Análisis de Anfetaminas.pdf

NACIONES UNIDAS OFICINA CONTRA LA DROGA Y EL DELITOMÉTODOS RECOMENDADOS PARA LA IDENTIFICACIÓN Y EL ANÁLISIS DE ANFETAMINA, METANFETAMINA Y SUS ANÁLOGOS CON ANILLO SUSTITUIDO EN MATERIALES DECOMISADOS (Revisados y actualizados) MANUAL PARA USO DE LABORATORIOS NACIONALES DE ENSAYO DE ESTUPEFACIENTES V.05-86469 Sección de Laboratorio y Asuntos Científicos OFICINA DE LAS NACIONES UNIDAS CONTRA LA DROGA Y EL DELITO Viena MÉTODOS RECOMENDADOS PARA LA IDENTIFICACIÓN Y EL ANÁLISIS DE ANFETAMINA, METANFETAMINA Y SUS ANÁLOGOS CON ANILLO SUSTITUIDO EN MATERIALES DECOMISADOS (Revisados y actualizados) MANUAL PARA USO DE LABORATORIOS NACIONALES DE ENSAYO DE ESTUPEFACIENTES NACIONES UNIDAS Nueva York, 2005 ST/NAR/34 . La presente publicación no ha pasado por los servicios de edición.La mención de nombres de empresas y productos comerciales no implica opinión alguna de parte de las Naciones Unidas. Birmingham Laboratory. Chiba. Special Testing and Research Laboratory. Yukiko Makino. Polonia Sr. Tohru Kishi. Virginia (Estados Unidos de América) Dr. Nonthaburi (Tailandia) Dr. Kanto-Shin’etsu Oficina de Salud y Bienestar. Anneke Poortman. Kanto-Shin’etsu Oficina Regional de Fiscalización de Estupefacientes. Drug Enforcement Administration. Ministerio de Salud. Bundeskriminalamt / KT34. Warank Boonchuay. Ministerio de Justicia. Palma de Mallorca (España) Dr. Tim McKibben. Birmingham (Reino Unido) Dr. The Forensic Science Service. Special Testing and Research Laboratory. Laboratorio de Ciencias Forenses. Wiesbaden (Alemania) Sr. Rijswijk (Países Bajos) Sra. Trabajo y Bienestar. Rosa Alis Rodríguez. Hans Bergkvist. Ministerio de Salud Pública. Laboratorio de Drogas y Sanidad de Baleares. Ministerio de Salud. Laboratorio Forense Central de Policía. McLean. Linköping (Suecia) Sra. Ken Tanaka. Drug Enforcement Administration. Ira Lurie.AGRADECIMIENTOS La Sección de Laboratorio y Asuntos Científicos de la ONUDD desea expresar su agradecimiento a los expertos que participaron en la Reunión de Consulta sobre “El examen de los métodos para la identificación y el análisis de estimulantes de tipo anfetamínico y sus análogos con anillo sustituido en material decomisado” por su contribución al contenido del presente manual. McLean. Instituto Nacional de Investigación de Ciencia Policial. Jana Skopec por la revisión. Varsovia. Trabajo y Bienestar. Rainer Dahlenburg. también con contribuciones adicionales de los participantes en la reunión1. Australian Government Analytical Laboratories. NSW (Australia) Sr. Departamento de Ciencias Médicas. Kemmenoe. Tokio (Japón) La Sección de Laboratorio y Asuntos Científicos de la ONUDD desea también expresar su agradecimiento a la Sra. Adrian V. actualización y finalización del manuscrito. Departamento de Fiscalización de Estupefacientes. de la Agencia Nacional de Policía del Japón. Tokio (Japón) Sr. SKL — Laboratorio Nacional de Ciencias Forenses. Jana Skopec. División de Análisis de Estupefacientes. Pymble. iii . Waldemar Krawczyk. Sra. Ministerio del Interior y Administración. Takahiro Terasaki. Virginia (USA) Sra. 1 También se agradece mucho la revisión del proyecto del manual que hizo el Dr. Japón Dr. . ................. VI.................... Método B: método estándar múltiple con derivatización .... Método A: método estándar único ........................... A........................ i...................... III.................. Ensayos de microcristales ............................ B..... ii................ 2..................... Cromatografía en fase gaseosa — espectrometría de masas (CG-EM) ........................................................................... G........ iii...................................................... A.............................. 1...... Características físicas .................................................................................................................................... A..... DESCRIPCIÓN DE LOS COMPUESTOS PUROS ............................................. 1 2 3 4 4 5 6 7 8 10 13 13 13 17 19 19 25 26 27 27 29 31 31 33 35 37 38 38 40 40 42 42 43 45 45 46 46 FABRICACIÓN ILÍCITA DE ETA ... 1........... iv....... Técnicas de EC....................... Cromatografía en fase gaseosa (CG) — detector de ionización por llama (FID) 1............................................................ ANÁLISIS CUALITATIVO Y CUANTITATIVO DE ETA ............................. Ensayos de microcristales ..................................... Electroforesis capilar (EC) ........................................................................................................................................ Método B: método estándar múltiple sin derivatización ...... Ensayos presuntivos ............................ F................ OTRAS TÉCNICAS ANALÍTICAS PARA EL ANÁLISIS DE ETA................................................ B................................................................................ Punto de fusión .............................................................. Técnicas instrumentales ..................... B................. D.................. 3..................................... Síntesis de la metanfetamina...................................... A........................................... Análisis cualitativo ...................................................................................................................................... Técnicas de CLGR......................................................................................................................... Técnicas de CG ............ Análisis cuantitativo ..... Síntesis de la anfetamina............................. Espectrometría infrarroja transformada de Fourier (FTIR) ............................................................................................................................... B.. 2............. C........................................................ Técnicas de resonancia magnética nuclear H (RMN) .................................... ii..................... EMPLEO DEL MANUAL ........................................... E..... iii......... C........................ Ensayo de aniones ........ II.............................................................................................. i....................... Síntesis de ETA con anillo sustituido ......................................... Estereoquímica ....... V........... Cromatografía en fase sólida — microextracción en fase sólida (CG-SPME) 1 v .................... Técnicas IR ..................................................................................................................................................... IV..................... 3............................. Cromatografía líquida de gran rendimiento (CLGR) ........... INTRODUCCIÓN ....................... CLASIFICACIÓN / DEFINICIONES. Ensayos cromáticos........................................................................Índice I........... Cromatografía de capa delgada (CCD) ....... Análisis de isómeros ópticos.................. 2.. VII..................... C................. ................................................................ 47 47 47 49 Cromatografía en fase gaseosa — espectroscopía infrarroja transformada de Fourier (CG-FTIR) .................................. Análisis (de trazas) de muestras acuosas................................................................................................................... ANEXOS.............. vi .......................................... 2.........................................1........... D........... Método de análisis de cabeza ............. MDEA. El presente manual se limita a los métodos analíticos para los ETA. El presente manual forma parte de una serie de publicaciones similares que tratan de la identificación y el análisis de diversos grupos de drogas sometidas a fiscalización internacional. 1 . la Sección de Laboratorio y Asuntos Científicos de la ONUDD comenzó a principios de los años 80 a ejecutar un programa de armonización y establecimiento de métodos de ensayo recomendados para laboratorios nacionales de ensayo de drogas. Por primera vez en esta serie de publicaciones. etc. La mayoría de los métodos que se describen han sido publicados en la bibliografía científica. 