-1.. 95 0. III pág.y beta-pineno.25 0. Extracción a) Destilación por arrastre con vapor de agua Según método oficial de la Farm.5-0.2 0.35 0. DICIEMBRE 3 AL 7. Fase estacionaria: Fase móvil: Revelador: Rf 0. b) Extracción con Diclorometano Tal como se ha descrito para la albahaca.6 0. Rosmarinus officinalis. borneol 10-20%. . 2001 7 Extracción a) Destilación por arrastre con vapor de agua Según método oficial de la F. 4 horas de destilación a 3-4 ml/minuto. 62. Eur. Fase estacionaria: Fase móvil: Revelador: Sílica gel 60 Tolueno : Acetato de Etilo 93 : 7 Vainillina-Acido sulfúrico Gloria Amparo Valencia P. Eur. III pág. 500 ml de agua destilada de una solución de cloruro de sodio al 1%.8-cineol 15-30%. y Alejandro Martínez M.CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS.99 Sílica gel 60 Tolueno : Acetato de Etilo 93 : 7 Vainillina-Acido sulfúrico SUSTANCIA Oxidos A y B de bisabolol Alcohol terpenoide Bisabolol Poliínas Azuleno Farneseno COLOR Amarillo/Verde Violeta Violeta Pardo Rojo violeta Azul-Violeta RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DEL ROMERO. Lamiaceae Introducción Las hojas contienen 1-2% de aceite esencial. b) Extracción con diclorometano Tal como se describió para la albahaca.. acetato de bornilo. alfa. camfeno 5-10%. 62 con: 50 g de muestra. el cual contiene principalmente 1. 95 --- SUSTANCIA Aloinósidos A y B Aloína Aloé-emodina Aloesinas A y B REVELADOR 1y2 1y2 1 1 COLOR Amarillo Amarillo Rojo Azul fluorescente Gloria Amparo Valencia P. etc.99 SUSTANCIA Borneol Cineol Acetato de bornilo Alfa. aloinósidos A y B. aloesinas A y B. Liliaceae Introducción La droga la constituye el jugo desecado de las hojas el cual contiene 14-28% de principios antracénicos tales como aloína.5 g. 2001 8 Rf 0. Fase estacionaria: Fase móvil: Sílica gel 60F-254 Acetato de etilo : Metanol : Agua 100 : 13. . de droga pulverizada se extraen con 5 ml de Metanol. calentando durante 5 minutos sobre un baño de agua.3 0.25 0. El filtrado se aplica directamente sobre la placa cromatográfica.47 0.5 : 10 1) Hidróxido de potasio/UV 365 nm 2) Poiietilénglicol PN/UV 365 nm Reveladores: Rf 0.y beta-pineno COLOR Azul oscuro Azul intenso Azul intenso Violeta RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE LA SABILA.7 0. Extracción 0. DICIEMBRE 3 AL 7. Aloe vera. y Alejandro Martínez M..CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS.45 0. 7 0. Extracción a) Por arrastre con vapor de agua Según el método oficial de la Farmacopea Europea III pág. DICIEMBRE 3 AL 7. Fase estacionaria: Fase móvil: Sílica gel 60F-254 Acetato de etilo : Acido fórmico : Acido acético : Agua 100 : 11 : 11 : 27 1) R. Lamiaceae Introducción Las hojas contienen 0. isoquercitrina y rutina. Caprifoliaceae Introducción La droga la constituyen las flores. el cual está constituido principalmente de citronelal 39%. de droga pulverizada se extrae con 10 ml de metanol durante 5 minutos sobre un baño de agua a aproximadamente 60 °C. las cuales contienen glicósidos de quercetina 1.01-0. con: 40 g.. geraniol y cariofileno. Extracción 1 g. linalool. Gloria Amparo Valencia P.4 0.CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS. citronelol. citral 30%. Melissa officinalis. y Alejandro Martínez M. . destilando a 2-3 ml/min durante 2 horas. 2001 9 RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE FLORES DE SAUCO.9 SUSTANCIA Rutina Isoquercitrina Acido cafeico COLOR Amarillo Amarillo Azul fluorescente RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE HOJAS DE TORONJIL.5-3% como hiperósido. 62.25% de aceite esencial. productos naturales/UV 365 nm 2) Polietilénglicol para productos naturales/UV 365 nm Reveladores: Rf 0. de muestra. El filtrado se utiliza para la cromatografía. 