Abstracto.Aunque existen numerosos métodos para la determinación cuantitativa de antioxidante vitaminas: C, E y A, no existen métodos favorables para el entendido ampliamente analítica la práctica - que tienen varias fallas y limitaciones o requieren aparatos caros. Modificaciones tanto, hemos elaborado de métodos espectrofotométricos valiosos para la determinación cada una de estas vitaminas, que en un principio no se podrían aplicar para el laboratorio la práctica de diversos aspectos. Se basan en: la vitamina C - reacción de color con forma periódica fosfotungstato reactivo preparado; para la vitamina E reacción de color con batophenanthroline,FeCl3 y H3PO4 ; para la vitamina A medición espectrofotométrica de extractos de probado muestras. Pruebas de control mostraron corrección completa de los parámetros analíticos obtenidos con esas modificaciones con preservación de ventajas de los métodos originales. Por lo tanto, se pueden implementar con éxito a los análisis clínicos de rutina. El elaborado modificaciones también se pueden utilizar para la determinación de los A / m vitaminas en los productos alimenticios, para ejemplo: en los zumos, leche y homogeneizados o extractos de alimentos sólidos. Palabras clave: vitaminas antioxidantes, espectrofotometría, alimentos, muestras biológicas INTRODUCCIÓN En ciencias de la nutrición y la medicina, hay mucho interés en los análisis de las vitaminas C, E y A, ya que, además de tener actividad de la vitamina, también se caracterizan por antioxidante de acción y por lo tanto se definen como vitaminas antioxidantes. Al neutralizar especies reactivas de oxígeno y radicales libres de oxígeno en el organismo, estas vitaminas juegan * El trabajo parcialmente presentado en la Conferencia Científica realizó en la Academia de Agricultura en Poznań, Facultad de Ciencias de la Alimentación y Nutrición (2930.01.2007): "Los antioxidantes naturales – desde materia prima para el organismo ". El estudio ha sido apoyado por la Universidad de Medicina otorga No 502-17-019 y 502-17-552. Un papel significativo en la prevención de numerosas enfermedades degenerativas metabólicas [Przeciwutleniacze ..2007]. Como la comida es la principal fuente de las vitaminas para los seres humanos, la determinación de su contenido en los alimentos parece ser un elemento importante de nutritiva Evaluación valor de esos productos [Kompendium ... 2006]. Las pruebas clínicas que se realizan en el material biológico recogido de pacientes son igualmente importantes, porque ellos permitirá reconocer la deficiencia de las vitaminas y de introducir algunos cambios en el la dieta y / o aplicar la suplementación con preparados vitamínicos farmacéuticas cotidiana. Sin embargo, la realización de determinaciones de vitaminas antioxidantes es una difícil analítica tarea. Esto es en gran parte debido a la inestabilidad de estos compuestos que son susceptibles a la atmosférica oxígeno y otros agentes oxidantes, así como al calor, la luz, el pH alto y bajo valores, y la presencia de iones de metales transitorios [Kołodziejczyk 2004]. La elección apropiada métodos analíticos que sería lo suficientemente sensible, precisa, selectiva, y al mismo tiempo no excesivamente tiempo y el trabajo que consume, siendo también ajustado a pequeña volumen de la muestra, disponibles para el análisis de rutina y a Kyaw [1978].7 M (VI).Acc. ajustar el pH a 1.. aún se vean abrumados con varios defectos y limitaciones. Aunque las modificaciones anteriores se han desarrollado para la determinación de antioxidante vitaminas en la sangre. MATERIAL Y MÉTODOS Material Comestible líquido o biológica.en la actualidad usa más frecuentemente Instrumental: electroquímica. 