1987) y “Métodos recomendados para el ensayo de los derivados anfetamínicos ilícitos con anillo sustituido” (ST/NAR/12. El presente manual refleja las conclusiones de esa reunión. MDA.). INTRODUCCIÓN En el plano internacional la atención se centra cada vez más en una cuestión de importancia creciente: los estimulantes de tipo anfetamínico (ETA). Ofrece asistencia práctica a las autoridades nacionales describiendo métodos recomendados para su empleo en laboratorios de ensayo de drogas con miras a identificar y analizar estimulantes de tipo anfetamínico (ETA) y sus análogos con anillo sustituido. o combinaciones. Combina y reemplaza manuales publicados anteriormente sobre “Métodos recomendados para el ensayo de anfetamina y metanfetamina” (ST/NAR/9. y deben utilizar métodos más precisos y científicos de identificación y análisis a fin de hacer frente al mayor número de análisis necesarios y a los requerimientos de las leyes nacionales más estrictas contra las drogas. en la actualidad ningún país está a salvo de una de las múltiples facetas de la fabricación. El presente manual y los anteriores proponen enfoques que pueden ayudar a los analistas de drogas a seleccionar métodos apropiados a la muestra que se examina. los analistas deben estar en condiciones de analizar una amplia gama de sustancias y preparados. regional e internacional. el tráfico o el uso indebido de ETA. En particular durante los últimos 10 a 15 años. la Sección de Laboratorio y Asuntos Científicos de la ONUDD.I. y han sido utilizados durante un cierto número de años por laboratorios de reputación conocida. que con frecuencia abarca ETA nuevos y desconocidos. y sus características y empleos prácticos para el análisis de drogas. el presente manual tiene también anexos con métodos validados seleccionados. en cooperación con el Servicio de Ciencias Forenses del Reino Unido. y las tendencias del tráfico plantean un desafío tanto a las autoridades nacionales encargadas de hacer cumplir la ley como al personal científico de los laboratorios forenses. la Reunión Consultiva tuvo presente que había varios otros métodos publicados en la literatura de las ciencias forenses que también producían resultados aceptables. Un manual separado sobre técnicas analíticas más generales. Aunque hay diferencias regionales. el uso indebido de ETA relacionado con las anfetaminas (anfetamina y metanfetamina) y sustancias del grupo “éxtasis” (MDMA. Al identificar esos métodos. que fueron revisadas y actualizadas nuevamente en 2004/2005. Además. Esta nueva situación. En septiembre de 1998. 1988). organizó una reunión consultiva con la participación de 13 expertos para examinar métodos para la identificación y el análisis de estimulantes de tipo anfetamínico (ETA) y sus análogos con anillo sustituido en material decomisado. Por estas razones. Hoy en día. complementa esta serie de manuales sobre métodos recomendados. con la posibilidad también de adaptarlos al nivel de adelanto de los diferentes laboratorios. el carácter internacional del tráfico de drogas requiere el intercambio oportuno de datos analíticos entre laboratorios y los servicios de represión en los planos nacional. ha pasado a ser un problema mundial. Cuando sea posible. Los comentarios y las sugerencias se pueden dirigir a: Sección de Laboratorio y Asuntos Científicos Oficina de las Naciones Unidas Contra la Droga y el Delito Centro Internacional de Viena P. el analista debe necesariamente estar al corriente de las tendencias del momento en el análisis de drogas. La selección de esos parámetros en cualquier caso particular deberá tener en cuenta la droga de que se trate y los recursos de laboratorio de que dispone el analista. la determinación de por lo menos dos parámetros no relacionados entre sí. O. las “Buenas Prácticas de Laboratorio” exigen que un enfoque analítico para determinar la identidad de una sustancia sometida a fiscalización en material sospechoso comprenda. como CG-EM. como mínimo. 2 . así como las directrices y otras publicaciones científicas y técnicas se pueden solicitar a la dirección mencionada más arriba. artículos seleccionados de la literatura científica. siempre que se utilice la información de ambas técnicas (por ejemplo. Las técnicas compuestas. La elección del método y el enfoque de su análisis quedan a la discreción de los analistas y dependen del tipo de droga de que se trate. La ONUDD ayuda a los laboratorios a este respecto proporcionando. ajustándose coherentemente a la literatura sobre ciencias forenses y análisis de actualidad. metanfetamina u otros ETA. la disponibilidad de los instrumentos y los materiales de referencia apropiados. Se hace hincapié también en la importancia fundamental de que los analistas de drogas dispongan de libros de referencia sobre drogas de uso indebido y técnicas analíticas. si bien se reconoce que los requisitos exclusivos de diferentes jurisdicciones pueden determinar las prácticas que aplican los diferentes laboratorios. se deben utilizar tres técnicas analíticas totalmente diferentes: ensayos cromáticos. así como del nivel de prueba jurídicamente aceptable en la jurisdicción en que trabajan los analistas.org Todos los manuales.II. cuentan como dos parámetros. EMPLEO DEL MANUAL No todos los métodos descritos en el presente manual deben aplicarse a todas las muestras sospechosas de ser o contener anfetamina. CCD. Por consiguiente. IR o UV). el tiempo de retención y las características del espectro de masa). Box 500 A-1400 Viena (Austria) Fax: +43-1-26060-5967 Correo-e: lab@unodc. previa solicitud. Además. cromatografía (por ejemplo. La Sección de Laboratorio y Asuntos Científicos de la ONUDD agradecerá todas las observaciones que se le hagan llegar sobre el contenido y la utilidad del presente manual. CG o CLGR) y espectroscopía (por ejemplo. tabletas o cápsulas). En particular. en su mayoría de origen sintético. En la mayoría de los casos. pulsaciones aceleradas. Ninguna sustitución en el anillo aromático (por ejemplo. fenetilina). incluido un estado de mayor alerta y euforia. MDA. Por razones de orden práctico. en diverso grado. alucinaciones. algunos de los cuales son estimulantes más potentes que otros. la metodología presentada se podrá aplicar también a esos análogos. hipertensión. Los NH2 ETA pueden producir uno o más síntomas relacionados con la dosis. junto con los nombres comunes y de la nomenclatura de la Unión Internacional de Química Pura y Aplicada (Nomenclatura IUPAC) figuran en el anexo I. anfetamina. CLASIFICACIÓN / DEFINICIONES Los estimulantes de tipo anfetamínico (ETA) son un grupo de sustancias. MBDB). La abstinencia después de haber tomado dosis altas de ETA puede provocar depresión grave. gráfico 1). iii. pérdida de memoria. ii. episodios sicóticos. Los ETA por lo general estimulan el sistema nervioso central. que corresponden en gran parte a las siguientes pautas de sustitución en el anillo aromático: i. como prototipos de estimulantes del sistema nervioso central con un potencial de toxicidad sicótica cuando se usan en dosis excesivas o por largos períodos. el presente manual contiene datos específicos sólo para una selección de los ETA más comunes. MDMA. respiración y temperatura corporal. esnifar o fumar. estructuralmente derivadas de la β-fenetilamina (β-PEA. los ETA se pueden dividir en tres grandes subgrupos. Los ETA se producen ilícitamente en una variedad de preparados (polvo. R9 R8 R3 R4 R1 N R2 R7 R6 R5 Gráfico 2 En cuanto a las características estructurales. mayor presión arterial. ingerir oralmente. El uso indebido crónico puede producir agitación. Los analistas deben tener presente que se pueden encontrar otros análogos estrechamente relacionados. STP/DOM). la sustitución en el anillo aromático aporta la mayor contribución a diferencias cualitativas sustanciales en los efectos farmacológicos.III. por lo general incluyendo uno o más de los grupos alkiloxi (por ejemplo. temblores. Grupo metilendioxi: sustitución en el anillo aromático (por ejemplo. 2C-B. 3 . 