Anticuerpos en Les

ANTICUERPOS EN LESDR. CARLOS EDUARDO LEIVA RODRIGUEZ INTRODUCCION La respuesta inmune humoral protege al organismo de diversos patógenos a través de Igs. Para realizar esta función el sistema inmune genera Acs contra los antígenos foráneos. La producción de anticuerpos que se unen a auto-determinantes es una característica en LES. Algunos autoanticuerpos en LES son considerados marcadores de enfermedad. Otros tienen un rol en la patogénesis de LES. Propiedades generales Los autoanticuerpos en LES son en su mayoría IgG, pero también existen IgM e IgA. La mayoría de autoanticuerpos a ácidos nucleicos o proteínas en LES están enriquecidas en las subclases IgG1 e IgG3 dependientes de linfocitos T. Una proporción de anti-Sm y anti-ribosoma P son de la subclase IgG2 (independiente células T). Anticuerpos anticardiolipina tienen una Propiedades generales En la mayoría de enfermedades autoinmunes, los anticuerpos son policlonales. Los autoanticuerpos tienen las características de una respuesta inmune secundaria: Títulos altos de anticuerpos tipo IgG. Evidencia de amplia mutación somática típica de una respuesta inmune guiada por antígeno. Restricción de idiotipos, particularmente en anticuerpos anti-DNA. Autoantígeno s en LES Autoantígenos en LES Anticuerpos anti-DNA DNA forma doble hélice, compactado en cromatina, interactuando con histonas. Nucleosoma: subunidad de cromatina Cada uno comprende alrededor de 200 pares de bases enrrollados alrededor de un octámero de histonas. Tres formas de DNA son antigénicas en LES: DNA de cadena simple DNA de doble cadena DNA zurdo (Z)DNA Anticuerpos anti-DNA Fuerte asociación con nefritis lúpica. Los complejos inmunes DNA-anti DNA son responsables de la formación in situ de reactantes inmunes. Anticuerpos anti DNA pueden presentar reacción cruzada con antígenos carga (-) del glomérulo. No son sine qua non para el desarrollo de nefritis. Pueden existir niveles altos de anti-DNA sin presentar clínicamente nefritis. Antihistona-antinucleosoma Acs antihistona juegan un rol importante en la demostración de autoinmunidad de LES. Se demostró que las histonas fueron necesarias para mantener la antigenicidad del núcleo para producción de células LE. Han sido detectados en hasta 90% de pacientes con LES por drogas o idiopático. No existe relación clara entre actividad de enfermedad y títulos de Acs. Antihistona-antinucleosoma Procainamida y quinidina inducen Acs IgG reactivos con (H2A-H2B)DNA. Hydralazina y clorpromazina inducen Acs IgM que unen a H1, H3-H4, H2A-H2B y ssDNA. También se han encontrado en AIJ y ESP. Anti Ku (nuclear factor IV) Ku es un heterodímero que comprende dos proteínas de 70kDa y 86 kDa. Se une preferentemente a dsDNA y tiene un papel en la reparación del DNA. Acs Anti Ku producen tanto patrón nuclear y nucleolar en IFI. Ha sido detectado en sd. de superposición, esclerodermia, LES. Anti-PCNA Antígeno nuclear de proliferación celular es una proteína de 36 kDa conocida por ser una proteína auxiliar de la DNA polimerasa delta. Es observado en 5% de pacientes con LES. Sólo produce IFI nuclear positivo en células en división. Anti-RNA En el núcleo el DNA es transcrito a RNA por la RNA polimerasa (pols) Pol I sintetiza rRNA. Pol II sintetiza mRNA. Pol III RNA citoplasmático y nuclear. Acs que reaccionan contra RNA de simple y doble cadena se han reportado en hasta 60% en LES. También en otras enf. autoinmunes en menor frecuencia. AntiSm, antiRNP, antiU1 RNA La proteínas Sm y RNP están