400 ml de agua. Sambucus nigra. Además contiene 0. el cual contiene valerenal. didrovaltrato y acevaltrato.25-0.45 0.73 Valtrato/Isovaltrato Azul 0. DICIEMBRE 3 AL 7. IVDH_valtrato. y Alejandro Martínez M.7 0.65 0. isovaltrato. Se aplican en la cromatoplaca 10 microlitros de esta solución.CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS.55 0. cuya concentración cambia de una variedad a otra. y el residuo de disuelve en 0. valeranona y ácido valerénico. Fase estacionaria: Sílica gel 60 Fase móvil: Tolueno : Acetato de etilo 75 : 25 Revelador: HCl concentrado : Acido acético glacial 2 : 8 Rf SUSTANCIA COLOR 0.25% de aceite esencial en los rizomas frescos. Los extractos combinados se evaporan a sequedad.4 SUSTANCIA Citronelal Citral Geraniol.4 Origen Didrovaltrato Acevaltrato IVDH-Valtrato Valtrahidrinas Productos de degradación Pardo Azul Azul Azul Gloria Amparo Valencia P.. Valerianaceae Introducción La droga la constituyen las raíces o rizomas que contienen los valepotriatos como: valtrato. El residuo de la filtración se lava con otros 2 ml de diclorometano. Extracción 0. Fase estacionaria: Sílica gel 60 Fase móvil: Cloroformo Revelador: Anisaldehído/Acido sulfúrico Rf 0. .2 ml de acetato de etilo. 2001 10 b) Extracción con Diclorometano Como se describió para la albahaca. Valeriana officinalis. de droga pulverizada se extraen con 5 ml de diclorometano durante 5 minutos a unos 60 0C con agitación ocasional.2 g. linalool y Citronelol COLOR Azul intenso Azul violáceo Azul violáceo RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE RAICES DE VALERIANA.4 <0. . A. Interamericana McGraw-Hill. 17.0. Ley del medicamento de 1994. etc. M. Santafé de Bogotá D.. DICIEMBRE 3 AL 7. Gloria Amparo Valencia P. Edit. Gattuso...edu. Plant Drug Analysis.. 2001. M. 1973. Springer-Verlag. República de Colombia.co/~carlopez 10. Wagner.. UNR Editora.co/~carlopez/laboratorio/pagelab. X. World Health Organization.udea. 2001 11 Bibliografía 1. Thin Layer Chromatography 11. Limusa. Alejandro Martínez y Gabriel J. 7.. http://muiscas. A Thin Layer Chromatography Atlas. http://matematicas. 1999. Zgainski. E.. 15. Rosario (Argentina).. Medellín. Universidad de Antioquia. Roberto Pinzón ed. Martínez. 6. R. versión 2. http://matematicas. Universidad de Antioquia. Phytochemical Methods. 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Programa Iberoamericano de Ciencia y Tecnología para el Desarrollo.udea.. 2. 1998. 1991. Universidad de Antioquia. Manual de Procedimientos para el Análisis de Drogas en Polvo. Gattuso. A Guide to Modern Techniques of Plant Analysis. Domínguez. Cyted. 6 0. Realizar una curva de Absorbancia vs. Leer absorbancias de cada solución a la longitud de onda de trabajo. · Para obtener la curva de calibración.0 10..2 1. tomar alícuotas de la solución estándar y llevar a 10 ml según la tabla siguiente.CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS. la hacen un indicador adecuado para el reconocimiento y el control de calidad de productos fitofarmacéuticos terminados o sus materias primas vegetales correspondientes.0 10.0 Absorbancia a 360 nm Concentración de rutina (ppm) La gráfica muestra una curva de calibración obtenida experimentalmente con una solución estándar de rutina de concentración aproximada a 100 ppm. DICIEMBRE 3 AL 7. 2001 12 Práctica 2 DESARROLLO DE UN METODO CUANTITATIVO POR CCF-UV CUANTIFICACION DE RUTINA EN FLORES DE SAUCO Y EN PARTES AEREAS DE PENSAMIENTO Introducción La rutina es un glicósido flavonoide que se encuentra ampliamente distribuido en plantas y productos fitofarmacéuticos. y Alejandro Martínez M. · Seleccionar la longitud de onda de trabajo.2 ml de solución completar a 10 ml y determinar el espectro UV entre 200 y 400 nm. Concentración en ppm.0 10. Gloria Amparo Valencia P.9 1.8 Volumen final (ml) 10. junto con la facilidad en su detección a nivel de laboratorio mediante la cromatografía en capa fina (CCF) y la espectroscopia Ultravioleta (UV). .5 1. Procedimiento · Preparar una solución estándar de rutina en metanol de concentración 100 ppm · Tomar 1.0 10. Alícuota (ml) 0. Esta amplia distribución. calentamiento en baño de agua a 60°C. colocando al lado una aplicación del estándar de rutina disuelto en metanol.6 0. · Retirar la placa luego de desarrollar.3 0. medidos con exactitud.7 0. DICIEMBRE 3 AL 7. Filtrar. evaporar a sequedad y pesar el extracto obtenido. 