PCR – LÁTEX PCR – LÁTEXProteína C Reativa Proteína C Reativa FINALIDADE: FINALIDADE: Teste em placa por aglutinação de partículas de látex para determinação qualitativa e semi-quantitativa de Teste em placa por aglutinação de partículas de látex para determinação qualitativa e semi-quantitativa de Proteína C Reativa (PCR) no soro humano. Proteína C Reativa (PCR) no soro humano. PRINCÍPIO: PRINCÍPIO: A PCR liga-se não apenas aos poliosídeos presentes em muitas bactérias, fungos e protozoários parasitas, A PCR liga-se não apenas aos poliosídeos presentes em muitas bactérias, fungos e protozoários parasitas, mas também à fosforilcolina, fosfatidilcolinas. O seu papel principal é reconhecer substâncias autógenas mas também à fosforilcolina, fosfatidilcolinas. O seu papel principal é reconhecer substâncias autógenas potencialmente tóxicas, liberadas por tecidos danificados, ligar-se a elas e detoxicá-las ou removê-las do potencialmente tóxicas, liberadas por tecidos danificados, ligar-se a elas e detoxicá-las ou removê-las do sangue. A PCR é também o que exibe os aumentos mais intensos de concentração após o infarto do miocárdio, sangue. A PCR é também o que exibe os aumentos mais intensos de concentração após o infarto do miocárdio, trauma, infecções, cirurgias ou proliferação neoplásica. O aumento ocorre dentro de 24 a 48 horas, e o nível trauma, infecções, cirurgias ou proliferação neoplásica. O aumento ocorre dentro de 24 a 48 horas, e o nível pode ser de 2.000 vezes o normal. A determinação do aumento inespecífico de PCR é clinicamente útil para pode ser de 2.000 vezes o normal. A determinação do aumento inespecífico de PCR é clinicamente útil para a triagem da doença orgânica; avalição da atividade de uma doença inflamatória, tal como artrite reumatóide; a triagem da doença orgânica; avalição da atividade de uma doença inflamatória, tal como artrite reumatóide; detecção de infecções intercorrentes no lúpus eritematoso sistêmico, na leucemia ou após cirurgia; detecção detecção de infecções intercorrentes no lúpus eritematoso sistêmico, na leucemia ou após cirurgia; detecção da rejeição em receptores e meningite, quando a colheita de amostras para a investigação bacteriológica da rejeição em receptores e meningite, quando a colheita de amostras para a investigação bacteriológica pode ser difícil. pode ser difícil. A Proteína C Reativa (PCR) juntamente com a velocidade de hemossedimentação (VHS) e as mucoproteínas A Proteína C Reativa (PCR) juntamente com a velocidade de hemossedimentação (VHS) e as mucoproteínas fazem parte das chamadas “reações de fase aguda”, que quando alteradas caracterizam atividades fazem parte das chamadas “reações de fase aguda”, que quando alteradas caracterizam atividades inflamatórias inespecíficas, auxiliando o diagnóstico e o controle evolutivo da inflamação. inflamatórias inespecíficas, auxiliando o diagnóstico e o controle evolutivo da inflamação. O reativo, uma suspensão de partículas de látex sensibilizadas com anticorpos específicos anti-PCR, O reativo, uma suspensão de partículas de látex sensibilizadas com anticorpos específicos anti-PCR, aglutina em presença de PCR ( uma proteína de fase aguda) com concentração igual ou superior a 6mg/L, aglutina em presença de PCR ( uma proteína de fase aguda) com concentração igual ou superior a 6mg/L, de acordo com as referências estabelecidas pelos Padrões Internacionais da OMS. de acordo com as referências estabelecidas pelos Padrões Internacionais da OMS. REAGENTES: REAGENTES: Cód. 902 - Kit completo para 50 a 100 determinações: Cód. 902 - Kit completo para 50 a 100 determinações: • PCR – Reagente Látex - 1 x 2,0 mL ( tampa preta) • PCR – Reagente Látex - 1 x 2,0 mL ( tampa preta) Suspensão de partículas de látex sensibilizadas com anticorpos anti-PCR humana, azida sódica 0,95 g/l. A Suspensão de partículas de