Pesquisas Ecológicas de Longa DuraçãoRelatório Anual / PELD Capítulo 10 PELD A Planície Alagável do Alto Rio Paraná - Sítio 6 2008 DIVERSIDADE NUCLEOTÍDICA MITOCONDRIAL ENTRE AS POPULAÇÕES DE ZUNGARO (SILURIFORMES, PIMELODIDAE) DAS BACIAS DO RIO PARANÁ E DO RIO TOCANTINS Alberto José Prioli (Coordenador) Sônia Maria Alves Pinto Prioli Laudenir Maria Prioli Horácio Ferreira Júlio Júnior Carla Simone Pavanelli Leia Carolina Lúcio Rodrigo de Mello Sílvia Aparecida Machado Talge Aiex Boni Thaís Souto Bignotto Thiago Cintra Maniglia Vivian Nunes Gomes RESUMO Peixes do gênero Zungaro são conhecidos como jaú e são apreciados na alimentação humans e na pesca esportiva. É um dos maiores peixes migradores do Brasil, podendo atingir até 150 Kg. Estão distribuídos nas bacias do Paraná-Paraguai e Amazônica e há um conflito taxonômico em relação às populações dessas duas bacias. Nas últimas décadas o jaú tem enfrentado um severo declínio populacional na bacia do alto rio Paraná. Neste trabalho foram caracterizadas molecularmente as populações de Zungaro das bacias do ParanáParaguai e do rio Tocantins. A análise de sequências mitocondriais D-loop oferece suporte para a interpretação de que as populações das bacias do Paraná-Paraguai e Amazônica são de espécies diferentes. Os resultados representam forte evidência em favor de alguns autores que sugerem que o jaú do Paraná-Paraguai deve ser identificado como Zungaro jahu e que na amazônia ocorre a espécie Zungaro zungaro. Capítulo 10 DIVERSIDADE NUCLEOTÍDICA MITOCONDRIAL ENTRE AS POPULAÇÕES DE ZUNGARO... 231 Além disso... O jaú ainda não se encontra nas categorias criticamente em perigo. 2003). ou em perigo. São piscívoros. Por outro lado.. São peixes de couro. as populações dessas duas bacias foram caracterizadas morfologicamente como duas espécies diferentes. Popularmente são conhecidos como jaú e apreciados na alimentação humana e na pesca esportiva. o jaú era identificado como Paulicea luetkeni. As informações podem auxiliar na resolução de problemas taxonômicos e contribuir para o conhecimento. podendo chegar a 144 cm e 150 Kg (Agostinho et al. 2006). da diversidade genética das populações naturais do gênero Zungaro. mas Silfvergrip (1992) reconheceu que o gênero Pauliceia é sinônimo júnior de Zungaro.. 2003). O jaú ocorre nas bacias do rio Paraná-Paraguai e Amazônica. em revisão feita por Graça e Pavanelli (2007) foi adotada a interpretação de que todas as populações de “jaú” são da espécie Zungaro zungaro. . Oliveira et al. Segundo Alves (2006). Prioli et al. Por acumular mutações rapidamente. na bacia do rio Amazonas e Orinoco ocorre a espécie Zungaro zungaro (Humboldt. (2001). A família Pimelodidae inclui o gênero Zungaro. Várias regiões do DNA mitocondrial são utilizadas para estudos populacionais e filogenéticos. mas corre o risco de extinção a médio prazo. 1821).. Perdices e Doadrio. de hábito migratório e preferem águas profundas de ambientes lóticos. antigamente identificado como Paulicea.Relatório Anual / PELD A Planície Alagável do Alto Rio Paraná . Informações sobre a produção da pesca profissional no reservatório de Itaipu revelam a diminuição da pesca de jaú desde o início da década de 90 (Okada et al. 2001. em função do declínio populacional e da fragmentação da sua área de ocupação. 2005). hoje praticamente inexistente. a região controle (D-loop) está entre as mais utilizadas para avaliações de espécies próximas (Avise. Nesse trabalho. Panarari-Antunes et al... 2008. Entretanto.. De acordo com Lundberg e Littmann (2003) a espécie Zungaro jahu (Ihering. 