1 mm espesor de capa). · Demarcar la banda correspondiente a la rutina en la muestra. Evaporar a sequedad el resto de extracto y pesar para determinar por diferencia el peso de extracto sembrado en CCF.037 2 R = 0. 3.8 Absorbancia a 360 nm 0. de color amarillo.9906 0. se extrae con 10 ml de metanol. Separación mediante CCF · Redisolver el extracto en 2 ml de metanol caliente y sembrar una banda en una cromatoplaca de sílica gel GF-254 (20x10 cm. · Desarrollar en la mezcla Acetato de etilo/Acido fórmico/Acido acético/Agua 100:11:11:2. Gloria Amparo Valencia P. con agitación.9 13 0.4 0.7. Los filtrados se concentran a sequedad y se redisuelven en 3 ml de metanol. raspar y extraer con metanol caliente 3 veces (porciones de 5 a 10 ml). lavar el filtrado dos veces con 10 ml de metanol (preferiblemente caliente). · La rutina se observa con un rf aproximado de 0. .1 0 0 5 10 15 20 25 Concentración en metanol (ppm) 2. y Alejandro Martínez M.5 y = 0. dejarla secar en un extractor de vapores y analizarla con una lámpara UV a 254 nm. 2001 Curva de calibración de estándar de rutina 0.0352x + 0.3.2 0. Extracción de la droga · 1 g de droga seca y en polvo (pesar con balanza de precisión ± 1 diezmilésima de gramo). durante 10 minutos.CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS.. Esta amplia distribución. calentamiento en baño Gloria Amparo Valencia P. El residuo se extrae con 10 ml de metanol.0 10. · Determinar el porcentaje de rutina en la muestra y comparar con lo reportado para muestras auténticas. En este caso se propone un método de cuantificación en un jarabe. Lectura espectrofotométrica y cuantificación · Leer absorbancia a 360 nm y determinar concentración mediante interpolación con la curva de calibración. Alícuota (ml) 0. y Alejandro Martínez M.5 1. · Para obtener la curva de calibración. Realizar una curva de Absorbancia vs.8 Volumen final (ml) 10. .9 1..0 10.2 ml de solución completar a 10 ml y determinar el espectro UV entre 200 y 400 nm. Extracción de la droga · A partir de la información dada en la etiqueta por el fabricante tomar un volumen equivalente a 1 g de droga seca y en polvo (medir exactamente con material volumétrico).2 1. junto con la facilidad en su detección a nivel de laboratorio mediante la cromatografía en capa fina (CCF) y la espectroscopia Ultravioleta (UV).6 0. · Seleccionar la longitud de onda de trabajo. Procedimiento · Preparar una solución estándar de rutina en metanol de concentración 100 ppm · Tomar 1. con agitación. tomar alícuotas de la solución estándar y llevar a 10 ml según la tabla siguiente. Concentración en ppm. DICIEMBRE 3 AL 7.0 10. la hacen un indicador adecuado para el reconocimiento y el control de calidad de productos fitofarmacéuticos terminados o sus materias primas vegetales correspondientes. Leer absorbancias de cada solución a la longitud de onda de trabajo. Evaporar a sequedad con ayuda de vacío y calentando a 60°C.0 Absorbancia a 360 nm Concentración de rutina (ppm) 2. CUANTIFICACION DE RUTINA EN UN JARABE DE SAUCO Introducción La rutina es un glicósido flavonoide que se encuentra ampliamente distribuido en plantas y productos fitofarmacéuticos.CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS. 2001 14 4.0 10. 7. · Desarrollar en la mezcla Acetato de etilo/Acido fórmico/Acido acético/Agua 100:11:11:2. medidos con exactitud. Espectro UV de rutina en metanol Gloria Amparo Valencia P. Los filtrados se concentran a sequedad y se redisuelven en 3 ml de metanol. Figura 1. durante 10 minutos. · La rutina se observa con un rf aproximado de 0. Filtrar. dejarla secar en un extractor de vapores y analizarla con una lámpara UV a 254 nm. Separación mediante CCF · Redisolver el residuo en 2 ml de metanol caliente y sembrar una banda en una cromatoplaca de sílica gel GF-254 (20x10 cm. colocando al lado una aplicación del estándar de rutina disuelto en metanol. de color amarillo. 