2 No se muestran todos los otros sustituyentes para saturar las valencias. metanfetamina. ya que por lo general se utiliza hidrógeno (H). Aunque hay varias posibilidades para la modificación de la cadena lateral. Por lo tanto son considerados. Otras pautas de sustitución. y se pueden inyectar. ilusiones Gráfico 1 paranoicas y comportamientos violentos. incluye ETA sometidos a fiscalización internacional y ETA seleccionados sometidos a fiscalización nacional. La modificación química en los puntos R1 a R9 (gráfico 2)2 produce un número prácticamente ilimitado de compuestos farmacológicamente activos. Las estructuras químicas de los ETA seleccionados. Además de los ETA activos. pero éstos contienen concentraciones elevadas de sustancias activas. La forma de sal más común es el clorhidrato.IV. la mayoría de los ETA se encuentran en un compuesto estereoquímico típico. fosfatos o sales de bromuro. según la región geográfica. las tabletas suelen contener diferentes adulterantes. (R) y (S) describen la configuración estérica absoluta de sustituyentes en centros quirales individuales. se encuentran normalmente como racematos. los cristales (comúnmente conocidos como “Cristal”. El contenido de droga suele oscilar entre 40 y 140 mg. Las sales son sustancias cristalinas o en polvo. un líquido aceitoso de color pardo). (l) o (–) y (d. colores de alimentos comunes y/o diferentes excipientes y agentes aglutinantes. Metanfetamina La metanfetamina fabricada en forma ilícita está disponible en diferentes formas. y se prefieren sobre todo en el caso de los diastereómeros. que varían en coloración desde el blanco (similar a los productos de calidad farmacéutica) hasta el rosado. por lo tanto. ETA con anillo sustituido con un grupo metilendioxi MDMA. Las tabletas suelen tener colores brillantes y con frecuencia varían en tamaño. y rara vez como tableta. MDA y MDEA se encuentran comúnmente como tabletas que pueden estar marcadas con un emblema.o dextro (también 3 Los términos (d) o (+). 4 . Los ETA también se pueden encontrar en forma de tabletas. No obstante. En los laboratorios clandestinos se suele decomisar anfetamina base. sulfatos. normalmente como líquido aceitoso pardo con un olor desagradable característico de 1-fenil-2-propanona (P-2P) y/o residuos de disolvente. debido a la presencia de residuos de disolventes y/o precursores. “Ice” o “Shabu”) y las tabletas (comúnmente conocidas como “Yaba”). l) o (±) se utilizan normalmente para designar la rotación óptica de sustancias quirales. Se sabe de diferencias regionales en el contenido de droga y cambios que se producen con el tiempo. no es difícil que en las investigaciones de laboratorios clandestinos se encuentren esos compuestos también en forma de bases (por lo general. el contenido medio de MDMA en las tabletas de éxtasis ha bajado a unos 60-70 mg (en comparación con unos 100 mg a mediados de los años 90). En los mercados ilícitos. por ejemplo. Con frecuencia se encuentran húmedos y despiden un olor desagradable característico. Rara vez se encuentran en forma de polvos. Anfetamina La anfetamina ilícita se suele encontrar en forma de polvo como sal sulfatada. La forma de sal de ETA de tipo metilendioxi que se encuentra con más frecuencia es el clorhidrato. La anfetamina. el amarillo o el pardo. mientras que la metanfetamina se suele encontrar como enantiómero S. En Europa. en particular como clorhidratos. pero también se han visto sales de bromuro y fosfatos. A. DESCRIPCIÓN DE LOS COMPUESTOS PUROS Los ETA se decomisan normalmente en forma de sales. y la mayoría de los ETA con anillo sustituido. pueden encontrarse como mezcla racémica o como enantiómeros individuales3. Estas formas incluyen el polvo. ESTEREOQUÍMICA La mayoría de los ETA tienen por lo menos un centro quiral y. agentes reductores. por ejemplo. que esos datos se refieren a sustancias puras4.1. “Métodos recomendados para el ensayo de anfetamina y metanfetamina” (ST/NAR/9) y “Métodos recomendados para el ensayo de los derivados anfetamínicos ilícitos con anillo sustituido” (ST/NAR/12). como la metanfetamina cristalina (“Ice”). se describe el análisis de isómeros ópticos. En el capítulo VI. B. Datos espectroscópicos Los datos del análisis de espectro de masa (EM). infrarrojo (IR) y de resonancia magnética nuclear (RMN) de los ETA más comunes aparecen en ediciones anteriores de los dos manuales de las Naciones Unidas relacionados con el análisis de ETA. sólo como ensayo presuntivo (respecto del uso de los puntos de fusión para la diferenciación de isómeros. por lo tanto. Con excepción de los ETA de alta pureza. 5 . sobre FTIR). 4 Los analistas también deben tener presente que los puntos de fusión de algunos ETA pueden variar en función del disolvente que se utilice para la cristalización.. Solubilidades Las solubilidades de ETA seleccionados y sus sales se proporcionan en la sección sobre ensayo de aniones (página 17. Los datos también se pueden encontrar en la página web de la Sección de Laboratorio y Asuntos Científicos. infra). Los analistas deben tener presente. además del racemato. infra).F.conocido como “Ice” o “Shabu”).G. los puntos de fusión se deben utilizar. es decir.G. infra. La recristalización selectiva basada en las diferencias de solubilidad se puede utilizar para la separación de algunas sales de ETA (véase el capítulo VI. CARACTERÍSTICAS FÍSICAS Puntos de fusión y de ebullición Se conocen los puntos de fusión y/o ebullición de los ETA que se encuentran con más frecuencia. véase el capítulo VI. sin embargo. las condiciones de la reacción y los procesos de purificación. Birch o “Emde”. En consecuencia. 17 (SCITEC/17). 2000. y variaciones en la calidad y la potencia. Si bien los estudios de perfil de impurezas no son el tema del presente manual. la disponibilidad de precursores determina en gran medida la elección del método de síntesis utilizado en las operaciones ilícitas. de esa forma. para métodos y enfoques más específicos para la elaboración de perfiles de impurezas de la metanfetamina. puede constituir un instrumento útil para la comparación y caracterización de muestras de ETA. A continuación se presentan descripciones breves de los métodos de síntesis más comúnmente utilizados para la anfetamina. En general. El análisis de disolventes puede aumentar el cuerpo de información y. Los métodos de síntesis se clasifican sobre la base de los tipos de reducción utilizados en la reacción y del mecanismo de reducción. Los tipos y las cantidades de impurezas que se encuentran en muestras de ETA ilícitos (el “perfil de impurezas”) dependen en gran parte de los métodos de síntesis. algunos de los métodos descritos se pueden adaptar para ese propósito5. denominados estudios de perfil de impurezas. muchas de esas reacciones se conocen por nombres populares como método “Leuckart”. especialmente en casos en que se han realizado análisis más a fondo de impurezas y subproductos de la fabricación.V. 6 Para más detalles. o métodos del ácido hidriódico/fósforo rojo. o en los reactivos característicos o los intermedios importantes. véase también ONUDD. 2. la metanfetamina y la MDMA6. FABRICACIÓN ILÍCITA DE ETA El conocimiento del método utilizado en la fabricación ilícita de drogas de uso indebido puede cumplir una función importante en la interpretación de los resultados de análisis. durante el proceso de reacción. nitrostireno. Esos nombres populares se basan en el químico que descubrió el método. Siempre que es posible se incluyen los nombres populares. publicación científica y técnica No. se remite al lector al manual de las Naciones Unidas “Caracterización de drogas y elaboración de perfiles de impurezas” (ST/NAR/32/Rev. 1998). Esto se logra frecuentemente sustituyendo la fuente amina o la fuente del anillo aromático. los “químicos” clandestinos sin experiencia. 6 . respectivamente. El uso de métodos de síntesis obtenidos o publicados ilícitamente (“literatura subterránea” o Internet).1. La presencia o ausencia de impurezas específicas (marcadores) puede ser útil para determinar el método de síntesis empleado y las materias primas (precursores) utilizadas. las drogas fabricadas ilícitamente suelen contener subproductos e intermedios derivados de materias primas con impurezas. reacciones incompletas y purificación inadecuada de los intermedios y el producto sintético final. En la práctica. la fuente y la pureza de las materias primas. oxima. el equipo de laboratorio inapropiado y la falta de control de calidad en los laboratorios suelen dar por resultado productos impuros y de calidad inferior. se remite al lector al manual de las Naciones Unidas “Clandestine manufacture of substances under internacional control” (ST/NAR/10/Rev. 5 Para una introducción general a este tema. En la literatura se encuentran descripciones de varios métodos de síntesis de ETA que utilizan los fabricantes ilícitos o clandestinos. las proporciones. Los métodos de síntesis de uso más común para la fabricación ilícita de anfetamina se pueden modificar también para producir metanfetamina o anfetaminas con anillo sustituido. si los hubiere. 