2.El . Los autores elaboraron previamente sus propias modificaciones de algunas espectrofotométrico conocida métodos para la determinación de: vitamina C acc. 1. conveniente para el sentido amplio la práctica analítica. como se le agota (suspensión de 150 g de tungstato sódicomolibdeno libre y 60 g sodio anhidro hidrógeno fosfato en 240 ml desionizada (DI). Rutkowski et al. [1946]. Aunque numerosos métodos para la determinación de vitaminas C.acc.0 añadiendo gota a gota ácido sulfúrico concentrado (VI) . la vitamina E . Equipos Una centrífuga y.financieramente asequible (costo del aparato y los reactivos) también pueden ser molestos.elaborado periódicamente. también se han aplicado para los ensayos en otra biológica muestras incluyendo el jugo gástrico altamente ácido y también tejidos [por ejemplo. Los autores desean proponer la posibilidad de aplicación de estas modificaciones en análisis de alimentos. una nm lámpara UV 250-300. Introducción de complementos. E y A están disponibles: titrometric o . espectrofotometría y cromatografía de [Moszczyński y PYC 1999]. no son adecuados para su aplicación general. debido a las razonesdado en la Discusión. Informes con frecuencia no pueden describir importantes detalles metodológicos. a Tsen [1961] y la vitamina A . fluorométrico.002]. de vidrio o de cuarzo cubetas 1-1.999. Reactivos Determinación de la vitamina C: reactivo fosfotungstato (PR) . lo que puede obligar a interpretaciones individuales propias e inhiben la implementación exitosa de los métodos en la práctica analítica. así como la aplicable a la semimicro pruebas de escala y barato. mezclar con calefacción para disolver y añadir lentamente 145 ml de ácido sulfúrico 3. Estos métodos a pesar que son selectivos. a Bessey et al. calentar la solución para 2 hora con condensador de reflujo no permitiendo que la ebullición.. dependiendo de la vitamina determinado: un agitador de tubos de ensayo.5 ml. correcciones y cambios a esos métodos han llevado a subir de modificaciones. después de enfriar la solución de abajo. homogeneizado (o extracto) de una muestra de alimento o tejido. rápido y fácil de realizar. Las modificaciones de métodos espectrofotométricos . un agua baño. un espectrofotómetro VIS o UV. o como α-tocoferol . mezclar bien y dejar en una temperatura ambiente durante 30 minutos . Determinación de la vitamina C [Rutkowski et al. uno más oscuro es inútil). Determinación de la vitamina E [Rutkowski et al. y recoger la totalidad de los separados sobrenadante con una pipeta . 10 minutos). 23. 0.Añadir 3 ml de xileno.reactivo debe ser luz de color amarillo verdoso. Realización de determinaciones Analizar muestras frescas.8 M de vitamina C (ácido L-ascórbico) solución estándar hecha con solución mM uso 50 de ácido oxálico como disolvente.Centrifugar el tubo (7.98 mM de cloruro de hierro anhidro (III) (estable durante una semana en un refrigerador) y una solución de 40 mM de ácido ortofosfórico cristalino .todo en etanol anhidro.25 ml de solución de batophenanthroline en un tubo de ensayo habitual II .005]: .500 × g.02 solución mM de batophenanthroline * solución (estable durante tres semanas en un frigorífico).7difenil-1. 10 minutos).Preparar la muestra estándar como anteriormente (usando 1 ml de la solución estándar en vez del líquido analizado). 6.Centrifugar el tubo para separar el extracto (1. simultáneamente medir 0.10-fenantrolina.Medida de 0.Medir la absorbancia de la Ax muestra de ensayo y de la muestra patrón Como en 700 nm en contra de la mezcla de PR: solución 50 mM de ácido oxálico = 1: 1 (v / v) como referencia muestra Concentración calcular cx de vitamina C (M) en el líquido analizado. Solución de hidróxido de potasio 1 M en Etanol 90%. Determinación de la vitamina A: xileno (a / a). utilizando el fórmula: * Batophenanthroline es un nombre coloquial comúnmente usado para 4. añadir 1 ml de la PR.5.2 M estándar solución de vitamina E (como sustancia de Trolox * . xileno (mezcla de isómeros).7.000 × g. Determinación de la vitamina E: etanol anhidro. 