látex sensibilizadas com anticorpos anti-PCR humana, azida sódica 0,95 g/l. A sensibilidade do reativo tem sido ajustada para detectar entre 6 e 250 mg/L de PCR. sensibilidade do reativo tem sido ajustada para detectar entre 6 e 250 mg/L de PCR. • Controle Positivo - 1 x 0,5 mL ( tampa vermelha) • Controle Positivo - 1 x 0,5 mL ( tampa vermelha) Soro humano estabilizado, 0,1% de azida sódica como conservante. Soro humano estabilizado, 0,1% de azida sódica como conservante. • Controle Negativo - 1 x 0,5 mL ( tampa branca) • Controle Negativo - 1 x 0,5 mL ( tampa branca) Soro animal, azida sódica 0,95 g/L. Soro animal, azida sódica 0,95 g/L. • Placas de leitura • Placas de leitura • Espátula descartáveis • Espátulas descartáveis Cód. 912 - Kit (reagente) para 50 a 100 determinações: Cód. 912 - Kit (reagente) para 50 a 100 determinações: • PCR – Reagente Látex - 1 x 2,0 mL ( tampa preta) • PCR – Reagente Látex - 1 x 2,0 mL ( tampa preta) Suspensão de partículas de látex sensibilizadas com anticorpos anti-PCR humana, azida sódica 0,95 g/l. A Suspensão de partículas de látex sensibilizadas com anticorpos anti-PCR humana, azida sódica 0,95 g/l. A sensibilidade do reativo tem sido ajustada para detectar entre 6 e 250 mg/L de PCR. sensibilidade do reativo tem sido ajustada para detectar entre 6 e 250 mg/L de PCR. MATERIAIS NECESSÁRIOS NÃO FORNECIDOS: MATERIAIS NECESSÁRIOS NÃO FORNECIDOS: - Relógio - Relógio - Tubos de ensaio para titulações - Tubos de ensaio para titulações - Estantes para tubos de ensaio - Estantes para tubos de ensaio - Salina 0,85% - Salina 0,85% - Pipetas sorológicas - Pipetas sorológicas - Ponteiras - Ponteiras ARMAZENAMENTO : ARMAZENAMENTO : -A temperatura de armazenamento deverá ser 2° a 8°C, exceto as placas e bastões que podem ser armazenados -A temperatura de armazenamento deverá ser 2° a 8°C, exceto as placas e bastões que podem ser armazenados à temperatura ambiente. à temperatura ambiente. -Manter ao abrigo da luz e evitar umidade -Manter ao abrigo da luz e evitar umidade -Não congelar -Não congelar -Os produtos são estáveis até a data de validade que consta no rótulo do produto -Os produtos são estáveis até a data de validade que consta no rótulo do produto PRECAUÇÕES: PRECAUÇÕES: • Usado para diagnóstico “In Vitro”. • Usado para diagnóstico “In Vitro”. • Todos os componentes de origem humana apresentaram resultados negativos para anticorpo anti- • Todos os componentes de origem humana apresentaram resultados negativos para anticorpo anti- HCV, antígeno de superfície da hepatite B (HBsAg) e anti-HIV. No entanto, devem ser tratados com precaução HCV, antígeno de superfície da hepatite B (HBsAg) e anti-HIV. No entanto, devem ser tratados com precaução como potencialmente infecciosos. como potencialmente infecciosos. • A placa poderá ser reutilizada desde que as divisões sejam lavadas com pouco detergente e enxaguadas • A placa poderá ser reutilizada desde que as divisões sejam lavadas com pouco detergente e enxaguadas com grande quantidade de água para remover o resíduo completamente. com grande quantidade de água para remover o resíduo completamente. • O PCR Reagente Látex deve estar homogêneo antes do uso. Isto pode ser realizado por inversão • O PCR Reagente Látex deve estar homogêneo antes do uso. Isto pode ser realizado por inversão cuidadosa do frasco de reagente e esgotado o conteúdo do conta-gotas, antes do uso. Não agitar vigorosamente. cuidadosa do frasco de reagente e esgotado o conteúdo do conta-gotas, antes do uso. Não agitar vigorosamente. • Os reagentes contêm azida sódica. Este agente é conhecido por reagir com cobre e chumbo dos canos • Os reagentes contêm azida sódica. Este agente é conhecido por reagir com cobre e chumbo dos canos de pia para formar azidas explosivas. Os materiais ao serem dispensados devem ser lavados com grande de pia para formar