ANTICUERPOS EN LESDR. CARLOS EDUARDO LEIVA RODRIGUEZ INTRODUCCION La respuesta inmune humoral protege al organismo de diversos patógenos a través de Igs. Para realizar esta función el sistema inmune genera Acs contra los antígenos foráneos. La producción de anticuerpos que se unen a auto-determinantes es una característica en LES. Algunos autoanticuerpos en LES son considerados marcadores de enfermedad. Otros tienen un rol en la patogénesis de LES. Propiedades generales Los autoanticuerpos en LES son en su mayoría IgG, pero también existen IgM e IgA. La mayoría de autoanticuerpos a ácidos nucleicos o proteínas en LES están enriquecidas en las subclases IgG1 e IgG3 dependientes de linfocitos T. Una proporción de anti-Sm y anti-ribosoma P son de la subclase IgG2 (independiente células T). Anticuerpos anticardiolipina tienen una Propiedades generales En la mayoría de enfermedades autoinmunes, los anticuerpos son policlonales. Los autoanticuerpos tienen las características de una respuesta inmune secundaria: Títulos altos de anticuerpos tipo IgG. Evidencia de amplia mutación somática típica de una respuesta inmune guiada por antígeno. Restricción de idiotipos, particularmente en anticuerpos anti-DNA. Autoantígeno s en LES Autoantígenos en LES Anticuerpos anti-DNA DNA forma doble hélice, compactado en cromatina, interactuando con histonas. Nucleosoma: subunidad de cromatina Cada uno comprende alrededor de 200 pares de bases enrrollados alrededor de un octámero de histonas. Tres formas de DNA son antigénicas en LES: DNA de cadena simple DNA de doble cadena DNA zurdo (Z)DNA Anticuerpos anti-DNA Fuerte asociación con nefritis lúpica. Los complejos inmunes DNA-anti DNA son responsables de la formación in situ de reactantes inmunes. Anticuerpos anti DNA pueden presentar reacción cruzada con antígenos carga (-) del glomérulo. No son sine qua non para el desarrollo de nefritis. Pueden existir niveles altos de anti-DNA sin presentar clínicamente nefritis. Antihistona-antinucleosoma Acs antihistona juegan un rol importante en la demostración de autoinmunidad de LES. Se demostró que las histonas fueron necesarias para mantener la antigenicidad del núcleo para producción de células LE. Han sido detectados en hasta 90% de pacientes con LES por drogas o idiopático. No existe relación clara entre actividad de enfermedad y títulos de Acs. Antihistona-antinucleosoma Procainamida y quinidina inducen Acs IgG reactivos con (H2A-H2B)DNA. Hydralazina y clorpromazina inducen Acs IgM que unen a H1, H3-H4, H2A-H2B y ssDNA. También se han encontrado en AIJ y ESP. Anti Ku (nuclear factor IV) Ku es un heterodímero que comprende dos proteínas de 70kDa y 86 kDa. Se une preferentemente a dsDNA y tiene un papel en la reparación del DNA. Acs Anti Ku producen tanto patrón nuclear y nucleolar en IFI. Ha sido detectado en sd. de superposición, esclerodermia, LES. Anti-PCNA Antígeno nuclear de proliferación celular es una proteína de 36 kDa conocida por ser una proteína auxiliar de la DNA polimerasa delta. Es observado en 5% de pacientes con LES. Sólo produce IFI nuclear positivo en células en división. Anti-RNA En el núcleo el DNA es transcrito a RNA por la RNA polimerasa (pols) Pol I sintetiza rRNA. Pol II sintetiza mRNA. Pol III RNA citoplasmático y nuclear. Acs que reaccionan contra RNA de simple y doble cadena se han reportado en hasta 60% en LES. También en otras enf. autoinmunes en menor frecuencia. AntiSm, antiRNP, antiU1 RNA La proteínas Sm y RNP están compuestas por RNA