4. Lectura espectrofotométrica y cuantificación · Leer absorbancia a 360 nm y determinar concentración mediante interpolación con la curva de calibración. lavar el filtrado dos veces con 10 ml de metanol (preferiblemente caliente). 1 mm espesor de capa).CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS. 2001 15 de agua a 60°C.3. y Alejandro Martínez M.. · Retirar la placa luego de desarrollar. raspar y extraer con metanol caliente 3 veces (porciones de 5 a 10 ml). 3. DICIEMBRE 3 AL 7. evaporar a sequedad y pesar el residuo obtenido. . · Demarcar la banda correspondiente a la rutina en la muestra. Esta amplia distribución.4. 0.8. Extracción de la droga · 1 g de droga seca y en polvo (pesar con balanza de precisión ± 1 diezmilésima de gramo). 0.7. lavar el filtrado dos veces con 10 ml de diclorometano.2 ml de solución completar a 10 ml y determinar el espectro UV entre 200 y 400 nm. junto con la facilidad en su detección a nivel de laboratorio mediante la cromatografía en capa fina (CCF) y la espectroscopia Ultravioleta (UV). DICIEMBRE 3 AL 7. con agitación. y Alejandro Martínez M. Filtrar. · Para obtener la curva de calibración.CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS. la hacen un indicador adecuado para el reconocimiento y el control de calidad de productos fitofarmacéuticos terminados o sus materias primas vegetales correspondientes.0 10. 2001 16 CUANTIFICACION DE ANETOL EN SEMILLAS DE ANIS E HINOJO Introducción El anetol es un fenilpropano que se encuentra distribuido en varias plantas aromáticas. se extrae con 10 ml de diclorometano. Gloria Amparo Valencia P.0 10. Las absorbancias deben estar en el rango de 0. 0. . Realizar una curva de Absorbancia vs.0 10.3 a 0. durante 15 minutos..6 y 0. evaporar a sequedad y pesar el extracto obtenido. Alícuota (ml) Volumen final (ml) 10. si no es así se deberán preparar diluciones calculando absorbancias de 0. Procedimiento · Preparar una solución estándar de anetol en metanol de concentración 100 ppm · Tomar 1.3. tomar alícuotas de la solución estándar y llevar a 10 ml según la tabla siguiente. Concentración en ppm. · Seleccionar la longitud de onda de trabajo.0 10. Leer absorbancias de cada solución a la longitud de onda de trabajo.5.0 Absorbancia a 360 nm Concentración de rutina (ppm) 2. medidos con exactitud. Los filtrados se concentran a sequedad y se redisuelven en 3 ml de metanol. · Demarcar la banda correspondiente al anetol en la muestra. Figura 2.95. . · Retirar la placa luego de desarrollar. · Determinar el porcentaje de anetol en la muestra y comparar con lo reportado para muestras auténticas. y Alejandro Martínez M. Lectura espectrofotométrica y cuantificación · Leer absorbancia a 360 nm y determinar concentración mediante interpolación con la curva de calibración. Evaporar a sequedad el resto de extracto no sembrado y pesar. DICIEMBRE 3 AL 7. 4. 1 mm espesor de capa).. dejarla secar en un extractor de vapores y analizarla con una lámpara UV a 254 nm. · Desarrollar en la mezcla Tolueno/Acetato de etilo 93:7.CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS. El anetol se observa a un Rf aproximado de 0. Por diferencia determinar el peso de extracto sembrado. raspar y extraer con diclorometano 3 veces (porciones de 5 a 10 ml). colocando al lado una aplicación del estándar de anetol disuelto en tolueno ó diclorometano. Espectro UV de anetol en metanol Gloria Amparo Valencia P. 2001 17 3. Separación mediante CCF · Redisolver el extracto en 1 ml de tolueno y sembrar una banda en una cromatoplaca de sílica gel GF-254 (20x10 cm.