Ivonne Bernier PCEO IBLAB • Industria de cosméticos y de tocador. Métodos de ensayo microbiológicos para productos cosméticos . NTC 4833 • ISO 21148, Cosmetics – Microbiology – General instructions for microbiological examination. • ISO 21149, Cosmetics – Microbiology – Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria. • ISO 16212, Cosmetics – Microbiology – Enumeration of yeast and mould • ISO 18415, Cosmetics – Microbiology – Detection of specified and non-specified microorganisms. • ISO 22716, Cosmetics – Good Manufacturing Practices (GMP) – Guidelines on Good Manufacturing Practices. • ISO 29621, Cosmetics – Microbiology – Guidelines for risk assessment of microbiologically low risk products1) • ISO 24444 – Test de protección solar in vivo • ISO 22717 – P. aeruginosa • ISO 22718 – S. aureus • Bacterias mesófilas, mohos y levaduras (crecimiento en un rango de temperatura entre 15 y 40ºC),capaces de crecer en aerobiosis. Cosméticos en general < 1000 UFC/g ó mL Cosméticos para bebé y área de los ojos (1) < 100 UFC/g ó mL • (1) niños menores de 3 años, y aquellos a ser usados en el área de los ojos • Formas cosméticas líquidas solubles en agua • Formas cosméticas sólidas y polvos • Formas cosméticas líquidas semisólidas, sólidas de base oleosa no miscibles en agua • Caldo de dilución • Agua peptonada tamponada • Agar TSA – Bacterias Mesófilas • Agar Sabouraud al 4% _ Mohos • Agar Extracto de levaduras – Levaduras • Agar Manitol sal rojo de fenol _ S. aureus • Agar Baird Parker – S. aureus • Agar Vogel Johnsosn – S. aureus • Agar TBX – E. coli • Agar Macconkey • Agar EMB • Agar VRBA • Agar Cetrimide – Pseudomonas sp y P. aeruginosa • Caldo TSB • Medio de SIM • Caldo Lethen modificado Peso de muestra Diluyente Medio de cultivo Microorganismo 10 g o 10 mL 90 mL Caldo Casoy Agar Cetrimide + suplementos P. aeruginosa 10 g 0 10 mL 90 ml Caldo Casoy Caldo Lauril sulfato + MUG Agar MacConkey Agar EMB E. coli 10 g o 10 mL 90 mL Caldo Casoy Agar sabourud al 4% glucosa Mohos Coliformes Microorganismo Presencia/ Ausencia Recuento Bacterias Mesófilas No. Colonias* FD S. aureus P/A P. aeruginosa P/ A Mohos y Levaduras No. Colonias* FD Coliformes No. Colonias*FD Clostridium SR No. Colonias * FD en tubo (esporas) Placa • La norma nombra el TBX pero no lo utiliza en los recuento de E. coli • No se nombra el caldo lauril sulfato con MUG • No se nombra los medios para Clostridium sulfito reductor • Términos y definiciones • Manejo de las muestras • Instalaciones • Equipos • Personal • Preparación y manejo de muestras • Muestreo de los cosméticos – Diluyentes – Neutralizantes – Medios de cultivo • Técnicas de recuento en placa • Técnicas por FM • Preparación y calibración de los inóculos Microorganismo Medio de cultivo Técnica Neutralizante Mohos y Levaduras Agar Sabouraud SDCA R placa FM Caldo caseina+lecitina polisorbato 20 Agar Patata dextrosa Agar GP glucosa peptona Agar Extracto de malta Recuento en placa • Peso de muestra 1g o 1mL • Diluyente 9mL • Dilución de muestra 10 -1 • Siembras en profundidad : 1mL • Siembra en superficie : 0,1mL • Recuento por FM • Membrana de ≤ 0,45µm • Peso muestra 1g o 1mL • Filtrar y lavar membrana • Validación de la técnica por recuento en placa • Validación de la técnica por FM • Validación del inóculo • Validación del neutralizante • Principio – Enriquecimiento usando un caldo no selectivo – Aislamiento e identificación Hacer neutralización para inhibición microbial Medio de cultivo Peso de Muestra Microorganismo Agar caseína (SCDA) 1g ó 1mL/ 9 mL diluyente P. aeuriginosa Agar caseína (SCDA) 1g ó 1mL/ 9 mL diluyente E. coli Agar Caseína (SCDA) 1g ó 1mL/ 9 mL diluyente S. aureus • Siembra en placa a 32,5±2,5°C por 72±6 h • Siembra por FM • Detección de bacterias por enriquecimiento – Incubación en caldo no selectivo – Aislamiento a un agar selectivo • Medios de enriquecimiento – Caldo Eugon LT 100 – Medio de siembra: • Agar (SCDA) • Agar TSA • Enriquecimiento en medios no selectivos • Siembra en medios selectivos • Inoculación a 32,5±2,5°C por 20-72 h • Siembra : Agar Cetrimide 32,5±2,5°C por 48 h • Identificación bioquímica – Pruebas convencionales – Pruebas miniaturizadas • Enriquecimiento en medios no selectivos • Siembra en medios selectivos • Inoculación a 32,5±2,5°C por 20-72 h • Siembra: Agar Baird Parker 32,5±2,5°C por 24h • Identificación bioquímica – Pruebas convencionales – Pruebas miniaturizadas • Parte del concepto de crecimiento en Agar Plate Count para realizar las siembras para patógenos • No incluye enriquecimiento para microorganismos patógenos • Hay que trabajar cada grupo de microorganismos independientemente • Incluye enriquecimiento para microorganismos patógenos • Medios de cultivo convencionales • Realiza PB convencionales • Diluyentes • Neutralizantes • Medios de cultivo de difícil consecución • Incluye PB miniaturizadas • Valida diluyente • Valida neutralizante PBX: (57 1) 416 63 01 Web Page: www.iblaboratorio.com Mail: [email protected]