rico en uridina para formar RNPs nucleares pequeños (snRMPs). Proteína Sm está presente en todos los snRNP. Las proteínas RNP están presentes sólo en el U1 snRNP. Reactividad de anti-Sm es del 3-30% en LES. Puede estar presente antes de las manifestaciones clínicas. Anti Ro(SS-A) y anti-La (SS-B) La es una fosfoproteína nuclear que une al precursor tRNA y 5S rRNA. Las proteínas Ro más características son la Ro 60 y la Ro 52. Acs para Ro 60 está presente en 25-40% LES, mientras que para La es 10-15%. Presentes en LES subcutáne0, neonatal, mejora en nefritis. Anti Ribosoma P Acs anticitoplasmático. Altamente específicos para LES. Prevalencia del 10-40% en LES. Se encuentra presente durante fase activa, en nefritis, y en hepatitis lúpica. Más frecuente en la presentación juvenil del LES que en la del adulto. Asociación controversial con lupus neuropsiquiátrico. Mecanismo de daño tisular Autoanticuerpos en LES Anticuerpos Antinucleares Los ANA son usados como medio para determinar si un individuo con problemas articulares tiene una enfermedad reumática autoinmune. Una ANA positivo un indicador serológico de enfermedad autoinmune, aunque otras pruebas de la mano de la clínica establecen el dx. Inicialmente identificados por IFI, actualmente se han descrito más de 100 Ag-Ac identificados usando técnicas más sofisticadas. Anticuerpos Antinucleares Anticuerpos Antinucleares El diluciones altas (1:320), en un escenario clínico apropiado, la interpretación del ANA es sencilla. Los resultados de ANA difieren según el sustrato. Actualmente, la técnica más ampliamente descrita es la IFM en células HEp-2. El 3.3% de individuos “sanos” son ANA positivos a títulos de 1:320 dils. El 31.7% lo es a una dilución de 1:40. El 10-37% de mayores de 70 años: ANA +. Anticuerpos Antinucleares Anticuerpos Antinucleares Puede existir ANA+ antes del dx de LES. En un estudio de más de 5 millones de inviduos: ANA + en 101 de 130 pacientes con LES hasta 9.2 años antes del diagnóstico. Se encontró una acumulación progresiva de autoanticuerpos antes de la presentación de LES. ANA, anti-DNA, antifosfolípido, anti-Ro, anti-La presentes antes de anti-Sm y anti-RNP. Anticuerpos Antinucleares Existen ciertas asociaciones de patrones de ANA y ciertas manifestaciones clínicas: Anti-RNP con fenómenos de Raynaud. Anti-Ro, anti-La con síntomas sicca. Anti ribosomal P con anemia hemolítica. En LES inducido por drogas existe un ANA+ causado por Acs hacia histonas. Anti histonas es encontrado hasta en 80% de pacientes con LES idiopático, no se relaciona con alguna manifestación clínica característica. Anticuerpos Antinucleare s Lupus ANA negativo? ANA negativo en pacientes lúpicos es actualmente un hallazgo muy raro: 2%. Autoanticuerpos contra Ro y La encontrados en 90% de ANA(-) por ELISA. Existe una distribución variable de Ags Ro y La en las diferentes especies. ANA(-) tras remisión en 10 a 20% de pacientes, en especial aquellos con compromiso renal. Anticuerpos Antinucleares Los dos patrones de ANA más frecuentemente vistos son: Nucleoplásmico homogéneo. Nucleoplásmico moteado Cualquiera de estos puede ser encontrado en individuos sanos, sobre todo en adultos mayores. Los patrones de ANA en pacientes con enfermedades autoinmunes varían de paciente a paciente y sobre el tiempo en un individuo. Patrón nucleoplásmico homogéneo Se da debido a la presencia de ANA dirigido hacia los constituyentes de la cromatina: dsDNA Histonas Nucleosomas En algunos casos un patrón nucleolar homogéneo