2. trabajando en el stand protegidos contra la lluvia directa ligero.en anhidroetanol).el sobrenadante es una muestra de ensayo espectrofotométrico para mediciones .5 ml de etanol anhidro y agitar vigorosamente la prueba enchufado tubo durante 1 minuto .En agua DI. constituyendo el 6-hidroxi-2. sin centrifugación . Trolox es un análogo sintético soluble.8-tetramethylchromano-2-carboxílico ácido. conecte el tubo de ensayo y agitar vigorosamente durante otro 1 minuto . 1998]: . 56.5 ml del fluido analizado en el tubo de ensayo I (centrífuga) con un apretado tapón.Medida 1 ml del líquido analizado en el tubo de ensayo de centrífuga. añadir 0. el agua de la vitamina E (precisamente de α-tocoferol – se se forma predominante). 25 ml de FeCl3 solución al tubo de ensayo II. utilizando α-tocoferol – añada 0.A2) · 22..25 ml de solución de H3PO4 y mezclar de nuevo .multiplicador recibidos sobre la base del coeficiente de absorción de la solución de 1% de vitamina A (como la forma retinol) en xileno a 335 nm en un medidor cubeta sobre espesor = 1 cm.Medida de absorbancia de la Ax muestra de ensayo y de la muestra patrón Como al 539 nm frente al ensayo en blanco (preparación .Calcular la cx concentración de vitamina A (M) en el líquido analizado.Irradiar el extracto en el tubo de ensayo II a la luz UV durante 30 minutos.23 dónde: 22.5 ml de agua DI en lugar de etanol anhidro al inicio del análisis.Recoger 1. constaba de tres etapas que se presentan en detalle en la discusión.de esta manera una muestra de ensayo se obtiene para espectrofotométrico mediciones . traslado al tubo de ensayo II y mezclar el contenido . y luego enfriarlo con agua fría .5 ml de la solución estándar en lugar de lo analizado líquido): usando Trolox . utilizando el fórmula: cx = (A1 .Centrifugar el tubo (1. E y A.. añadir 0. conecte el tubo y agitar vigorosamente durante 1 minuto . luego medir la absorbancia A2 .Añadir 0. no centrifugar esta muestra .como muestra de ensayo. Determinación de la vitamina A [Rutkowski et al.500 × g. 2. 20 minutos).5 ml del extracto (capa superior).006]: .23 . 10 minutos). recoger la totalidad del extracto separado (capa superior) y la transfiere al tubo de ensayo II de vidrio "suave" (de sodio) . conecte el tubo y agitar de nuevo vigorosamente durante 1 minuto . Las modificaciones de métodos espectrofotométricos. RESULTADOS Nuestro propio estudio sobre modificación de los métodos seleccionados para la determinación cuantitativa de vitaminas C. proporcionándoles la utilidad para la práctica analítica. mezcla.Añadir 1 ml de xileno.Calentar el tubo en un baño de agua (60 ° C. ..preparar como muestra de ensayo.Medida 1 ml de líquido analizados para el tubo de ensayo I (centrífuga) con un apretado tapón y añadir 1 ml de la solución de KOH. pero utilizando agua en vez del líquido analizado) .Calcular la concentración cx de la vitamina E (M) en el líquido analizado. utilizando la a / a fórmula presentada.Medir la absorbancia A1 del extracto obtenido a 335 nm frente xileno .Preparar la muestra estándar (0. Cumplimiento de la ley de Lambert-Beer dentro del rango especificado de las concentraciones con la linealidad total resultante de las curvas y de su paso por el punto 0 .como resultado de los requisitos de la rutina análisis '.6. se confirmó la alta precisión de los métodos por su repetibilidad y reproducibilidad.para la determinación en material biológico.465. Basado coordinan en las curvas que encontramos como sigue: .79. 2.2. Los parámetros se . los valores medios de los cuales se obtuvieron a partir de tres veces repetidas pruebas y sólo fueron ligeramente diferente a 100%.Ningún efecto de las proteínas de suero en la A / m curvas que sugiere su desnaturalización completa durante los trabajos de análisis y la falta de injerencia de otros reductores presente en el suero.4. así como para adaptar el método por el Tsen [1.93. para la vitamina E (como sustancia Trolox) 5. Precisión adecuada de los métodos modificados fue confirmada por pruebas de recuperación. Límite de detección de la aplicación 0. inconsistencias y defectos encontrados experimentalmente.05 M) resultante a partir de grandes ángulos de inclinación de las curvas . Los resultados conjuntos de ambos la primera y segunda etapa se convirtió propias modificaciones de los métodos originales seleccionados. 