2001). la reacción “Leuckart” sigue siendo uno de los métodos de síntesis más populares para la fabricación ilícita de anfetaminas. Otros métodos sintéticos no dan tantas impurezas específicas como el método Leuckart. bencil metil ketona. Gráfico 3. Reacción Leuckart (reducción no metálica) En razón de su sencillez. La síntesis Leuckart es una reducción no metálica que normalmente se realiza en tres etapas. En la etapa final. se calienta una mezcla de P-2-P y formamida (algunas veces en presencia de ácido fórmico). En la literatura se identifican y describen varias impurezas específicas del método. El mecanismo de reacción pasa por la formación de una imina o producto intermedio de iminio por la reacción de un compuesto de carbonilo con un compuesto amino apropiado. La mezcla de la reacción se hace básica. En la segunda etapa. la Nformilanfetamina se hidroliza. Reacción Leuckart utilizada en la fabricación ilícita de anfetamina El método Leuckart es uno de los más estudiados. SÍNTESIS DE LA ANFETAMINA La reacción central de todos los métodos utilizados para la síntesis de la anfetamina se basa en la reducción catalítica del 1-fenil-2-propanona (P-2-P. Los métodos utilizados con 7 . se aísla y se destila (vapor). Las impurezas más prominentes son el intermedio Nformilanfetamina (por lo general. Los métodos de reducción más populares de la actualidad son el método Leuckart (reducción no metálica) y el método de reducción metálica catalítica (aminación reductiva. o una amina primaria o secundaria. hidrogenación catalítica o hidrogenólisis). normalmente como sal sulfatada. seguida de la reducción. Para la síntesis de la anfetamina. Aminación reductiva (reducción metálica catalítica) La aminación reductiva es un proceso de reducción química o catalítica de aldehídos y cetonas en presencia de amoníaco. BMK. el producto se precipita de la solución.A. fenilacetona). en presencia de amoníaco o metilamina. En la síntesis de la anfetamina que utiliza métodos de aminación reductiva se emplea P-2-P y un catalizador preferido. arrastrado al producto final) y 4-metil-5-fenil pirimidina. o formiato de amonio hasta que se obtiene una reacción de condensación en el producto intermedio N-formilanfetamina. normalmente utilizando ácido clorhídrico (véase el gráfico 3). que resulta en la amina relacionada de orden superior. La anfetamina base es un líquido aceitoso con un olor a “pescado y amina” característico. Las reducciones se logran normalmente a baja presión y baja temperatura. que se forman durante la reacción. Un intermedio de oxima suele ser hidrolizado por reducción metálica utilizando Pd/H2. que se supone son formadas por la condensación de P-2-P y anfetamina. respectivamente). Ahora bien. La reducción metálica por disolución utilizando aluminio. Los compuestos de tipo P-2-P e imina también pueden aparecer como impurezas. La reducción catalítica heterogénea se logra normalmente utilizando una mezcla de P-2-P y gas de amoníaco cargado con hidrógeno en presencia de un catalizador seleccionado. y cloruro de mercurio (HgCl2). El procedimiento más popular emplea amalgama de aluminio y mercurio (Al-Hg). La hidrogenación subsiguiente del doble enlace y la reducción del grupo nitro produce anfetamina. pero no son impurezas específicas del método y pueden estar presentes en cualquier procedimiento de síntesis que incluya P-2-P. en lugar de P-2-P. Reducción metálica utilizando hidruro de aluminio-litio (LiAlH4). como el método del “nitropropano” y el método de la “oxima”. El mecanismo de reducción de la amalgama se produce mediante la reducción de un aducto de base Schiff de P-2-P y la amina apropiada. Las impurezas inorgánicas resultantes del empleo de un catalizador determinado pueden servir de marcadores. B. Reducción metálica por disolución utilizando aluminio. paladio o níquel Raney. SÍNTESIS DE LA METANFETAMINA La metanfetamina también se puede sintetizar utilizando los métodos mencionados más arriba pero sustituyendo el amoníaco con metilamina. este método utiliza un recolector de aluminio o arenisca. que produce 1-fenil-2-nitropropeno. La reducción metálica por disolución. La fase de reducción se completa por lo general utilizando Pd/H2 o LiAlH4. El método de la oxima es una reacción de P-2-P con hidroxilamina. como el método “'ácido hidriódico/fósforo rojo”. Las reacciones se logran por lo general mediante una de las reacciones siguientes (véase el gráfico 4): a) b) Reducciones no metálicas. con menos frecuencia. seguidos por el níquel Raney. Las impurezas más características de las aminaciones reductivas son las bases Schiff. denominados en función de los intermedios característicos (fenil-nitropropeno y oxima.más frecuencia se pueden dividir en tres tipos diferentes basados en las especies de reducción: a) b) c) Reducción catalítica heterogénea utilizando óxido de platino. En raras ocasiones. también se han encontrado aminaciones a alta presión en un reactor a presión Parr (“presión” o “bomba de tubo”). o 8 . En condiciones de clandestinidad difíciles. los métodos de síntesis de la metanfetamina más populares emplean efedrina o seudoefedrina como precursor. como la “reducción Birch”. El paladio en carbón (Pd/C) o el óxido de platino son los catalizadores de uso más común. zinc o amalgamas de magnesio. o por reducción de hidruro metálico utilizando LiAlH4. cianoborohidruro de sodio (NaCNBH3). borohidruro de sodio (NaBH4) o. Otros métodos de aminación reductiva de uso menos frecuente son las reducciones de hidruro metálico. El método del “nitropropeno” comprende la condensación de benzaldehído con nitroetano. El intermedio de oxima es posteriormente hidrogenado para obtener anfetamina. zinc o amalgamas de magnesio es uno de los métodos de aminación reductiva de uso más común. La hierba china Ma-huang. Todos los métodos de fabricación que comienzan con la producción de I-efedrina o dseudoefedrina producen (+)-(S)-metanfetamina como único isómero óptico. El análisis quiral de los isómeros de efedrina o seudoefedrina también puede ayudar a determinar el proceso de fabricación de la metanfetamina ilícita. la efedrina y la seudoefedrina son sustancias quirales. muchos de los cuales se pueden obtener sin receta. A diferencia del P-2-P.y lseudoefedrina). (d. que se encuentra en varios suplementos alimenticios y productos de estilo de vida. Gráfico 4. como el método del “nitropropeno” o el de la “oxima”. Son diastereómeros y existen en una dos formas enantioméricas cada una. Es raro encontrar otras reacciones.y l-efedrina.c) La reducción catalítica heterogénea utilizando tionilcloruro y paladio u óxido de platino como catalizador (método Emde). además de dos racematos. es otra fuente de esos precursores. que es por lo menos 9 . Métodos comunes para la fabricación ilícita de metanfetamina La efedrina y la seudoefedrina están presentes en muchos preparados farmacéuticos contra la tos. y d. En la literatura se informa de varias impurezas específicas del método. comúnmente denominado “meth oil”. Pese a esto. contiene “meth oil” y diferentes impurezas provenientes del método Hl/fósforo rojo.4-metilendioxi-fenilacetona. aziridinas y dimetilnaftalinas.4-MDP-2P está disponible en el comercio como precursor sometido a fiscalización internacional. como el N-metil-1-(1. un gas de cloruro de hidrógeno (de un cilindro.4-metilendioxialilbenceno).dos veces más potente que la mezcla racémica producida por reacciones a partir de P-2-P. causada por un exceso de yodo. La reacción comprende mezclar efedrina o seudoefedrina con gases de amoníaco anhidro y metal de sodio o de litio. En la práctica ilícita. El método del “ácido hidriódico-fósforo rojo” se realiza normalmente calentando efedrina o seudoefedrina con fósforo rojo y ácido hidriódico. SÍNTESIS DE ETA CON ANILLO SUSTITUIDO El estimulante anfetamínico de tipo metilendioxi que se encuentra más comúnmente es MDMA. Las impurezas típicas encontradas en muestras producidas por reducciones con Hl/fósforo rojo o yodo/ácido hipofosfórico son efedrina o seudoefedrina. El proceso de la reducción Birch se realiza mediante una reducción metálica por disolución de efedrina o seudoefedrina en presencia de amoníaco. con ligeras modificaciones. piperonil metil cetona.4-ciclohexadienil))-2-propanamina. La reacción que incluye amoníaco anhidro es peligrosa y las explosiones en los laboratorios clandestinos no son raras. la efedrina o la seudoefedrina se hacen reaccionar normalmente con tionilcloruro para obtener el intermedio clorefedrina. En general. porque se descompone durante el análisis para formar aziridinas. dado que también se producen a partir de la clorefedrina por eliminación alógena y cierre de los anillos (método Emde). En el método Emde. La clorefedrina también se descompone rápidamente durante la extracción básica de metanfetamina. De este líquido se cristalizan sales de clorhidratos utilizando éter/acetona y ácido clorhídrico. 