Facultad de Medicina Departamento de Microbiología Centro de Documentación e Información Médica Club de Informática Médica y Telemedicina Editora del atlas: Carla Donado Stefani Universidad de Panamá Este atlas ha sido creado basado en el plan de estudio del curso de Microbiología Médica de la carrera de Dr. en Medicina de la Facultad de Medicina de la Universidad de Panamá. El mismo pretende llevar al estudiante, médico u otro profesional de la salud, las técnicas básicas microbiológicas utilizadas en el diagnóstico clínico. Contenido por temas: q TÉCNICAS BACTERIOLÓGICAS: Morfología bacteriana usando tinciones especiales Efectos de los agentes químicos sobre las bacterias q BACTERIAS DE IMPORTANCIA MÉDICA: Flora normal del cuerpo humano Cocos Gram positivos (piógenos) Bacilos Gram positivos aerobios Microorganismos transmitidos sexualmente Bacilos gram negativos fermentadores y no fermentadores (temporalmente inhabilitado)* Microbiología de agua y alimentos (temporalmente inhabilitado)* Microorganismos anaerobios Mycobacterias q DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO q MORFOLOGÍA Atlas Virtual de Microbiología Médica BACTERIANA Universidad de Panamá USANDO Facultad de Medicina TINCIONES ESPECIALES Morfología Bacteriana Tinciones especiales Tinción de Gram: bacterias Gram positivas de color púrpura, y bacterias Gram negativas de color rojo. ¿Qué ocurre en la tinción de Gram? Gram positivos Gram negativos Diferencias estructurales entre la pared celular bacteriana gram positiva y la gram negativa Tinción de Moeller para esporas: resalta de color rojo la espora bacteriana, y de color morado el bacilo. Klebsiella pneumoniae .Bacillus subtilis Tinción de Anthony para cápsulas: la leche litmus actúa como contraste para crear un fondo rosa oscuro y la cápsula blanca. . . . . se siembra la muestra bacteriana y luego se proceden a colocar discos antibióticos para observar el efecto de los mismos sobre las colonias.EFECTOS DE Atlas Virtual de Microbiología LOS Médica AGENTES QUÍMICOS SOBRE LAS BACTERIAS Prueba de difusión en plato: en un agar Müller-Hinton. formando un halo de inhibición tipo elipse que converge en un ángulo que determina la Concentración Inhibitoria mínima (CIM). E . .TEST: es una técnica que combina las técnicas de dilución y de difusión. Se trata de una tira plastificada que por una de sus superficies contiene un gradiente determinado de concentración de un antimicrobiano. el cual al ponerse en contacto con el agar difunde de igual manera. . FLORA NORMAL DEL CUERPO HUMANO Atlas Virtual de Microbiología Médica Universidad de Panamá Facultad de Medicina Significado de la flora normal Sitios anatómicos con flora normal presente . . ideal para cultivar N. que es la Neisseria gonorrhoeae. gonorrhoeae Agente etiológico de la sífilis: se trata de una bacteria de morfología "espirilada".MICROORGANISMOS TRANSMITIDOS SEXUALMENTE Atlas Virtual de Microbiología Médica Agente etiológico de la gonorrea: se trata de un diplococo. es una levadura denominada Candida albicans. Agente etiológico de la candidiasis: en este caso quien actúa no es una bacteria. denominado "gonococo". en forma de tirabuzón. Medio de cultivo agar "chocolate". la cual es el Treponema pallidum. . Clostridium en agar sangre . junto con el manual que indica la positividad de las mismas.MICROORGANISMOS ANAEROBIOS Atlas Virtual de Microbiología Médica Gas Pack: crea un microambiente anaerobio para el crecimiento de estas bacterias. API para anaerobios: se observa el sistema API para las diferentes pruebas bioquímicas propias de los anaerobios. . . . q Otros Mycobacterium en cultivo: TINCIÓN DE ZIEL-NEELSEN: q El azul de metileno sirve de contraste para la tinción rosada fuscia del Bacilo Alcohol Ácido Resistente (BAAR).MYCOBACTERIUM Atlas Virtual de Microbiología Médica Universidad de Panamá Facultad de Medicina CULTIVO DE MYCOBACTERIUM EN LOWENSTEN-JENSEN: q Hecho a base de huevo y posee como inhibidor para bacterias gram positivas el verde malaquita. tuberculosis. como lo es M. tuberculosis. En la fotografía se aprecia crecimiento de M. . . . . DIAGNÓSTICO PRESUNTIVO EN EXAMEN DIRECTO DE MUESTRAS CLÍNICAS Efecto citopático del CitoMegaloVirus: en