56.8. manteniendo sin cambios las bases analíticas que fue ejecutado el .de vitamina C y Se han usado formas solubles en agua de las vitaminas E y A.Muy buena sensibilidad de todos los métodos (. Además. 113.2.4.ácido ascórbico): 14.86.los equipos y de procedimiento modificaciones . La segunda etapa del estudio incluyó modificaciones de las bases analíticas para particulares métodos con respecto a los resultados obtenidos en la primera etapa con el fin de evitar las lagunas existentes descriptivos. para la vitamina A (en forma de complejo de acetato de retinol y cyclodextrane) 0.8. 11. 23. 85. 3.en la realización de formas de determinaciones definidas en los métodos originales.En la primera etapa. 0. Los resultado de esta etapa de las investigaciones era atribución a los métodos modificados de una técnicamente forma útil para la práctica analítica. 1.en el suero bovino como un disolvente . 46.Alta precisión de los métodos modificados que fue determinado por el logro de los coeficientes de curvas de correlación casi hasta 1 . 28. Las soluciones estaban sujetos a los procedimientos de acuerdo con los algoritmos desarrollados de determinaciones y medidas de absorbancia finales produjeron conjuntos de puntos determinar curvas de análisis en la A.8.6. que el control de la corrección analítica fue sometido en la tercera etapa del estudio. C sistema que se presenta en la Figura 1. Serie individual incluido concentraciones dentro del rango fisiológico para esos vitaminas (M): para la vitamina C (como L.2. Una serie de soluciones estándar .72. 34. Las pruebas de control se realizaron de acuerdo con el desempeño de las determinaciones en biológica líquidos.961] que fue diseñado exclusivamente para la determinación de la vitamina E en soluciones . 955].2'-bipiridilo. La vitamina E puede determinarse espectrofotométricamente con dos métodos populares relativa a la llamada. espectrofotometría parece ser utilizado con mayor frecuencia en analítica laboratorios. El color resultante permite la absorbancia medición. pero se caracteriza por una baja sensibilidad.ensayaron para 5 consecutivo día: concentraciones de vitaminas C. Como resultado. E y C en el material biológico en una precisa. 21.6.4. Intra-serie coeficiente de variación fue estimado a partir de las concentraciones medias obtenidas cada día (n = 10) y osciló entre 0. FeCl3 y H3PO4 [Sullivan y Clarke 1. respectivamente) se determinaron.3-dioxo-L-gulónico (metabolito biológicamente inactiva de la vitamina C) en las muestras analizadas. sin embargo no es suficientemente preciso. K.7% a 3. DISCUSIÓN Para ser capaz de determinar las vitaminas A.values de parámetros analíticos para las modificaciones desarrolladas de todos los métodos que se obtuvieron durante los estudios de validación discutidos anteriormente. pero no totalmente selectiva y requieren separada mediciones de absorbancia para el color resultante y después de su retirada. cualquier comparativa análisis tanto. Varias adaptaciones espectrofotométricos de titulación los Tillmans ' método que utiliza 2.2%. además de que también requiere de incubación de 3 horas a 37 ° C y adición de H2SO4 concentrado a las muestras. Coeficiente de Inter-serie de variación calculada basado en los medios diarios individuales (n = 5) fue incluso 4. E y A en soluciones de suero almacenados a -80 ° C (nominales concentraciones: 51. sus resultados están exageradas debido a la presencia de ácido 2. La método. Otro método bien conocido que utiliza soluciones acuosas de 2. entre otros en análisis de los alimentos para la determinación de muchos compuestos naturales.34 m. A pesar de la disponibilidad de numerosos métodos instrumentales. los métodos espectrofotométricos son ampliamente utilizados. incluyendo vitaminas. 