azidas explosivas. Os materiais ao serem dispensados devem ser lavados com grande quantidade de água para prevenir acúmulo de azida. quantidade de água para prevenir acúmulo de azida. • O descarte do material utilizado deverá ser feito obedecendo-se os critérios de biossegurança de • O descarte do material utilizado deverá ser feito obedecendo-se os critérios de biossegurança de acordo com a legislação vigente. acordo com a legislação vigente. • Seguir exatamente a metodologia proposta para obtenção de resultados exatos. • Seguir exatamente a metodologia proposta para obtenção de resultados exatos. • Ler imediatamente após 2 minutos, pois a demora para leitura poderá apresentar resultado falso- • Ler imediatamente após 2 minutos, pois a demora para leitura poderá apresentar resultado falso- positivo. positivo. • O uso do conta-gotas torna o teste menos preciso devido a variação no volume da gota, é indicado o • O uso do conta-gotas torna o teste menos preciso devido a variação no volume da gota, é indicado o uso de uma pipeta automática para obtenção de resultados mais precisos e confiáveis. uso de uma pipeta automática para obtenção de resultados mais precisos e confiáveis. AMOSTRAS: AMOSTRAS: O teste deve ser feito no soro. Se a amostra de soro não for imediatamente testada após coleta, armazenar O teste deve ser feito no soro. Se a amostra de soro não for imediatamente testada após coleta, armazenar até 7 dias entre 2° a 8°C. até 7 dias entre 2° a 8°C. • Soros com forte lipemia, hemólise ou contaminação bacteriana não devem ser usados para o teste. • Soros com forte lipemia, hemólise ou contaminação bacteriana não devem ser usados para o teste. • Deve-se utilizar soro e não plasma, pois o fibrinogênio pode causar aglutinação inespecífica. • Deve-se utilizar soro e não plasma, pois o fibrinogênio pode causar aglutinação inespecífica. • Os controles positivo e negativo são usados como controle visual das reações positiva e negativa.Uma • Os controles positivo e negativo são usados como controle visual das reações positiva e negativa.Uma granulação muito fraca com o controle negativo pode ser ocasionalmente observada. Isto não é um sinal de granulação muito fraca com o controle negativo pode ser ocasionalmente observada. Isto não é um sinal de que o reagente esteja instável, mas deve ser considerado como um exemplo de reação negativa. que o reagente esteja instável, mas deve ser considerado como um exemplo de reação negativa. PREPARO DO PACIENTE PREPARO DO PACIENTE Apesar do jejum prévio não ser necessário, recomenda-se que o paciente seja instruído para manter jejum Apesar do jejum prévio não ser necessário, recomenda-se que o paciente seja instruído para manter jejum právio de 8 - 12 horas para evitar possíveis interferentes tais como a lipemia. právio de 8 - 12 horas para evitar possíveis interferentes tais como a lipemia. PROCEDIMENTO: PROCEDIMENTO: TESTE QUALITATIVO: TESTE QUALITATIVO: Importante: Deixar todos os reagentes atingirem a temperatura ambiente antes do uso . Importante: Deixar todos os reagentes atingirem a temperatura ambiente antes do uso . Esgotar o conteúdo do conta-gotas e agitar o PCR Reagente Látex gentilmente; Esgotar o conteúdo do conta-gotas e agitar o PCR Reagente Látex gentilmente; Utilize pipeta automática para obter resultados mais precisos. Utilize pipeta automática para obter resultados mais precisos. 1- Colocar 40 µL (uma gota) do PCR Reagente Látex em divisões separadas da placa, para as amostras 1- Colocar 40 µL (uma gota) do PCR Reagente Látex em divisões separadas da placa, para as amostras a serem testadas, bem como para os controles positivo e negativo. a serem testadas, bem como para os controles positivo e negativo. 2- Adicionar 40 µL de cada amostra não diluída e de cada controle não diluído. 