compuestas por RNA rico en uridina para formar RNPs nucleares pequeños (snRMPs). Proteína Sm está presente en todos los snRNP. Las proteínas RNP están presentes sólo en el U1 snRNP. Reactividad de anti-Sm es del 3-30% en LES. Puede estar presente antes de las manifestaciones clínicas. Anti Ro(SS-A) y anti-La (SS-B) La es una fosfoproteína nuclear que une al precursor tRNA y 5S rRNA. Las proteínas Ro más características son la Ro 60 y la Ro 52. Acs para Ro 60 está presente en 25-40% LES, mientras que para La es 10-15%. Presentes en LES subcutáne0, neonatal, mejora en nefritis. Anti Ribosoma P Acs anticitoplasmático. Altamente específicos para LES. Prevalencia del 10-40% en LES. Se encuentra presente durante fase activa, en nefritis, y en hepatitis lúpica. Más frecuente en la presentación juvenil del LES que en la del adulto. Asociación controversial con lupus neuropsiquiátrico. Mecanismo de daño tisular Autoanticuerpos en LES Anticuerpos Antinucleares Los ANA son usados como medio para determinar si un individuo con problemas articulares tiene una enfermedad reumática autoinmune. Una ANA positivo un indicador serológico de enfermedad autoinmune, aunque otras pruebas de la mano de la clínica establecen el dx. Inicialmente identificados por IFI, actualmente se han descrito más de 100 Ag-Ac identificados usando técnicas más sofisticadas. Anticuerpos Antinucleares Anticuerpos Antinucleares El diluciones altas (1:320), en un escenario clínico apropiado, la interpretación del ANA es sencilla. Los resultados de ANA difieren según el sustrato. Actualmente, la técnica más ampliamente descrita es la IFM en células HEp-2. El 3.3% de individuos “sanos” son ANA positivos a títulos de 1:320 dils. El 31.7% lo es a una dilución de 1:40. El 10-37% de mayores de 70 años: ANA +. Anticuerpos Antinucleares Anticuerpos Antinucleares Puede existir ANA+ antes del dx de LES. En un estudio de más de 5 millones de inviduos: ANA + en 101 de 130 pacientes con LES hasta 9.2 años antes del diagnóstico. Se encontró una acumulación progresiva de autoanticuerpos antes de la presentación de LES. ANA, anti-DNA, antifosfolípido, anti-Ro, anti-La presentes antes de anti-Sm y anti-RNP. Anticuerpos Antinucleares Existen ciertas asociaciones de patrones de ANA y ciertas manifestaciones clínicas: Anti-RNP con fenómenos de Raynaud. Anti-Ro, anti-La con síntomas sicca. Anti ribosomal P con anemia hemolítica. En LES inducido por drogas existe un ANA+ causado por Acs hacia histonas. Anti histonas es encontrado hasta en 80% de pacientes con LES idiopático, no se relaciona con alguna manifestación clínica característica. Anticuerpos Antinucleare s Lupus ANA negativo? ANA negativo en pacientes lúpicos es actualmente un hallazgo muy raro: 2%. Autoanticuerpos contra Ro y La encontrados en 90% de ANA(-) por ELISA. Existe una distribución variable de Ags Ro y La en las diferentes especies. ANA(-) tras remisión en 10 a 20% de pacientes, en especial aquellos con compromiso renal. Anticuerpos Antinucleares Los dos patrones de ANA más frecuentemente vistos son: Nucleoplásmico homogéneo. Nucleoplásmico moteado Cualquiera de estos puede ser encontrado en individuos sanos, sobre todo en adultos mayores. Los patrones de ANA en pacientes con enfermedades autoinmunes varían de paciente a paciente y sobre el tiempo en un individuo. Patrón nucleoplásmico homogéneo Se da debido a la presencia de ANA dirigido hacia los constituyentes de la cromatina: dsDNA Histonas Nucleosomas En algunos casos un patrón nucleolar