1979]) son igualmente aplicada.una suma de la reducida y forma oxidada (ácido dehidro-L-ascórbico). permite determinaciones selectivos de la vitamina C reduce. De acuerdo con el primero [Emmerie y Engel 1. 1. la vitamina E total que es una mezcla de cuatro tocoferoles y cuatro tocotrienoles. Un método popular usando 2. Numerosos métodos espectrofotométricos permiten la determinación cuantitativa de la reducida forma de vitamina C (ácido L-ascórbico) o. pero es inestable y dura sólo .2% . es imposible. rápida y barato manera espectrofotometría fue elegido. Grzegorczyk extrajeron con bencina de petróleo a partir de las muestras analizadas y los extractos se exponen a soluciones de etanol de 2. la disponibilidad de espectrofotómetros como aparatos no muy caros y el uso de fácil acceso. ya que relativamente reactivos baratos. Son fáciles de realizar. así llamado. se presentan en la Tabla 1.943] se utiliza para la determinación del total vitamina C.6diclorofenolindofenol (por ejemplo [Omaye et al.2'-bipiridilo y FeCl3.3. la vitamina C total . Los autores de los métodos originales no realizó estudios similares. curso lento de la reacción (1 hora) y la turbidez de las muestras analizadas que requiere su centrifugación final.35. Esto es debido a una buena precisión del método.938] La vitamina E es ex M.dinitrofenilhidrazina [Roe y Kuether 1. Rutkowski. SbCl3 es susceptible de trazas de humedad y muestra propiedades corrosivas. Los hidrolizado se extrae con éter etílico. valores bajos de pH . Numerosos inconvenientes de los métodos populares para la determinación de vitaminas antioxidantes que se han mostrado aquí atrajo nuestro interés espectrofotométrico menos conocido métodos. Todas pero el último de los métodos presentados requiere también un poco de trabajo y el tiempo adicional para desproteinización en las muestras de prueba .según sus autores . se lavó con agua y el extracto separado es se evaporó bajo nitrógeno hasta seco. La muestra de ensayo mezclado con etanol y solución acuosa de KOH se calienta bajo nitrógeno hasta que se hierve durante 30 minutos para la desproteinización y la hidrólisis de los ésteres de vitamina A (retinol) principalmente acetato. también. los resultados se obtienen calculationally.002. Una modificación posterior [Desai y Machlin 1985] se diferencia en las concentraciones y volumen de soluciones de reactivos e intercambia heptano como el agente de extracción para el xileno menos inflamable. La extracción de la muestra con heptano también fue adoptado en este método. 10 segundos). Por otra parte.están libres de defectos analíticos. En el otro método [Hashim y Schuttringer 1966] esos inconvenientes se han evitado mediante la sustitución de 2. hace resultados fiables imposible de obtener.véase la Introducción). selectividad y sensibilidad a la baja determinación.durante 30 segundos. Inestabilidad marcada del color resultante que se encontró para la versión modificada. que . El más ampliamente utilizado [Carr y Price 1926] se basa en el uso de la solución SbCl3 en cloroformo actuación sobre el extracto a base de cloroformo del la vitamina A.2-bipiridilo con batophenanthroline y la introducción de H3PO4 para aumentar la estabilidad del color. El residuo se disolvió en isopropanol se mide para absorbancia a varias longitudes de onda. Sin embargo. Hay dos métodos espectrofotométricos conocidos para determinación de vitamina A que se utilizan para los extractos. los resultados se leen de las curvas de calibración (como se conoce la preparación es tiempo y trabajo a tarea que consume). ya que es un ácido fuerte. En el caso de todos los demás métodos de determinación de vitaminas antioxidantes que se han discutido. los carotenoides y otros polienos