acompaña al patrón nucleoplásmico. Anticuerpos para dsDNA y constituyentes del nucleosoma muestran reactividad en Patrón homogéneo Patrón nucleoplásmico moteado El patrón moteado grueso está dado por la presencia de anti-U1 RNP/Sm. El patrón moteado grande abarcan sólo los gránulos de intercromatina, usualmente resultan negativos en estudios anti-ENA. Epitopes en las moléculas de hnRNP que son blanco de éstos anticuerpos están localizados en dominios unidos a RNA y son inaccesibles en células intactas. Patrón moteado grande Patrón moteado grueso Patrón nucleoplásmico moteado El patrón moteado fino se puede detectar sólo en 10-15% de suero dirigido a SSA(Ro)/SSB(La). Proteína SSA(Ro)-60 ha sido sobreexpresada de forma recombinante en algunas células HEp-2. Este sustrato parece ser superior para detectar anti-SSA(Ro)-60 en pacientes que tienen este antcuerpo: LES y SS. Patrón moteado fino Patrón centromérico En SS la mayoría de pacientes tiene Acs a centrómeros (kinetocoros): CREST. Anticuerpos anticentrómero se dirigen hacia las proteínas centroméricas externas: CENP-A 18 kDa CENP-B 80 kDa CENP-C 140k Patrón centromérico Patrón nucleolar Cuando se categorizan los anticuerpos antinucleolares por sus patrones en IFI tenemos: Un patrón nucleolar homogéneo: anti-Th/To y anti-B23 (nucleophosmin). Un patrón nucleolar en racimos que también vincula cuerpos en espiral (cuerpos de Cajal). Es característico de anticuerpos contra U3RNP, fibrilarina. Un patrón nucleolar fino punteado que puede representar anticuerpos para RNA polimerasa I, NOR-90 o ASE-1. Patrón nucleolar homogéneo Patrón nucleolar en racimos Patrón nucleolar punteado Patrón nucleolar Anticuerpos anti-topoisomerasa I (Scl-70) muestra un patrón moteado nucleolar y un patrón granular fino nucleoplásmico. Anticuerpos anti PM/Scl muestran un patrón homogéneo nucleolar y un patrón moteado fino nucleosómico. Anti Ku muestra un patrón moteado fino nucleoplásmico y nucleolar. Patrón nucleolar Patrón citoplasmático Patrón citoplasmático difuso, a veces acompañado por un patrón homogéneo débil, indicativo de anti Ribosoma P. Patrón moteado o difuso con apariencia de cielo estrellado visto en anti-Jo-1. Un patrón granular similar a mitocondria, visto con anti M2 dirigidas a piruvato deshidrogenasa visto en cirrosis biliar primaria. Patrón citoplasmático difuso Patrón citoplasmático moteado fino Patrón citoplasmático mitocondrial Conclusiones Algunos anticuerpos tienen una alta especifidad para LES, particularmente: Anti Sm Anti dsDNA Anti ribosoma P Anti PCNA Algunos anticuerpos están asociados a algunas manifestaciones clínicas características. Algunos anticuerpos pueden causar daño tisular de forma directa o indirecta, Conclusiones Pueden proveer de pistas importantes para determinar la etiología en LES. Pueden ser inducidos por componentes antigénicos liberados por células apoptóticas o exosomas liberados por células vivas. Autoanticuerpos son herramientas útiles para explorar la función de los antígenos celulares. Anticardiolipin antibodies cross-react with negatively charged phospolipids such as phosphatidylserine (PS) that are exposed on the outside of the cell membrane on dying cells; anti-DNA and antihistone are targeted to nucleosomes that are released from the nucleus of apoptotic cells; anti-Sm/RNP and anti-Ro/La translocate from the nucleus into apoptotic blebs. Living cells (e.g. dendritic cells, B cells, salivary gland epithelial cells) secrete small antigenpresenting vesicles GRACIAS