2- Adicionar 40 µL de cada amostra não diluída e de cada controle não diluído. e por isto seus valores caem a níveis de referência mais rapidamente que outras proteínas de fase a sete horas.:Dra. não Em resposta inflamatória mediada por linfócitos.2 0. de acordo com a população atendida. estendendo o líquido igualmente sobre cada divisão da placa. 103-111. Diluições adicionais podem ser preparadas caso 1 . Agitar a placa com suave movimento de rotação manualmente ou em agitador automático a 100 rpm 5. Resíduo de detergente pode provocar resultados falso-positivo. Misturar com o bastão descartável.2mL de NaCl a 0. e observar a aglutinação sob luz incidente.2 0.2 0. A Qualitativo: Examinar macroscopicamente a presença ou ausência de aglutinação logo após 2 minutos. - Misturar e Transferir ( mL ) 0. podem causar resultados falsos devido efeitos de secagem.2 . 6 . doença mista do tecido conectivo.E apresenta pequenas elevações em doenças como: Hepatite trombo-embólicas pós cirúrgicas e vasculites. Misturar com o bastão descartável. (efeito prozona).020mL (20µL).: 37.: Para a realização de 100 testes com este kit.657. Recomenda-se repetir o teste utilizando um volume de amostras de 10 µL.2mL do 2º para o 3º tubo e assim sucessivamente até o 6º tubo desprezando 0. • A intensidade da aglutinação não é indicativa da concentração de PCR nas amostras testadas.3.Diluir o soro em tubos.2 0.2mL restantes.2 Solução Salina ( mL ) 0. espondilite anquilosante.2 0. infecções bacterianas. . • Halbert SP. aglutinação claramente visível. • A sensibilidade do teste diminui a temperaturas baixas. Separar 6 tubos e adicionar 0. Am J Clin Pathol 1969. A presença de aglutinação indica um conteúdo de Proteína C Reativa no soro igual ou superior a 6mg/L. 4. e observar a aglutinação sob luz incidente. Em resposta inflamatória mediada por neutrófilo ou monócito a síntese excedendo 26mg/L de PCR no soro. Marcar os resultados. Téc. infecções bacterianas. Agitar a placa com suave movimento de rotação manualmente ou em agitador automático a 100 rpm durante 2 minutos.2 0. febre reumática. e assim sucessivamente até o 6º tubo desprezando 0.: 37.Marcar os resultados. atingindo 100 mg/L.2 Soro ( mL ) 0.2 Diluição 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 Diluição 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 mg/L 12 24 48 96 192 384 mg/L 12 24 48 96 192 384 2. artrite psoriática e reumatóide.com e-mail: sac@ebram. sendo que cada laboratório deverá criar sua faixa de valores Estes valores devem ser usados como orientação. sistêmico.402/0001-31 Resp. J Reprod Med 1980. Ann N e Acad Sci 1963. Misturar. usar água com detergente neutro e enxaguar abundantemente com água destilada ou deionizada. Positivo Negativo Positivo Há aglutinação Negativo Não há aglutinação Há aglutinação Não há aglutinação TESTE SEMI-QUANTITATIVO TESTE SEMI-QUANTITATIVO 1. infarto agudo do miocardio A PCR encontra-se elevada em diversas doenças como pielonefrite(> 100mg/L). se isto não for efetuado imediatamente. Téc. . Rheumatol 1970.451 NºReg. . • Bach G et al.2 0.ebram. hepática de PCR está aumentada. misturar e transferir 0.ebram. podem aparecer falsas negatividades • Se a concentração de PCR no soro é muito elevada ( >250mg/L). 4. J Clin Pathol 1972: 25: 543-544. doença de Still.2 0. Lab Rep for Physicians 1982. O soro presença de aglutinação indica um conteúdo de Proteína C Reativa no soro igual ou superior a 6mg/L. J Clin Pathol 1972: 25: 543-544. o volume adicionado da amostra/controles e reagente é de 0. • Schmidt et al. A PCR encontra-se elevada em diversas doenças como pielonefrite(> 100mg/L). GARANTIA DE QUALIDADE GARANTIA DE QUALIDADE Este produto é garantido pela Ebram Produtos Laboratoriais Ltda se conservado na temperatura recomendada. SIGNIFICADO CLÍNICO: SIGNIFICADO CLÍNICO: A Proteína C-Reativa é um marcador importante e sensível de inflamação aguda e destruição de tecidos. • Gambino R.2mL de NaCl a 0. estendendo o líquido igualmente sobre cada divisão da placa. 