2006. 2004. em conformidade com Silfvergrip (1992) e Silvano et al. as populações de jaú das bacias do Paraná-Paraguai e Tocantins foram caracterizadas molecularmente. 232 Capítulo 10 DIVERSIDADE NUCLEOTÍDICA MITOCONDRIAL ENTRE AS POPULAÇÕES DE ZUNGARO.. Até o início da década de 90. Segundo os mesmos autores. informações sobre a biologia da espécie são escassas (Agostinho et al.Sítio 6 2008 Pesq uisas Ecológicas de Longa Duração PELD INTRODUÇÃO A ordem Siluriformes inclui 37 famílias de bagres amplamente distribuídos em águas doces (Sullivan et al. 1898) é encontrada na bacia do rio Paraná-Paraguai. 2002). o jaú pode ser considerado localmente extinto em vários trechos das bacias dos rios Grande e Paranaíba devido às cascatas de reservatórios nesses rios. Todos os nomes científicos das espécies do GenBank foram pesquisados na base de dados www.com) foram selecionadas para as comparações. Ainda. Na bacia do alto rio Paraná as coletas ocorreram na região de Porto Rico (PR) e na bacia do rio Paraguai as coletas foram no rio Manso.ncbi. Na bacia amazônica. seguindo instruções do fabricante. Os fragmentos de DNA mitocondrial foram amplificados via PCR.gov/Genbank/index. Para garantir maior confiabilidade nas análises.. sob o formato de cromatograma. 233 . os exemplares de Zungaro foram capturados no rio Tocantins. Foi amplificado uma sequência nucleotídica parcial da regiãoD-loop. (2002). Imediatamente após a coleta. Capítulo 10 DIVERSIDADE NUCLEOTÍDICA MITOCONDRIAL ENTRE AS POPULAÇÕES DE ZUNGARO.webofscience. Essas espécies foram utilizadas como grupo externo e referência para distâncias interespecíficas. foram editadas manualmente com o programa BioEdit e alinhadas utilizando-se o CLUSTAL W. as sequências foram alinhadas e só aproximadamente os primeiros 355 pb da extremidade 5´da fita pesada foram considerados.fishbase.html). que foi fixada em álcool etílico comercial. 1998)..nih. foram utilizadas sequências de espécies dos gêneros Pseudobagrus e Hypostomus da ordem Siluriformes disponívies no GenBank (www. de acordo com Prioli et al. com pequenas modificações. Para a extração do DNA total das amostras foi utilizada a metodologia baseada em fenol/clorofórmio (Monesi et al. Além das sequências de Zungaro obtidas neste trabalho. a partir de amostras de DNA total. As sequências nucleotídicas. correspondente à região hipervariável 5’ da fita pesada.Pesquisas Ecológicas de Longa Duração Relatório Anual / PELD PELD A Planície Alagável do Alto Rio Paraná ..org para evitar comparações entre espécies sinônimas. O produto final de cada reação de PCR foi utilizado diretamente para sequenciamento em plataforma MegaBace (Amersham). A quantificação e avaliação da qualidade do DNA foi realizada em gel de agarose.nlm.Sítio 6 2008 MATERIAL E MÉTODOS As coletas de peixes identificados como Zungaro foram realizadas nas bacias do Paraná-Paraguai e na bacia Amazônica. como mostrado na Tabela 1. como mostrado na Figura 1. de cada indivíduo foi retirada uma amostra de tecido muscular. por comparação com quantidades conhecidas de DNA λ. apenas as sequências disponibilizadas que faziam parte de artigos já publicados em periódicos indexados na base Thompson-ISI (www. e armazenada a -20 oC. 000 reamostragens. O número de nucleotídeos polimórficos e as distâncias-p (porcentagem de diferenças nucleotídicas) foram calculados com o programa MEGA 4. (2) Rio Manso. 