3. los métodos de síntesis utilizados para la MDMA se aplican. se hace básica y se extrae en un disolvente. se utiliza sin más purificación. o PMK). El Hl y el fósforo rojo se pueden sustituir por yodo y ácido hipofosfórico (hipofosfato sódico). El 3. En los procedimientos analíticos basados en la CG. La metanfetamina base resultante es un líquido aceitoso. o de un intermedio de oxima y N-hidroximetanfetamina.4-MDP-2-P. la reducción Birch se realiza normalmente en una reacción de un paso utilizando amoníaco. La mezcla se deja reposar hasta que se evapora el amoníaco.4-metilendioxifenil-2-propanona (también conocido como 3. la reducción Birch produce normalmente un producto final muy “limpio”. que luego es hidrogenado sobre un catalizador de platino o paladio para obtener metanfetamina. una solución acuosa o generado utilizando ácido sulfúrico y cloruro sódico) se bulle en el “meth oil” para que la sal clorhídrica precipite fuera de la solución. La mezcla de la reacción se filtra. a veces denominada “ox-blood”. Las aziridinas no se pueden considerar como impurezas específicas del método. El principal precursor utilizado para esa síntesis es 3. C. o por agua y yodo. el intermedio clorefedrina se encuentra raras veces como impureza. La separación del “meth oil” se realiza mediante extracción directa por disolvente y filtración. la mezcla de la reacción. que está disponible en grandes cantidades. El producto de la reacción se purifica luego mediante la formación de la sal de clorhidrato y la recristalización. ya sea directamente o utilizando isosafrol obtenido por isomerización del safrol. La MDMA se puede sintetizar también a partir del safrol (3. principalmente por inyección. Alternativamente. y ocasionalmente MDEA y MDA. El safrol está disponible 10 . Raras veces. La mezcla de color rojo. a otros análogos metilendioxi con anillo sustituido. y cintas de litio de baterías. 11 . es otro precursor alternativo para la síntesis de 3. En la literatura se informa de diversos procedimientos para la producción del intermedio fenil-nitropropeno. Los intermedios nitropropeno y nitroestireno son sustancias cristalinas de color amarillo o naranja brillante. normalmente n-butilamina. Sustituyendo la metilamina por etilamina se obtiene MDE.4MDP-2-P. El intermedio resultante. el gas de amoníaco produce MDA. Los intermedios formados en estas reacciones son muy característicos en cuanto a apariencia. Alternativamente. o por reducción de hidruro metálico utilizando cianoborohidruro sódico (véase el gráfico 5). El piperonal (heliotropin.4-metilendioxibenzaldehído). Gráfico 5.4-MDP-2-P y Nmetilformamida utilizando ácido fórmico. un producto químico industrial de gran uso. el nitropropeno intermedio se convierte en 3. Comprende la reacción de piperonal con nitroetano en presencia de un catalizador básico. Se reducen 3.en el comercio. el intermedio se suele reducir con hidruro de aluminio-litio. que luego se reduce mediante uno de los métodos de aminación reductiva descritos más arriba. Para la síntesis de MDMA. La reducción se puede lograr también mediante una reducción metálica disolvente utilizando amalgama de aluminio (hoja de aluminio y mercuriocloro). y la dimetilamina produce MDDMA. o se puede extraer del aceite de sasafrás u otras partes de plantas o aceites esenciales con alto contenido de safrol. se produce un reflujo de piperonal y nitroetano en ácido acético y acetato amónico. 3. Para producir MDA. El método más directo para la síntesis de la MDMA es la aminación reductiva de 3.4-MDP-2-P.4-MDP-2-P con metilamina y gas de hidrógeno sobre un catalizador de platino (reducción metálica catalítica). MDEA u otros ETA. N-formil-MDMA se hidroliza por reflujo con un ácido o una base fuerte para producir MDMA. Aminación reductiva utilizada en la fabricación ilícita de MDMA El método del “nitropropeno” adquirió popularidad a principios del decenio de 1990. pero normalmente se deja reposar una mezcla de piperonal y nitroetano durante unos pocos días en la oscuridad. Un método análogo para la fabricación ilícita de anfetamina comúnmente utilizado para la fabricación ilícita de MDMA es el método Leuckart. y por lo general precipitan de la solución de la reacción como cristales amarillos brillantes. La sustitución de la metilamina con otras aminas produce diferentes productos de tipo MDMA (por ejemplo. El 2C-B se fabrica haciendo reaccionar 2. seguida de una reducción LiALH4 para formar 2. el 2C-B y otras fenetilaminas con anillo sustituido se utiliza nitrometano. que es luego brominada para obtener el producto final.5-dimetoxifenetilamina. 12 . La reacción se produce mediante la brominación del safrol con ácido hidrobrómico a baja temperatura. mientras que para la mescalina.5 dimetoxibenzaldehído y nitroetano. o MDDMA). MDEA. Las drogas de tipo metoxianfetamina se sintetizan normalmente utilizando aldehído y nitroetano con anillos sustituidos apropiados. El rendimiento dependerá del contenido de agua de la mezcla de la reacción. seguida de un tratamiento con metilamina para formar el producto final.La MDMA también se fabrica normalmente utilizando el denominado método del “bromosafrol”. MDA. maximizan la probabilidad de un resultado “verdadero” y reducen al mínimo la probabilidad de un positivo falso. la metanfetamina y las anfetaminas secundarias con anillo sustituido.VI. aunque también se realizan en laboratorios como primer procedimiento de clasificación. aunque deben ser evaluados internamente en función de su especificidad y sensibilidad. Se reconoce que la selección de estos parámetros en cualquier caso particular tendrá en cuenta la droga de que se trate y los recursos de laboratorio de que dispone el analista. otras aminas secundarias. generalmente menos de un miligramo. Dado que las muestras pueden variar en pureza (concentración de ETA) y pueden contener sustancias ajenas. como todas las técnicas analíticas. En general. 13 . Se dispone también de muchos estuches de ensayos comerciales para la clasificación de ETA. Además. Técnicas de ensayos cromáticos Normalmente se utilizan varios reactivos diferentes en los ensayos cromáticos de sustancias de tipo anfetamínico y sus análogos con anillo sustituido. por ejemplo la dietilamina y la piperidina. y con frecuencia los mejores resultados se obtienen con las cantidades de muestras más pequeñas. ANÁLISIS CUALITATIVO Y CUANTITATIVO DE ETA Por lo general. Los métodos de clasificación con instrumentos. aunque también se dispone de ensayos de inmunoanálisis y varias técnicas rápidas y con instrumentos portátiles. cuando se intenta determinar la identidad de una sustancia sometida a fiscalización en el material sospechoso. por lo tanto. El ensayo de Simon se utiliza generalmente para aminas secundarias. sólo se necesitan cantidades muy pequeñas de la muestra para completar con éxito el ensayo. En los últimos tiempos. o pruebas rápidas. Las buenas técnicas de ensayos presuntivos. 