con la absorción picos cercanos a la de retinol interfieren con la vitamina A. para sus máximos de absorción son diferentes de las del retinol libre en UV. El método se caracteriza por una alta sensibilidad. También hay que señalar que en el caso de la determinación cuantitativa de vitamina A usando El último método. que puede actuar destructivamente en las vitaminas determinado (aquellos susceptibles a. y las lecturas de absorbancia fluctuar dentro de la gama de ± 0. entre otros. .con ácido tricloroacético. sino también por carotenoide interferencia (correcciones analíticas son obligatorios) con el color que resulta extremadamente inestable (aprox. Nuestros intentos de aplicar la Este último método demostró que el color resultante es demasiado oscuro. La vitamina A también se puede determinar utilizando el método de medición espectrofotométrica directa en UV [Parrish 1977]. a raíz de sustitución de la medido valores de absorbancia a dos fórmulas. El método de determinación selectiva de vitamina E (total) [Tsen 1 961] que era elegido. Los trabajos sobre la aplicación del método de determinación de la vitamina C de acuerdo con Kyaw [1. A pesar del hecho de que el método fue desarrollado para el análisis de la vitamina E en soluciones. es inútil. utilizando un PR preparado periódicamente [Kyaw 1978]. absorbancia de la cual se mide. 20 × 0. Los mediciones de absorbancia del extracto (en una sola longitud de onda) se combinan con la eliminación de la interferencia e incluir como sigue: I medición de la absorbancia suma de la vitamina A y las sustancias que interfieren. que el reactivo de fosfotungstato cual se prepara según la descripción original. Además.977]. También parece imposible introducir un método para la determinación de vitamina A según a Bessey et al. vitamina A liquidación con luz UV. 20 minutos) sin la necesidad de usar la atmósfera de nitrógeno. que se basa en otro principios que el método por Parrish [1. la adaptación debe preocupar . se utiliza para la extracción que hace enjuagando con redundante agua. Lagunas descriptivas y metodológico inconsistencias que se encontraron excluyen la posibilidad de aplicar el presentado procedimiento analítico como una guía para las determinaciones. El computacional resultado de la determinación totalmente selectiva se obtiene de una fórmula simple. debido a la mezcla de baja volatilidad del procedimiento no requieran ningún cambio de disolvente o cualquier evaporación asociada con este proceso. resultados correctos de los ensayos (usando las soluciones de α-tocoferol en etanol) Las modificaciones de métodos espectrofotométricos .nos animó a adaptarlo a la realización de determinaciones en líquidos biológicos. Para el determinación de vitamina A. 1946]. La muestra de ensayo es la proteína-agotado y hidrolizado con la solución de KOH en etanol. la medición II de las sustancias de interferencia absorbancia. [1946] de una manera sencilla porque el método requiere el uso de highpurity queroseno que no es de fácil acceso. después de la centrifugación el autor .de acuerdo con el tema del estudio . Este reactivo se reduce por el ácido L-ascórbico que está contenido en la muestra y produce el tungsteno azul.3 cm tubos de ensayo con una forma inusual de centrifugación de las mezclas de post-extracción (utilizando un taladro eléctrico con un especial la cabeza. eliminando así la necesidad de eliminación de proteínas como un separada paso. tiene el mismo fondo que el batophenanthroline discutido previamente método con su modificación.978] mostró sin embargo. El queroseno-xileno KOH mezcla en la que no se disuelve. cálculo de la vitamina A determinada absorbancia siendo una diferencia entre los resultados de las mediciones I y II. Los denaturates PR también proteínas contenido en la muestra. lo que permite más suave y más corto de calentamiento (60 ° C. pero utiliza diferentes concentraciones y