2003. Tabela 1 Sequências região D-loop de espécies dos gêneros de Siluriformes.0. Capítulo 10 DIVERSIDADE NUCLEOTÍDICA MITOCONDRIAL ENTRE AS POPULAÇÕES DE ZUNGARO. região de Porto Rico-PR. na bacia Amazônica.. foi utilizada para o agrupamento com o algoritmo neighbor-joining. Análises de bootstrap basearam-se em 10. Os números correspondem aos pontos de coleta: (1) Rio Paraná. Pseudobagrus e Hipostomus. A matriz de distância-p. Família Espécie Pseudobagrus taeniatus Pseudobagrus aurantiacus Pseudobagrus nudiceps Pseudobagrus ichikawai Pseudobagrus tokiensis Acesso Genbank AB097696 AB097694 AB097693 AB097692 AB097691 Bibliografia Bagridae Watanabe e Nishida. 234 . Loricariidae Hypostomus affinis Hypostomus punctatus Hypostomus commersoni Hypostomus nigromaculatus Hypostomus watwata Hypostomus plecostomus Hypostomus fonchii Hypostomus boulengeri AJ318358 AJ318357 AJ318356 AJ318355 AJ318352 AJ318351 AJ318350 AJ318344 Montoya-Burgos. na bacia do rio Paraná-Paraguai.. 2003.Relatório Anual / PELD A Planície Alagável do Alto Rio Paraná . obtidas no GenBank.Sítio 6 2008 Pesq uisas Ecológicas de Longa Duração PELD Figura 1 .Área de coleta de jaú Zungaro. (3) Rio Tocantins. 3 0. Além disso.9%) foi encontrada uma alta proporção de nucleotídeos AT.0 0. entre sequências de indivíduos dos rios Paraná.008 ou 0.7. uma distância-p de 4.5 4.8 4.8 0.5 4.8 4.. no máximo.Sítio 6 2008 RESULTADOS Para a região do D-loop. 2000).3 0. em número e em porcentagens.3 0. o que é esperado para a região D-loop. três sítios polimórficos (distância-p = 0. a comparação entre as sequências dos indivíduos da bacia Paraná/Manso com as sequências do indivíduos do rio Tocantins revelou 16-17 sítios polimórficos Isso representa.7. As demais substituições não caracterizam nenhuma região. .5 0 0 4.Pesquisas Ecológicas de Longa Duração Relatório Anual / PELD PELD A Planície Alagável do Alto Rio Paraná . T = 31.3 0 0 16 16 16 0. Tabela 2 Número (abaixo da diagonal) e porcentagem (acima da diagonal) de sítios nucleotídicos da região do D-loop (~355 pb) que discriminam espécies de Zungaro das bacias dos rios Paraná (PR).3 0.0 0 4. Essa maior taxa de transição (R = si/sv = 3.0 0 16 16 16 0.8 1 1 0 0 0 16 16 16 0.3 0.5 4. Manso (MS) e Tocantins (RT). Manso e Tocantins. Na Tabela 2 são apresentados os polimorfismos da região hipervariável do D-loop.6 1 1 1 17 17 17 0.5 4. Dessas substituições 16 estão associadas aos indivíduos coletados no rio Tocantins. os indivíduos do rio Tocantins apresentam um indel correspondente a uma citosina.7.8%. em porcentagem.0 0.8 4.8 4.0 0.5 4.8 4. Em contraste.8 4.6 0. O alinhamento dessas seqüências apontou 20 pontos de substituições nucleotídicas.5 4. foram analisados quatro indivíduos do Rio Manso e três do Tocantins..3 2 1 1 1 17 17 17 1.5 4. Espécie PR05 PR08 PR13 MS04 MS05 MS06 MS09 RT02 RT03 RT05 PR05 PR08 PR13 MS04 MS05 MS06 MS09 RT02 RT03 RT05 3 2 4 3 3 3 17 17 17 0. Entre as sequências dos rios Paraná e Manso as diferenças foram de. C = 17.1 0.8 0. G = 13.5 a 4.3 0.8 0.0 0.7) concorda com o esperado para o fragmento correspondente à região D-loop (Nei e Kumar.0 0.0 16 16 16 4.0 235 Capítulo 10 DIVERSIDADE NUCLEOTÍDICA MITOCONDRIAL ENTRE AS POPULAÇÕES DE ZUNGARO.8%).8 4.5 4.5 0.8 4. sendo 15 transversões e quatro transições.5 4.8 4.5 0. comparadas duas a duas. Nas sequências (A = 36. Como pode ser constatado. Hpu = H. Hfo = H.8 8. de sítios polimórficos.7 6.5 Tabela 4 Número (abaixo da diagonal) e porcentagem (acima da diagonal) de sítios nucleotídicos da região do D-Loop (~355 pb) que discriminam espécies de Hypostomus.6 27 5.8 9.6 6. Nas Tabelas 3 e 4 também são mostrados os valores.1 18 30 20 