25:63 Belenzinho .402/0001-31 CNPJ: 50. Soro ( mL ) 0. 4:1 Rua Júlio de Castilhos nº 500 • Angerman HS. conforme esquema abaixo. 103-111. Nadjara Novaes Longen Resp. Am. doença de Still. Nadjara Novaes Longen ed: junho/16 CRF-SP. Recomenda-se repetir o teste utilizando um volume de amostras de 10 µL. 5. Misturar com auxílio do bastão descartável. com meia-vida em torno de cinco a sete horas. Interpretação dos Resultados: Interpretação dos Resultados: Semi-Quantitativo: O título aproximado corresponderá a última diluição mais alta do soro que apresentar Semi-Quantitativo: O título aproximado corresponderá a última diluição mais alta do soro que apresentar aglutinação claramente visível. utilizado durante o prazo de validade e seguindo recomendações do rótulo e dessa instrução de uso. 29: 29-32. se isto não for efetuado imediatamente. febre reumática. Utilizar bastões diferentes para cada amostra. espondilite anquilosante. a maioria das viroses. leucemias. e por isto seus valores caem a níveis de referência mais rapidamente que outras proteínas de fase aguda. a síntese hepática não se altera ou aumenta muito pouco. o volume adicionado da amostra/controles e reagente é de OBS. Am.2 0. placa.E apresenta pequenas elevações em doenças como: Hepatite crônica ativa. REFERÊNCIAS REFERÊNCIAS • Ingram G B P et al. Marcar os resultados. o resultado seja positivo até a diluição 1/64.2 0. Recomenda-se trabalhar acima dos 10°C. Ann N e Acad Sci 1963. • A intensidade da aglutinação não é indicativa da concentração de PCR nas amostras testadas.2 0. é uma proteína sintetizada pelo fígado. 29: 29-32. a febre. com meia-vida em torno de cinco natureza infecciosa e não infecciosa. 4:1 Rua Júlio de Castilhos nº 500 • Gambino R. Resíduo de usar água com detergente neutro e enxaguar abundantemente com água destilada ou deionizada. • Schmidt et al. Am J Clin Pathol 1969. Agitar a placa com suave movimento de rotação manualmente ou em agitador automático a 100 rpm durante 2 minutos e observar a aglutinação sob luz incidente durante 2 minutos e observar a aglutinação sob luz incidente 6 . Em resposta inflamatória mediada por neutrófilo ou monócito a síntese hepática de PCR está aumentada.2mL do 1º tubo para o 2º tubo. . verificar a correta execução da técnica e o estado de conservação dos reagentes. polimiosite. dermatomiosite. Transferir para o 1º tubo 0.2mL restantes.2 Misturar e Transferir ( mL ) 0.451 ed: junho/16 CRF-SP. Pipetar 40 µl de cada tubo e adicionar nas divisões da placa. • Ingram G B P et al.com . (6mg/L) pelo título obtido. a placa deverá ser lavada com água destilada.2 0. hemossedimentação e. o A Proteína C-Reativa é um marcador importante e sensível de inflamação aguda e destruição de tecidos. Diluir o soro em tubos. durante 2 minutos. complicações Reiter. A elevação da PCR precede em pelo menos 12 horas a elevação de outros marcadores de infecção como a leucocitose. esclerodermia e colite ulcerativa. 52-57. Reações por mais tempo podem causar resultados falsos devido efeitos de secagem. a febre. Após o uso. podem aparecer falsas negatividades (efeito prozona).2 0.2mL da amostra. • Halbert SP. 5. infarto agudo do miocardio (até 350mg/L). detergente pode provocar resultados falso-positivo. transferir 0. Utilizar bastões diferentes para cada amostra.com www.85% em cada tubo. 52-57. transferir 0. cirrose.2 0.:Dra. Lab Rep for Physicians 1982. doença mista do tecido conectivo. a síntese hepática não se altera ou aumenta muito pouco. misturar e transferir 0. 5. de referência. • Se a concentração de PCR no soro é muito elevada ( >250mg/L). Adicionar uma gota (40 µl )do Reagente sobre cada uma das divisões. cirrose.2mL do 2º para o 3º tubo amostra.com www. 3. VALORES DE REFERÊNCIA: VALORES DE REFERÊNCIA: Até 6 mg/L Até 6 mg/L Estes valores devem ser usados como orientação. 