infección por CMV se observan células más grandes que las normales.DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO Atlas Virtual de Microbiología Médica Fotos por: Carla Donado Stefani Editado por: Carla Donado Stefani Colaboración: Demetrio Serracín C. El CMV es un virus de ADN. con inclusiones intranucleares basofílicas. parecen grumos. . DIAGNÓSTICO ANALIZANDO CULTIVOS DE CÉLULAS FIBROBLASTOS NORMALES EN CULTIVO DE CÉLULAS EFECTO CITOPÁTICO DEL CMV EN FIBROBLASTOS: se ven redondeados. Dicha inclusión tiene apariencia de un "ojo de búho". Virus de la Rabia (Rabdovirus): en esta muestra de tejido cerebral se observa la formación de inclusiones intracitoplasmáticas conocidas como "cuerpos de Negri". por ello su daño es a nivel nuclear. Se observa transparente como negativo. (El color lo determina el cromógeno que se utilice). DIAGNÓSTICO EN BASE A DILUCIONES . *Nota: lo que dice normal debería ser transparente. amarillo claro. pero producto de un "accidente" quedó verde. negativo transparente.CÉLULAS VERO NORMALES EFECTO CITOPÁTICO DE CMV EN CULTIVO DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO VIRAL Prueba de ELISA para diagnosticar Rubeola y Sarampión: se observan como positivos el color amarillo. Prueba de ELISA para diagnosticar Virus Dengue y Virus del Oeste del Nilo: se observa como positivo el color verde. mayor cantidad de anticuerpos y menor formación de Placas líticas. En este caso. a mayor dilución de la suspensión viral. . A mayor concentración de suero del paciente. menor será la formación de las Placas líticas (recuerda que las placas líticas son producto del efecto del virus sobre las células). se hace una suspensión del virus de la muestra y luego se hacen varias diluciones las cuales se añaden a este medio células cultivadas. Dilución del virus: en este caso se toma la muestra al paciente. Si el paciente tiene anticuerpos para el virus se evitará la formación de Placas líticas (se observan como manchas transparentes en el medio azul).Dilución del suero del paciente: se colocan microplatos con cultivo de células. se les añade a cada uno una cantidad constante del virus y luego el suero del paciente. . . . . . . . . . . . . . . . Staphylococcus aureus Morfologías de cocos gram positivos Pruebas realizadas .COCOS GRAM POSITIVOS (PIÓGENOS) DE IMPORTANCIA MÉDICA Atlas Virtual de Microbiología Médica Universidad de Panamá Facultad de Medicina Los cocos Gram positivos pueden ser: Staphylococcus o Streptococcus La principal forma de diferenciarlos es haciendo la prueba de la catalasa. para la cual. los Staphylococcus son positivos y los Streptococcus son negativos. que muchas otras bacterias. en la cual se puede observar claramente por detrás de la siembra. beta y gamma hemolíticos.Cultivo en Manitol Sal: se basa en observar quién fermentó el manitol sal. 2 = Staphylococcus aureus /Sí fermentó. Es importante aclarar. 1 = Enterococcus faecalis (Streptococcus) /No fermentó. Enterococcus faecalis . Prueba de hemólisis: detecta la presencia de hemolisina. una hemólisis beta. En este caso. pero se usa el cultivo para demostrar el grado de hemólisis. característico de la desnaturalización de la bilis esculina. megaterium. en este caso. aparte de los Streptococcus pueden tener esta enzima. Prueba de bilis esculina: la prueba positiva es de color negro. enzima que permite la clasificación de los Streptococcus en alfa. tenemos sembrado un B. . . . . Si luego de cierto tiempo de refrigeración. es indicativo de que la prueba resultó positiva. megaterium en cuatro puntos equidistantes. Prueba de gelatina: permite medir la presencia de gelatinasa. y por ende. y por ende presencia de amilasa en la bacteria. La prueba positiva muestra un halo incoloro en donde hubo crecimiento. el B. En este caso. . y que la bacteria posee la enzima gelatinasa. la gelatina sigue en estado líquido.BACILOS GRAM POSITIVOS AEROBIOS Atlas Virtual de Microbiología Médica Bacillus megaterium Pruebas realizadas Prueba de amilasa: utilizando agar almidón. se siembra el B. se añade yodo de Gram. subtilis no posee la enzima gelatinasa. el medio se solidificó en refrigeración. Se deja incubar. y luego para definir si hubo o no consumo de almidón.