4.0 24 18 7. Hni = H. plecostomus.0 4.8 35 Hbo 6.5 5.2 6.3 4.Sítio 6 2008 Pesq uisas Ecológicas de Longa Duração PELD Entre espécies congenéricas. affinis. de muitas das distâncias entre espécies congenéricas de Pseudobagrus e Hypostomus. Haf = H. punctatus.6 6.4 26 21 22 32 19 Hni 7.9 6.6 25 41 28 Hpl 7. as diferenças entre Zungaro do Paraná/Paraguai e do Tocantins mantiveram-se nos mesmos patamares. aurantiacus P.taeniatus P. em número e em porcentagem. da ordem Siluriformes.7 16 27 22 17 31 17 Hco 6. semelhantes aos registrados entre as bacias do Paraná/Paraguai e do rio Tocantins. entre espécies dentro dos gêneros Pseudobagrus e Hypostomus. nigromaculatus. . Espécie P taeniatus P. tokiensis 4 17 28 19 1.0 5. boulengeri. Hwa = H.6 5. fonchii..5 11. de aproximadamente 5%. nudiceps P. do segmento correspondente da região D-loop.1 9. Espécie Haf Hpu Hco Hni Hwa Hpl Hfo Hbo Haf 21 22 27 32 27 38 25 Hpu 5. para a região D-loop frequentemente são encontrados valores da ordem de 4-5%.0 7.6 9.4 8. iehikawai P.3 5.8 4.3 8. watwata. Hpl = H.4 7. commersoni.2 35 29 31 24 Hwa 8.4 7. iehikawai P.8 36 17 Hfo 10.8 8.. aurantiacus P. Hbo = H.Relatório Anual / PELD A Planície Alagável do Alto Rio Paraná .5 236 Capítulo 10 DIVERSIDADE NUCLEOTÍDICA MITOCONDRIAL ENTRE AS POPULAÇÕES DE ZUNGARO. tokiensis P.1 4.3 6. Tabela 3 Número (abaixo da diagonal) e porcentagem (acima da diagonal) de sítios nucleotídicos da região do D-loop (~355 pb) que discriminam espécies de Pseudobagrus. nudiceps P.7 5. Hco = H.0 7. . Paraguai (Manso) e Tocantins. No dendrograma neighbor joining. foram incluídas para referenciar as comparações. que o nível de diferenciação entre os haplótipos de Zungaro do Paraná-Paraguai e o haplótipo de Zungaro do rio Tocantins é de magnitude semelhante ao que entre muitas espécies congenéricas de Hypostomus e Pseudobagrus. As seqüências despécies de Hypostomus e Pseudobagrus foram obtidas no GenBank.Pesquisas Ecológicas de Longa Duração Relatório Anual / PELD PELD A Planície Alagável do Alto Rio Paraná . Além disso. Capítulo 10 DIVERSIDADE NUCLEOTÍDICA MITOCONDRIAL ENTRE AS POPULAÇÕES DE ZUNGARO. Figura 2 . construídos com distância-p. os comprimentos dos braços entre sequências são proporcionais à frequência de substituições nucleotídicas. é possível a constatação da separação de dois grupos de haplótipos de jaú. as espécies dos gêneros Hypostomus e Pseudobagrus. com suporte de bootstrap de 100%.Dendrograma das distâncias-p da região D-loop de oito espécies do gênero Hypostomus. Um haplogrupo está associado à bacia do Paraná-Paraguai e um haplótipo está associado com a bacia do rio Tocantins. portanto. Fica evidente.. 237 . de Siluriformes.Sítio 6 2008 No dendrograma construído com distância-p para a região D-loop (Figura 2). cinco espécies do gênero Pseudobagrus e de Zungaro das bacias dos rios Paraná. . e a associação de haplótipos com bacias hidrográficas. O acentuado padrão geográfico na distribuição dos haplótipos D-loop. o efetivo isolamento geográfico pode ter sido estabelecido depois da separação das duas bacias. O alto grau de semelhança morfológica e genética. a condição taxonômica da população nativa da bacia do Paraná-Paraguai. a magnitude da divergência encontrada está em patamar que permite conclusão sobre a identificação taxonômica dos dois grupos. Como demonstrado. em relação à espécie amazônica. Esse seria um nível de diferenciação que se poderia esperar entre espécies próximas. As hipóteses de vicariância e dispersão são plausíveis para explicar a diferenciação genética e o padrão biogeográfico. 