homogéneo acompaña al patrón nucleoplásmico. Anticuerpos para dsDNA y constituyentes del nucleosoma muestran reactividad en Patrón homogéneo Patrón nucleoplásmico moteado El patrón moteado grueso está dado por la presencia de anti-U1 RNP/Sm. El patrón moteado grande abarcan sólo los gránulos de intercromatina, usualmente resultan negativos en estudios anti-ENA. Epitopes en las moléculas de hnRNP que son blanco de éstos anticuerpos están localizados en dominios unidos a RNA y son inaccesibles en células intactas. Patrón moteado grande Patrón moteado grueso Patrón nucleoplásmico moteado El patrón moteado fino se puede detectar sólo en 10-15% de suero dirigido a SSA(Ro)/SSB(La). Proteína SSA(Ro)-60 ha sido sobreexpresada de forma recombinante en algunas células HEp-2. Este sustrato parece ser superior para detectar anti-SSA(Ro)-60 en pacientes que tienen este antcuerpo: LES y SS. Patrón moteado fino Patrón centromérico En SS la mayoría de pacientes tiene Acs a centrómeros (kinetocoros): CREST. Anticuerpos anticentrómero se dirigen hacia las proteínas centroméricas externas: CENP-A 18 kDa CENP-B 80 kDa CENP-C 140k Patrón centromérico Patrón nucleolar Cuando se categorizan los anticuerpos antinucleolares por sus patrones en IFI tenemos: Un patrón nucleolar homogéneo: anti-Th/To y anti-B23 (nucleophosmin). Un patrón nucleolar en racimos que también vincula cuerpos en espiral (cuerpos de Cajal). Es característico de anticuerpos contra U3RNP, fibrilarina. Un patrón nucleolar fino punteado que puede representar anticuerpos para RNA polimerasa I, NOR-90 o ASE-1. Patrón nucleolar homogéneo Patrón nucleolar en racimos Patrón nucleolar punteado Patrón nucleolar Anticuerpos anti-topoisomerasa I (Scl-70) muestra un patrón moteado nucleolar y un patrón granular fino nucleoplásmico. Anticuerpos anti PM/Scl muestran un patrón homogéneo nucleolar y un patrón moteado fino nucleosómico. Anti Ku muestra un patrón moteado fino nucleoplásmico y nucleolar. Patrón nucleolar Patrón citoplasmático Patrón citoplasmático difuso, a veces acompañado por un patrón homogéneo débil, indicativo de anti Ribosoma P. Patrón moteado o difuso con apariencia de cielo estrellado visto en anti-Jo-1. Un patrón granular similar a mitocondria, visto con anti M2 dirigidas a piruvato deshidrogenasa visto en cirrosis biliar primaria. Patrón citoplasmático difuso Patrón citoplasmático moteado fino Patrón citoplasmático mitocondrial Conclusiones Algunos anticuerpos tienen una alta especifidad para LES, particularmente: Anti Sm Anti dsDNA Anti ribosoma P Anti PCNA Algunos anticuerpos están asociados a algunas manifestaciones clínicas características. Algunos anticuerpos pueden causar daño tisular de forma directa o indirecta, Conclusiones Pueden proveer de pistas importantes para determinar la etiología en LES. Pueden ser inducidos por componentes antigénicos liberados por células apoptóticas o exosomas liberados por células vivas. Autoanticuerpos son herramientas útiles para explorar la función de los antígenos celulares. Anticardiolipin antibodies cross-react with negatively charged phospolipids such as phosphatidylserine (PS) that are exposed on the outside of the cell membrane on dying cells; anti-DNA and antihistone are targeted to nucleosomes that are released from the nucleus of apoptotic cells; anti-Sm/RNP and anti-Ro/La translocate from the nucleus into apoptotic blebs. Living cells (e.g. dendritic cells, B cells, salivary gland epithelial cells) secrete small antigenpresenting vesicles GRACIAS