2. dermatomiosite. amiloidose secundária.São Paulo/SP • Angerman HS. • Bach G et al. polimiosite. estendendo o líquido igualmente sobre cada divisão da 3. MS: 10159820083 / 10159820197 Departamento de Assistência ao Cliente Departamento de Assistência ao Cliente Telefone: (0**11) 2291-2811 Telefone: (0**11) 2291-2811 e-mail: sac@ebram. lúpus eritematoso sistêmico. utilizado durante o prazo de validade e seguindo recomendações do rótulo e dessa instrução de uso. estendendo o líquido igualmente sobre cada divisão da placa. a placa deverá ser lavada com água destilada. hemossedimentação e.020mL (20µL). 3. Misturar com auxílio do bastão descartável. amiloidose secundária. Agitar a placa com suave movimento de rotação manualmente ou em agitador automático a 100 rpm 4.2 0. CONTROLE DE QUALIDADE: Para cada série de testes devem se fazer controles positivo e negativo para CONTROLE DE QUALIDADE: Para cada série de testes devem se fazer controles positivo e negativo para verificar a correta execução da técnica e o estado de conservação dos reagentes. TUBO 1 2 3 4 5 6 TUBO 1 2 3 4 5 6 Solução Salina ( mL ) 0. Ebram Produtos Laboratoriais Ltda. Transferir para o 1º tubo 0. Após o uso. Pipetar 40 µl de cada tubo e adicionar nas divisões da placa.Marcar os resultados.São Paulo/SP CEP 03059-001 CEP 03059-001 ® Marca Registrada ® Marca Registrada CNPJ: 50.2mL do 1º tubo para o 2º tubo.: Para a realização de 100 testes com este kit. Rheumatol 1970.2 . Reações por mais tempo • As reações devem ser lidas logo após 2 minutos da adição da amostra de soro. lúpus eritematoso crônica ativa. A faixa aproximada de PCR presente na amostra pode ser obtida multiplicando-se o limite de sensibilidade A faixa aproximada de PCR presente na amostra pode ser obtida multiplicando-se o limite de sensibilidade (6mg/L) pelo título obtido. OBS. síndrome de (até 350mg/L). mesmo.2 0.657. . Recomenda-se trabalhar acima dos 10°C. síndrome de Reiter. 4. atingindo 100 mg/L. conforme esquema abaixo. O soro com resultado positivo no teste qualitativo pode ser retestado usando o procedimento semi-quantitativo. • As reações devem ser lidas logo após 2 minutos da adição da amostra de soro. LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO • A sensibilidade do teste diminui a temperaturas baixas. de acordo com a população atendida. . . Adicionar uma gota (40 µl )do Reagente sobre cada uma das divisões. 25:63 Belenzinho . Diluições adicionais podem ser preparadas caso o resultado seja positivo até a diluição 1/64. esclerodermia e colite ulcerativa. sendo que cada laboratório deverá criar sua faixa de valores de referência. artrite psoriática e reumatóide. A elevação da PCR precede em pelo menos 12 horas a elevação de outros marcadores de infecção aguda. Em resposta inflamatória mediada por linfócitos.2 0. complicações trombo-embólicas pós cirúrgicas e vasculites. é uma proteína sintetizada pelo fígado. J Reprod Med 1980.2 0. 0. leucemias.2 0.2 0. o aumento e diminuição de sua concentração no soro é utilizada para monitoração de processos inflamatórios de aumento e diminuição de sua concentração no soro é utilizada para monitoração de processos inflamatórios de natureza infecciosa e não infecciosa. a maioria das viroses.2mL da Separar 6 tubos e adicionar 0. MS: 10159820083 / 10159820197 NºReg. como a leucocitose. não excedendo 26mg/L de PCR no soro. com resultado positivo no teste qualitativo pode ser retestado usando o procedimento semi-quantitativo.85% em cada tubo. Ebram Produtos Laboratoriais Ltda. mesmo. Interpretação dos Resultados: Interpretação dos Resultados: Qualitativo: Examinar macroscopicamente a presença ou ausência de aglutinação logo após 2 minutos. Este produto é garantido pela Ebram Produtos Laboratoriais Ltda se conservado na temperatura recomendada. Misturar.