238 Capítulo 10 DIVERSIDADE NUCLEOTÍDICA MITOCONDRIAL ENTRE AS POPULAÇÕES DE ZUNGARO. em níveis muito baixos para o que poderia ser esperado no período de 10 Ma. De acordo com Räsänen et al. aparentemente.Relatório Anual / PELD A Planície Alagável do Alto Rio Paraná . pelo menos em caráter provisório. está sujeita a interpretações discrepantes. zungaro para a mesma população. mesmo que em patamar não muito acentuado. vicariância ou dispersão. (1995). A análise das seqüências mitocondriais D-loop de Zungaro produziu evidências que apontam para a solução desse conflito. Os valores de distância-p obtidas com D-loop são consistentes em indicar diferenciação genética entre as populações de Zungaro das bacias do Paraná/Paraguai e do rio Tocantins.. que oferecem dificuldades para a identificação em bases morfológicas. nos últimos 10 Ma. . Entretanto. demonstram claramente diferenças entre as duas populações de Zungaro em níveis que discriminam espécies de peixes. Portanto. existe divergência genética entre as populações de Zungaro das bacias Paraná-Paraguai e Amazônica. Além disso. podem ser explicados pela origem das populações. Silfvergrip (1992) e Graça e Pavanelli (2007) utilizam Z. Independentemente do processo inicial. que identificam a espécie da bacia do rio Paraná como Zungaro jahu. as ocorrências de captura de cabeceiras continuaram mesmo após o estabelecimento da bacia Amazônica e do Paraná-Paraguai.Sítio 6 2008 Pesq uisas Ecológicas de Longa Duração PELD DISCUSSÃO Em contraposição a Lundberg e Littmann (2003). Hubert e Renno (2006) mostram que a separação das bacias Amazônica e do ParanáParaguai ocorreu no final do Mioceno. Portanto. Esta interpretação parece acomodar melhor a divergência genética em níveis baixos. juntamente com o padrão de diferenças entre espécies congenéricas. as diferenças genéticas acumuladas estão. Portanto. como a encontrada. parece inevitável concluir que a população de Zungaro da bacia do Paraná-Paraguai não pertence à espécie de Zungaro zungaro da bacia Amazônica. o isolamento geográfico deve ter se estabelecido em momento posterior à separação das duas bacias. Harvey. REFERÊNCIAS Agostinho. N. Molecular Markers.. jahu. with implications on the diversification of Neotropical ichthyofauna.O. fica demonstrado que possíveis transferências de Zungaro da região amazônica para as áreas do alto rio Paraná onde o jaú está extinto não representaria repovoamento.. pp. Baer. Renno. Natural History..). EDUEM .E. Historical biogeography of South American freshwater fishes. 1414–1436.. Ferraris.B. Essa conclusão é relevante. in: Reis. pp 432-446. 10. Paçó–Larson. Hubert. Migratory Fishes of South America: Biology. as informações sobre a diversidade genética de Zungaro obtidas neste trabalho representam uma contribuição para nortear propostas de ações que possibilitem a recuperação da diversidade genética de Z. Sinauer Associates Inc. mas sim introdução da espécie Z.Editora da Universidade Estadual de Maringá. Ecol. Júlio. A. Publisher. Check List of the Freshwater Fishes of South and Central America. Biodiversidade e Florestas: Espécies ameaçadas. Avise... 2003. M. 1998.Pesquisas Ecológicas de Longa Duração Relatório Anual / PELD PELD A Planície Alagável do Alto Rio Paraná . Porto Alegre. C. Monesi.I.. Gomes. The DNA puff gene BhC4-1 of Bradysia higida is specifically transcribed early prepupal salivary glands of Drosophila melanogaster.. Pavanelli. C. 33. B.br. and Evolution. second ed. S. (Eds. 239 .G.W.gov.. J. Brazil.I.. M. Mol.F. N. Peixes da planície de inundação do alto rio Paraná e áreas adjacentes. Assim. Historical biogeography of the catfish genus Hypostomus (Siluriformes: Loricariidae). 