proporciones de reactivo soluciones. La falta de una descripción detallada del procedimiento analítico puso un obstáculo grave en el proceso de adaptación del método por Tsen [1961] para las determinaciones realizadas en fluidos biológicos.el análisis de las soluciones de vitamina E. hemos decidido aplicar un método espectrofotométrico directo medición en UV [Bessey et al. Además.Hemos decidido introducir un método selectivo y rápido para la determinación de la reducción forma de la vitamina C. La muestra también es parcialmente extraída.7 M se introdujo en lugar de la mezcla 15: 5 v / v de agua y H2SO4 (d = 1. Se utilizó Na2WO4 molibdeno libre (contenido de Mo ≈ 0. Cambios en la forma de la preparación de reactivo phosphotungsten eran de la mayor importancia para el modificación. que se complementó con extracción con un xileno no polar. En la modificación del método para la determinación de vitamina A [Bessey et al.antes de la reacción de color se llevó a cabo. una especialmente construido Lámpara UV para la irradiación de los extractos y cubetas espectrofotométricas estrechas atípicos. y 12-hidrato durante el almacenamiento y en el mencionado método original fue reemplazado por la sal anhidra y la solución de H2SO4 3.agrietado los tubos precortadas en la frontera de la fase orgánica y acuosa y extractos recogidos con una pipeta). para vitamina E que está presente en dichos líquidos se diluyó durante la extracción de proteínas y extracción por el etanol y xileno . Concentraciones originales de soluciones de reactivos fueron preservadas. EL agitador se utilizó para mezclar el contenido de los tubos de ensayo durante la extracción de proteínas y extracción. El reactivo se preparó usando el agua DI para que el agua estaba libre de trazas de pesada metales y el reactivo se protegió de la ebullición durante el periodo de calentamiento de 2 horas. Todo el volumen de proporciones fue corregido para lograr la concentración de vitamina E igual al método original.0.84). Na2HPO4 · · 2H2O de someterse a la hidratación a 7. Para desarrollar un procedimiento analítico que se adapta a las determinaciones que realizan en líquidos biológicos fue el tema clave al modificar el método para la determinación de vitamina E [Tsen 1961]. se utilizaron todos los reactivos aplicados en anhidro formulario incluidas etanol. de la desnaturalización con etanol. En lugar de la pequeña tabla original que se usó para un cálculo simplificado de las concentraciones en base a la absorbancia medida. una fórmula era aplicada para calcular con precisión las concentraciones de la vitamina determinada. pero era imposible aplicar las relaciones de volumen originales entre ellos y los líquidos analizados. 1946] equipos de fácil acceso se introdujo a los análisis: tubos de ensayo centrífugas .001%). Parámetros de centrifugación se cambiaron para recibir algunos sedimentos más compactos lo que facilita la separación y recogida de los sobrenadantes. Nuestra modificación del método para la determinación de la vitamina C [Kyaw 1978] evita una transferencia problemática de las mezclas de reacción posterior de tubos de ensayo habituales a los centrífugos tubos de ensayo y presenta un tratamiento de laboratorio de los fluidos analizados en estos últimos. Nos pusimos de acuerdo para llevar a cabo el procesamiento en testtubes centrífugas. ya que no introduce ningún iones extraños. Un se adoptó fácil método de ajuste del pH al valor requerido de 1. A garantizar la estabilidad de la reacción de color producido. Procedimientos que eran encontrado que falta o se describe en una forma incompleta se completaron. hace no cambia el pH y no destruye la vitamina susceptibles E. que fue causado por las modificaciones aplicadas y debido a usar pasado de moda. basado en la espectros de absorción en las pruebas de UV y recuperación. menos espectrofotómetros precisos por los autores originales (que utilizan el Lambda 14P aparato de Perkin-Elmer).Para el procesamiento y la centrifugación de los líquidos analizados. 