1. por ejemplo. ENSAYOS PRESUNTIVOS Los ensayos presuntivos son procedimientos de clasificación rápidos que por lo general consisten en dos o tres ensayos independientes. Ahora bien. como el espectrómetro de movilidad de iones (escaneo de iones). Están diseñados para dar una indicación de la presencia o ausencia de tipos de drogas en la muestra ensayada y eliminar rápidamente las muestras negativas. los ensayos presuntivos se utilizan con más frecuencia en pruebas de campo. el enfoque analítico debe comprender la determinación de por lo menos dos parámetros no correlacionados. pueden dar colores similares. A. han obtenido popularidad en los últimos años. El ensayo de Marquis permite distinguir entre la anfetamina y sus análogos con anillo sustituido. Los ensayos cromáticos son muy sensibles. incluidas la MDMA y la MDE. el espectrómetro de masas portátil y los espectrómetros FTIR o Raman. los ensayos presuntivos no se consideran suficientes para identificar drogas y los resultados deben ser confirmados mediante otros ensayos de laboratorio. Para la clasificación de los ETA. los colores que aparecen en estos ensayos deben interpretarse con cuidado. Los más importantes para estas sustancias son los ensayos de Marquis. se usan normalmente ensayos cromáticos. de Simon y de Chen. Ahora bien. Ensayos cromáticos Los ensayos cromáticos suelen ser los ensayos clínicos más sencillos y más rápidos que un analista puede aplicar a una muestra. hay que tener presente el aspecto subjetivo de la evaluación del color. También se acepta que los requisitos especiales establecidos en diferentes jurisdicciones pueden determinar las prácticas que se sigan en un laboratorio particular. Ensayo de Simon 1) Colocar una pequeña cantidad (1-2 mg de polvo. Por estas razones. 2) Agregar una gota de reactivo de Simon 1. Un color verde oscuro 14 . 3) Agregar una gota de reactivo de Simon 2. MÉTODOS En el anexo II se describe la preparación de reactivos. por ejemplo. El ensayo de Chen se utiliza para distinguir la efedrina. 2) Agregar una gota de reactivo de Marquis 1. por lo general. luego una gota de reactivo 3. es esencial que el analista confirme los resultados del ensayo de Simon realizando un ensayo suplementario. RESULTADOS En el cuadro 1 se proporcionan resultados de los tres principales ensayos cromáticos para la mayoría de los estimulantes de tipo anfetamínico y sus análogos con anillo sustituido que se encuentran más comúnmente. o 1-2 gotas de líquido) del material sospechoso en una ranura de una placa de ensayos. la seudoefedrina. 3) Observar el color de la mezcla. Los reactivos se deben preparar en el momento. 2) Agregar una gota de reactivo de ácido gálico. un ensayo de Marquis. proporciona un medio simple de distinguir MDMA. o 1-2 gotas de líquido) del material sospechoso en una ranura de una placa de ensayos. Ensayo de Chen 1) Colocar una pequeña cantidad (1-2 mg de polvo. y luego 2 gotas de reactivo 3 y mezclar. luego una gota de reactivo 2. 4) Observar el color de la mezcla. MDA y MDEA de la anfetamina o la metanfetamina. 4) Observar el color de la mezcla. que no reaccionan con el reactivo del ensayo de Chen. y mezclar. el ensayo del ácido gálico. o 1-2 gotas de líquido) del material sospechoso en una ranura de una placa de ensayos. 2) Agregar 2 gotas de reactivo de Chen 1. el sustitutivo metilendioxi del anillo y no un ETA individual con esa subestructura. Dado que el ensayo de ácido gálico se utiliza principalmente para identificar. como el safrol y el isosafrol. También reaccionan los precursores que contienen la subestructura metilendioxi. la norefedrina.los colores son intensos pero pueden desaparecer rápidamente en presencia de algunas impurezas. 3) Agregar 2 gotas de reactivo de Chen 2. la fenilpropanolamina y la metcatinona de la anfetamina y la metanfetamina. porque reacciona específicamente con los compuestos aromáticos de metilendioxi sustituido. Ensayo del ácido gálico 1) Colocar una pequeña cantidad (1-2 mg de polvo. en este cuadro los resultados no se incluyen separadamente para sustancias individuales. Un cuarto ensayo. Ensayo de Marquis 1) Colocar una pequeña cantidad (1-2 mg de polvo. 3) Observar el color de la mezcla. y mezclar. o 1-2 gotas de líquido) del material sospechoso en una ranura de una placa de ensayos. brillante indica la presencia de MDA, MDMA, MDE, N-hidroxi-MDA o MMDA. En algunos casos, por ejemplo MDE y N-hidroxi-MDA, el color verde puede cambiar a pardo durante el ensayo. Cuadro 1. RESULTADOS DE LOS ENSAYOS CROMÁTICOS Compuesto Anfetamina Catinona Reactivo de Marquis Naranja, lentamente pasando a pardo SR Reactivo de Simon SR * SR * Reactivo de Chen SR * Pasa gradualmente del amarillo al naranja SR * Púrpura Dimetilanfetamina Efedrina Seudoefedrina N-Etilanfetamina Metanfetamina Metcatinona Naranja SR Naranja, pasando a pardo Naranja, lentamente pasando a pardo SR SR * SR * Azul intenso Azul pálido, precipitado como mancha o anillo SR SR * SR * SR * SR * SR * SR * Azul intenso SR * Azul (intenso)--> pardo Azul intenso SR * SR * SR * SR * SR * SR * Pasa gradualmente del amarillo al naranja Púrpura SR * Norefedrina 2C-B 2C-T-2 2C-T-7 DMA DOB DOET FLEA MBDB MDA MDDM MDEA MDMA MDOH MMDA 4-MTA PMA STP / DOM TMA SR Amarillo--> verde Rosa pálido, naranja SR Verde-->verde oscuro Amarillo--> verde Pardo amarillento Azul oscuro/negro Azul oscuro/negro Azul oscuro/negro Azul oscuro/negro Azul oscuro/negro Azul oscuro/negro Azul oscuro/negro Púrpura SR SR--> verde pálido Amarillo Naranja SR * SR * SR * SR * SR * SR * SR * SR = sin reacción. * El color del reactivo se debe considerar negativo. 15 Notas analíticas a) ETA específicos Dado que los ETA, en especial la metanfetamina y los análogos con anillo sustituido en Asia sudoriental, se encuentran con frecuencia en forma de tabletas de colores brillantes, el resultado de los ensayos cromáticos puede quedar oculto, o se puede producir un cambio en el resultado de esos ensayos. Aunque se utiliza una gran variedad de colores para producir tabletas de ETA, la mayoría de los colores son solubles en agua, y su solubilidad se puede manipular cambiando el pH de la solución. En esos casos, por lo tanto, el análisis se debe ajustar al procedimiento de extracción y se debe eliminar el color totalmente antes de proceder al ensayo cromático propiamente dicho. En algunos casos, cuando el ensayo cromático no se puede interpretar claramente debido a la presencia de un colorante en la tableta, el procedimiento siguiente suele producir resultados aceptables: Colocar una pequeña cantidad (aproximadamente 10 mg) de la muestra en un tubo de ensayo pequeño. Agregar aproximadamente 1 ml de metanol (o una mezcla de 4:1 metanol:cloruro de metileno). Después de filtrar la mezcla por lana de vidrio, se la evapora hasta que quede seca. La muestra se reconstituye en una pequeña cantidad de agua y luego se procede a realizar el ensayo cromático depositando cuidadosamente la solución de la muestra acuosa en una placa de ensayos y agregando el reactivo de color. Dado que la muestra ya está diluida, bastarán 3 gotas de reactivo por una gota de muestra. La presencia de disolventes y adulterantes también puede perturbar las reacciones de coloración y dar resultados negativos falsos. El ensayo de Simon puede dar resultados negativos falsos en muestras de ETA con adulterantes o disolventes; el ensayo de Marquis es menos sensible a las muestras adulteradas y, por lo tanto, es preferible cuando la concentración de ETA en la muestra es muy baja. b) General Los colores descritos son juicios subjetivos debido a que la percepción de los colores es individual. Por esta razón, es decir, el aspecto subjetivo de la evaluación del color, es necesario que cada analista ensaye estándares de referencia apropiados para asegurar que puede reconocer cada resultado del ensayo cromático. Asimismo, es conveniente realizar un ensayo con una muestra en blanco sin la sustancia de que se trata para asegurar la familiaridad con el color del reactivo. Si se realiza adecuadamente, un ensayo de coloración negativo es por lo general bastante fidedigno para establecer la ausencia de un compuesto determinado; no obstante, los resultados positivos son sólo indicaciones presuntivas de la posible presencia de un compuesto. Muchos otros compuestos, con frecuencia benignos y no sometidos a fiscalización por las leyes nacionales o los tratados internacionales, pueden dar colores similares con un reactivo de ensayo cromático determinado. Por lo tanto, es obligatorio que el analista confirme un ensayo cromático positivo de cualquier compuesto sometido a fiscalización por ley utilizando otros ensayos de laboratorio. Para eliminar la posibilidad de que una placa de ensayo contaminada dé un resultado positivo falso, conviene colocar el reactivo en la placa y luego agregar una cantidad pequeña de la muestra al reactivo. 