2003.C. (Eds. 2006. as populações de jaú da bacia do ParanáParaguai devem ser identificadas como Zungaro jahu. Alves.S. J. R. Kullander S. Suzuki. 1855-1867.-F. J. W. Maringá. H. Família Pimelodidae. Ross. Sundeland. pois a espécie de jaú encontrada na bacia do alto Paraná está sob o risco de extinção local (Alves. Montoya-Burgos.. Disponível em http://www.. 12. J. M. In: Carolsfeld. C. 2003. 2006). Graça. Lundberg.). 559-569. 19-98.C. Chromosoma. Principalmente. Migratory fishes of the Upper Paraná River Basin.M. World Fisheries Trust – The World Bank. Ministério do Meio Ambiente 2007. Capítulo 10 DIVERSIDADE NUCLEOTÍDICA MITOCONDRIAL ENTRE AS POPULAÇÕES DE ZUNGARO. Ma. 83. 2007. Fisheries and Conservation Status.Sítio 6 2008 Segundos os resultados do presente trabalho. 4-5.. Jaú (Zungaro jahu): Um peixe mais ameaçado que os outros? Boletim sociedade Brasileira de Ictiologia.A. Biogeogr. Jr H.J. Jacobs-Lorena.. 2006..mma. Littmann. J. A.L. EDIPUCRS. J. L. 2004. zungaro.J. L. Spatial and temporal gradients in artisanal fisheries of a large Neotropical reservoir.M. 636 – 662. 714-724.M.S. Agostinho. Negri. H. 260–277.P. 2007. Pesu Müller and Troschel... Explor Freshwaters.P. Ichthyol. D. Gomes.P. Universidade de São Paulo..A.A. 50. Mol. C..S. 1995.. Prioli. São Paulo. I..J. Mol. 7. Sato. Genetic population structure of Japanese bagrid catfishes.C.M.. Phyl. Klein. 2001.V.. H.. A. S. Begossi. Júlio Jr.F. Brazil. 2002.M. Oyakawa..F.. Brazil. K. 140-148. Biol. R. C.R.. Agostinho. Samonte. Amaral. Doadrio. A.. A. Mol. B. Tichy.K. Prioli.. Sullivan. 468–478. A.. J.. Zungaro. Hardman.E. M. 421-430. 19. vol. Lundberg. Biol.. 1992. Fish Biol. S. Carrer. M. A. Carraro.A.. 2006. The Molecular Systematics and Biogeography of the European Cobitids Based on Mitochondrial DNA Sequences.C. Júlio-Jr. Prioli.C. 240 Capítulo 10 DIVERSIDADE NUCLEOTÍDICA MITOCONDRIAL ENTRE AS POPULAÇÕES DE ZUNGARO. a senior synonym of Paulicea (Teleostei: Pimelodidae). 62. Molecular variability in Brycon cf. Phyl. O. J. Identification of Astyanax altiparanae in the Iguaçu River. and Evol. Res. A. J. H. Prioli. Mol. Carrer. C. 2006.. Silvano. based on mitochondrial DNA and RAPD markers. Agostinho. and Evol...Relatório Anual / PELD A Planície Alagável do Alto Rio Paraná .G.P.V. Genetics and Molecular Research. A. A. Genetic diversity of invasive and native Cichla (Pisces: Perciformes) populations in Brazil with evidence of interspecific hybridization. H. H. 25. the Itaipu Reservoir. Y. 2069– 2080. Prioli. L. no. E... A. Santos. H. A. A phylogenetic analysis of the major groups of catfishes (Teleostei: Siluriformes) using rag1 and rag2 nuclear genome sequence. Linna. 305-310. 69. 2005. Gene Flow between Species of Lake Victoria Haplochromine Fishes. L. N.E. M.. Prioli. J. T. I. 41.. J. 2008. Prioli . 1. Bignotto. 1845 (Characiformes: Characidae) from the Araguaia-Tocantins basin. Can.. Ichthyol. Gen. Júlio Jr.. Brasil).. 95-106.M.R.S.F.. Peixes do Alto Rio Juruá (Amazônia. 386–390.J. Fish Aquatic Sci.M. Perdices. Prioli. 2003.M.A. Takahata.S... Silfvergrip. Oliveira.. Oliveira. F. Panarari-Antunes. p... Satta.. A. . J. L. 3. Räsänen.M. 269.S.J.M.. Science. R. S. 24. 2001.Sítio 6 2008 Pesq uisas Ecológicas de Longa Duração PELD Okada. Nishida. and Evol. Prioli. Late Miocene tidal deposits in the Amazonian foreland basin. Watanabe.. Pavanelli..