328nm para vitamina A). Las propias modificaciones presentadas por los métodos seleccionados para la determinación espectrofotométrica vitaminas antioxidantes. Famosa. Esa aplicación permitido del mencionado modificaciones en la práctica clínica. leche y productos sólidos (sus homogeneizados o extractos). sino también en otras muestras biológicas. y numerosos científica estudios. el período de tiempo de la extraer exposición a UV fue optimizado y el valor del coeficiente en el presente fórmula de cálculo se corrigió. donde fueron utilizados con éxito no sólo para análisis realizados en la sangre. además de tener muy buenos parámetros analíticos (ver Resultados) y siendo plenamente utilizable para el análisis de rutina. En opinión de los autores que se pueden utilizar más de determinación de vitaminas C. Łódź) y semi-microcubetas estándar. Proporcionó simplemente una comparación teórica de cuatro disolventes: petróleo benzin.son también los analitos de origen biológico. Sobre la base de la absorción espectros La longitud de onda utilizada para las mediciones de absorbancia se corrigió para los dos últimos métodos (original: 534 nm para la vitamina E. Para facilitar los procedimientos analíticos. algoritmos para determinaciones se han desarrollado para todos los métodos modificados. una lámpara UV analítica populares ("Emita". rápido rendimiento de laboratorio. un agitador de tubos de ensayo – para mezcla de los tubos de contenido durante la desproteinización con la hidrólisis y extracción. Se presentan en Materiales y métodos. Teniendo xileno introdujo como el único agente de extracción en nuestros propios estudios. asegurado preservación del ventajas de los métodos originales: adaptación para determinaciones semi-micro escala. tolueno.a partir de la analítica punto de vista . Bessey etal. una típica centrífuga de laboratorio. que . y sus bajos costos y fácil. método espectrofotométrico también se utiliza y su facilidad de uso podría . E y A en los productos alimenticios. evaluando de esta manera su capacidad para disolver la vitamina A y su volatilidad . que el queroseno disponible comercialmente disponible como grado "farmacopea" "puro" y de pureza y su purificación adicional es una tarea laboriosa que dura varios días. permitió la retirada del highpurity disponible queroseno y el uso de xileno exclusivamente para los fines de determinación. Cabe señalar. xileno y queroseno. con un quemador de 6 W y el filtro de madera. Las pruebas comparativasde extracción con la mezcla de queroseno-xileno y con xileno solo. Aunque las técnicas instrumentales equipmentically avanzado predominan en los análisis de alimentos..y él eligió los dos últimos como una mezcla 1: 1. por ejemplo: en los zumos (siguiendo su decoloración con carbón activado). [1946] no demostrar la necesidad de utilizar queroseno para la extracción de la analizada muestras. incrementarse en los métodos que se sugieren en este estudio. totalmente aplicable para determinaciones de rutina. 3. los altos precisión. Las modificaciones desarrolladas de métodos para la determinación de vitaminas antioxidantes permitidas para evitar fallos sustanciales asociados con los métodos originales y para conservar todas sus ventajas ser así. proveen una oportunidad para su uso en análisis de alimentos. barato y hecho con un equipo de fácil acceso.. Las modificaciones de métodos espectrofotométricos. . son rápidos. CONCLUSIONES 1. 2. Los efectos beneficiosos de la aplicación de las modificaciones mencionadas para determinaciones en diversas muestras biológicas que se realizan para la clínica y científica propósitos. muy buena sensibilidad y precisión. en contraste con los métodos anteriores. fáciles de realizar. Todas esas modificaciones se caracterizan por la selectividad de las determinaciones..