16 Lecturas recomendadas Naciones Unidas (1995), Métodos para el ensayo inmediato de drogas de uso indebido: Manual para uso del personal de laboratorios nacionales de estupefacientes y de los organismos de represión (ST/NAR/13/Rev.1) S. A. Johns, A. A. Wist y A. R.Najam (1979), Spot tests: a colour chart reference for forensic chemists, J. Forensic Sci., vol. 24, págs.631 a 649. E. Jungreis (1985), Spot test analysis, Clinical, environmental, forensic and geochemical applications, John Wiley & Sons, Nueva York-Chichester-Brisbane-Toronto-Singapur. A. C. Moffat, M. D. Osselton y B. Widdop (eds.) (2004), Clarke’s Analysis of Drugs and Poisons, 3ra. ed., Pharmaceutical Press, Londres-Chicago. C. L. O’Neil y otros (2000), Validation of twelve chemical spot tests for the detection of drugs of abuse, Forensic Sci. Int., vol.109, págs.189 a 201. R. A. Velapoldi y S. A. Wicks (1974), The use of chemical spot test kits for the presumptive identification of narcotics and drugs of abuse, J. Forensic Sci., vol. 19, págs. 636 a 654. 2. Ensayo de aniones El ensayo de aniones con fines forenses utiliza normalmente las solubilidades combinadas con reacciones selectivas en que los resultados están determinados por la presencia o ausencia, y la solubilidad, de un precipitado. A continuación se describe la solubilidad de diferentes ETA y sus sales en agua y en varios sistemas de disolventes comunes. Anfetamina y sus sales Base Agua Metanol o etanol Éter dietílico Cloroformo Ligeramente soluble Soluble Soluble Soluble Clorhidrato Soluble Soluble Insoluble Soluble Fosfato Soluble Ligeramente soluble Insoluble Insoluble Sulfato Soluble Ligeramente soluble Insoluble Insoluble Metanfetamina y sus sales Base Agua Metanol o etanol Éter dietílico Cloroformo Ligeramente soluble Soluble Soluble Soluble Clorhidrato Soluble Soluble Insoluble Soluble 17 Fosfato — Forma un precipitado amarillo pálido. Yoduro — Forma un precipitado amarillo brillante que es ligeramente soluble en una solución de amoníaco concentrada pero soluble en una solución de tiosulfato. se deben realizar ensayos adicionales o trabajos de familiarización con las limitaciones del ensayo. Al calentarla lentamente. Dado que otros aniones pueden dar resultados similares. En el anexo II se describe detalladamente la preparación de los reactivos. 1 ml cada uno) de solución de ácido nítrico (10% v/v) y solución de molibdato de amonio (10% p/v). Cloruro — Forma un precipitado cremoso que es insoluble en ácido nítrico concentrado. indica la presencia de una sal sulfatada. Para las sales sulfatadas y fosfatadas se pueden realizar otros ensayos específicos: Ensayo de sal sulfatada La muestra del ETA desconocido (unos 100 mg) se disuelve en agua y se trata con una solución de cloruro de bario. el precipitado es soluble en una solución de amoníaco diluida. cloroformo y otros disolventes orgánicos. indica la presencia de una sal fosfatada. que es soluble en una solución de amoníaco. e insolubles en éter dietílico.ETA con anillo sustituido y sus sales Las bases libres de ETA con anillo sustituido son por lo general insolubles en agua y solubles en etanol. éter dietílico. 18 . Un precipitado blanco. Se lo puede volver a precipitar a partir de ambas soluciones agregando ácido nítrico. el precipitado se disuelve muy lentamente en soluciones de amoníaco diluidas y es soluble en soluciones de amoníaco concentradas. ligeramente solubles en cloroformo. Ensayo del nitrato de plata La muestra del ETA desconocido se disuelve en varias gotas de agua desionizada y se trata con 1-2 gotas de solución de AgNO3. Después de lavarlo con agua. la formación de un precipitado de color amarillo canario brillante. A continuación se dan los resultados para los aniones comunes. Después de lavarlo con agua. a partir de la cual se lo puede volver a precipitar añadiendo ácido nítrico. MÉTODOS Todos los reactivos se deben preparar con arreglo a un procedimiento establecido. o en ácido nítrico frío. Las solubilidades de las diferentes sustancias de este grupo dependen del ETA con anillo sustituido específico de que se trate. Sus sales clorhídricas son solubles en agua y etanol. que es insoluble en ácido clorhídrico. Bromuro — Forma un precipitado de color amarillo pálido a crema que es insoluble en ácido nítrico. Ensayo de sal fosfatada La muestra del ETA desconocido (unos 100 mg) se disuelve en una solución compuesta de volúmenes iguales (por ejemplo. Sulfato — Forma un precipitado cristalino ligeramente coloreado que se puede identificar fácilmente colocando la solución de ensayo en una placa de microscopio y buscando los característicos cristales de sulfato de plata en forma de “diamantes”. que ese soluble en una solución de amoníaco diluida. Microcrystal Test.. C. Lab. Modern Microcrystal Tests for Drugs. Es esencial lavar el precipitado con agua antes de realizar el ensayo de disolución del precipitado. Fulton. así como los requisitos en materia de equipo e instrumentos básicos. por lo general fotografías de cristales conocidos. págs. B. T.. En el capítulo “Análisis de isómeros ópticos” (página 37) se describen métodos y procedimientos detallados para el ensayo de microcristales de ETA. MÉTODOS La forma más simple del ensayo consiste en agregar una gota de un reactivo adecuado a la sustancia que se ensaya. sencillos y extremadamente sensibles para identificar sustancias y sus isómeros ópticos. A Division of John Wiley & Sons. vol. M. a fin de remover cualquier anión soluble (no precipitado). 1995. Rapid and sensitive technique for the differentiation of the optical isomeric forms of methamphetamine and amphetamine. (1973). Ōno. Wiley-Interscience. y observar y analizar luego los cristales formados en el microscopio de polarización. J. Chem. Cland. (1969)..Notas analíticas Dado que todos los ensayos de aniones se realizan en soluciones acuosas. Ass. H. Japón. Mausolf. Ensayos de microcristales Los ensayos de microcristales son rápidos. 3..6. No. Nueva York-Londres-Sydney-Toronto. Es rápida (un análisis rara vez toma 19 . se deben describir las características principales de los cristales. 6. S.87 a 95. 5(4). seguida del análisis de los cristales resultantes utilizando un microscopio de polarización y comparándolos con los materiales de referencia. 19 a 33. Si no se dispone de fotografías. C. Comprenden la formación de cristales a partir de la reacción del compuesto objetivo con un reactivo químico. Lecturas recomendadas Cunningham. Analyses of Inorganic Components Found in Clandestine Drug Laboratory Evidence. la solubilidad en agua de las sales de ETA es una condición para obtener resultados significativos. con fotografías de resultados de ensayos de microcristales de 39 ETA y sus precursores. Lecturas recomendadas McKibben. J. CROMATOGRAFÍA DE CAPA DELGADA (CCD) La cromatografía de capa delgada (CCD) es una de las técnicas usadas con más frecuencia para separar e identificar drogas fabricadas ilícitamente. N. Evans. El registro más preciso de los resultados del ensayo son las fotografías. A fin de mantener un registro preciso.. M. Microgram. D. Invest.. Chappell. un esbozo de las formas de los cristales puede resultar útil. 1996 Proporciona una introducción amplia a la técnica de los ensayos de microcristales. En el anexo III se dan términos descriptivos para las formas de los cristales y fotografías de cristales de los principales ETA. La activación por calor normalmente no se requiere para capas enlazadas químicamente (placas comerciales). Report XVII of the DFG Commission for clinicaltoxicological analysis. revised and enlarged edition. pero el analista deberá familiarizarse con los resultados específicos para ETA individuales. y con un indicador inerte.más de 30 minutos). También se presta a una variedad de técnicas de visualización. Pese a las ventajas obvias de la CCD. Dejar el sistema de disolvente en el tanque de CCD durante un tiempo suficiente para permitir la saturación de la fase de vapor antes del análisis (con tanques revestidos con papel absorbente.5 85 10 5 75 15 10 En relación con sistemas de CCD más normalizados. véase: Thin-layer chromatographic Rf values of toxicologically relevant substances on standardized systems. Sistemas de disolventes (fases móviles) Sistema A: Metanol Amoníaco concentrado Sistema B: Acetato etílico Metanol Amoníaco concentrado Sistema C: Cicloexano Tolueno Dietilamina 100 1. en muchos países no se la acepta como técnica única de identificación de drogas. que fluorece bajo luz UV de longitud de onda de 254 nm Nota: Las placas preparadas por el analista debe ser activadas antes de utilizarlas. 1992. que van desde los materiales más polares hasta los más no polares. sensible (se requieren cantidades inferiores a 1 mg del analito). MÉTODOS A continuación se proporcionan métodos recomendados y resultados seleccionados.25 mm. VCH Verlagsgesellschaft mbH. Tamaños de placa típicos: 20x20 cm. 10x5 cm (la placa de 10x5 cm se debe utilizar únicamente con el lado de 10 cm en posición vertical en el tanque de CCD. Placas de CCD (fases estacionarias) Recubrimiento: Gel de sílica G con un espesor de capa de 0. extremadamente flexible en las fases estacionaria y móvil y. Sistemas de disolventes Preparar sistemas de disolventes de desarrollo en la forma más precisa posible utilizando pipetas y cilindros de medición. 20 . volumen especial del boletín TIAFT. por lo tanto. y es poco costosa. 20x10 cm. colocándolas en un horno por lo menos durante 10 a 30 minutos a 120º C. adecuada para una amplia variedad de sustancias en forma de bases o de sales. second. esto toma aproximadamente 5 minutos). Las placas se almacenan luego en un desecador libre de grasas sobre gel de sílica azul. Dejar que la aplicación se seque. Deben almacenarse a oscuras y en un lugar frío. La aplicación se debe hacer con cuidado para no dañar la superficie de la placa. aplicar también a la placa un disolvente como control negativo). no tiene importancia. es decir.5 cm del borde lateral de la placa. cuando se sospecha que la pureza del ETA es demasiado baja debido a que ha sido adulterado. debe ser 2 cm desde el fondo de la placa. En algunos casos. y colocar la placa en el tanque de CCD saturado de disolvente (la saturación de la fase de vapor se logra utilizando almohadillas o papel de filtro saturados con disolvente como revestimiento del tanque). Para las muestras de ETA en otras formas distinta del polvo. Visualización/detección Las placas se deben secar antes de la visualización: el disolvente se puede dejar secar a temperatura ambiente. se producirán puntos difusos. Soluciones de muestras de ETA (muestra de ETA desconocido) Las soluciones estándar de ETA se deben preparar a una concentración de aproximadamente 5 mg/ml en metanol. 21 . los compuestos emigran como bases libres. Cualquiera de las dos es satisfactoria. si se conoce la concentración del ETA. o el equivalente de 5 mg/ml. Soluciones acuosas: Aplicar directamente sobre la placa. Soluciones estándar de ETA Las soluciones estándar de ETA se deben preparar a una concentración de aproximadamente 2 mg/ml en metanol. es importante que se eliminen de la placa todas las trazas de amoníaco. de otra forma. Extraer la placa del tanque de revelado tan pronto como el disolvente alcance la línea de revelado marcada de antemano. Debido a la naturaleza básica de los disolventes de desarrollo. quizá sea necesario preparar soluciones de muestras más concentradas (se recomiendan soluciones 10 veces más concentradas como punto de partida). Para el desarrollo del color apropiado. junto con 2 µl de la solución o soluciones estándar (de preferencia. El punto de partida del análisis.Preparación de muestras y soluciones estándar de ETA La forma de los estándares y las muestras (en sales o bases). y las aplicaciones no se deben colocar a menos de 1. la “línea de aplicación”. el tamaño de la aplicación de la muestra debe ser lo más pequeño posible (>2 mm). o extraer con un secador de aire caliente. Si se utiliza aire caliente. Aplicación y desarrollo Aplicar sobre la placa de CCD 1 µl y 5 µl de una solución de la muestra. El espacio entre aplicaciones de la muestra (puntos de aplicación) debe ser de por lo menos 1 cm. Cápsulas: Extraer el contenido de una muestra representativa de las cápsulas (siguiendo planes generales de muestreo) y preparar una solución con ese polvo. Para evitar aplicaciones difusas durante el desarrollo. las soluciones de muestra se deben preparar de la siguiente manera: Tabletas: Triturar un número representativo de tabletas (siguiendo planes generales de muestreo) hasta obtener un polvo fino y preparar una solución con ese polvo. hay que tener cuidado en razón de la volatilidad de las bases libres de ETA. los ETA previstos se deben seleccionar utilizando uno de los siguientes métodos y reactivos. Rociar la placa con el reactivo de ninhidrina y calentar en un horno a 120º C por lo menos durante 15 minutos. Luz UV Observar la placa seca bajo luz UV a 254 nm y 366 nm. como la anfetamina y la metanfetamina. A.25 g de cloruro platínico y 5 g de cloruro potásico en agua y preparar hasta 100 ml. incluidos los ETA. Reactivo sensible para aminas primarias. F. y las aminas secundarias. Sobre la base de los resultados de los ensayos presuntivos.La siguiente es una selección de métodos de visualización. Recomendado para la detección de concentraciones de aminas primarias. Luz UV a 254 nm Analitos objetivo y resultados Método universal. o una combinación de ellos: Método/ reactivo de visualización A. Muchas sustancias. adheridas a un átomo de carbono alifático. Muchas aminas primarias y secundarias. H. Reactivo de ninhidrina Preparar una solución en etanol al 10%. producen manchas violetas o rosas. G. Reactivo general para aminas secundarias (la efedrina y la seudoefedrina no reaccionan). Reactivo general para alcaloides y bases nitrogenadas. Distinción entre ETA con y sin anillo sustituido. Rociar la placa con la solución de yodoplatinato de potasio acidificado y observar las manchas de colores. Reactivo de yodoplatinato de potasio acidificado Disolver 0. B. producen manchas púrpura en una placa normalmente de color verde fluorescente. 22 . La efedrina también produce una mancha violeta. Las aminas primarias y secundarias dan manchas de diversos colores. Agregar 2 ml de ácido clorhídrico concentrado. Las aminas primarias. dan manchas violeta o rosa. C. La solución también se puede utilizar para rociar las superficies de las placas que anteriormente habían sido rociadas con ninhidrina. B. como la metanfetamina. Reactivo de yodoplatinato de potasio acidificado Reactivo negro sólido de potasio Reactivo de Marquis Reactivo de fluorescamina (Fluram) Reactivo de Simon Reactivo de Dragendorff D. desde el violeta (aminas primarias) hasta el naranja o el rojo-naranja (aminas secundarias). La anfetamina y la metanfetamina producen manchas difusas de color gris-violeta-pardo sobre un fondo rosa. E. como la anfetamina. Reactivo de ninhidrina C. Muchas aminas primarias y secundarias dan manchas de color azul pálido. Reactivo general sensible. Esto produce manchas de colores más intensos. Preparar el reactivo fresco antes de usarlo. Cubrir el tanque. 7 Este método modificado mejora la sensibilidad para la metanfetamina a 0. y a la interferencia con el color de fondo cuando se utiliza amoníaco en el disolvente de desarrollo. Reactivo negro sólido de potasio Solución A: Preparar una solución de sal de reactivo negro sólido de potasio en agua al 1% [2. Disolver 50 ml con agua y agregar 8 g de yoduro de potasio en 20 ml de agua.85 g de subnitrato de bismuto (básico) en 10 ml de ácido acético. Rociar la placa con una solución preparada de 1 ml de solución madre de Dragendorff. 23 . Los colores varían del naranja al violeta. rociar con una solución de trietilamina al 10% v/v en diclorometano). Secar las placas con aire y rociar una vez más con la solución A. El vapor de acetaldehído hará que una mancha de metanfetamina se vuelva de color azul intenso. Reactivo de fluorescamina (Fluram) Disolver 10 mg de fluorescamina en 50 ml de acetona. una solución acuosa que contiene nitroprusiato de sodio a una concentración del 1% y carbonato de sodio al 20%). proporciona información adicional útil para diferenciar entre los ETA. por ejemplo. No obstante. Rociar la placa con el reactivo de Simon. E. Las aminas secundarias como la metanfetamina y la MDMA producen manchas inmediatamente. Secar utilizando aire caliente. (Para la estabilización en 366 nm. El nuevo rociado con solución B produce manchas de colores para la anfetamina y otros ETA con anillo sustituido. Preparar fresco antes de cada uso. después de la detección con ninhidrina. Observar la placa con una luz UV a 366 nm. 2 ml de ácido acético y 10 ml de agua. Rociar la placa con el reactivo de fluorescamina. A tal fin. Los colores varían del violeta para las aminas primarias al naranja o el naranja-rojo para las aminas secundarias como la metanfetamina y el MDMA. La metanfetamina no se detecta. Reactivo de Marquis Agregar de 8 a 10 gotas de solución de formaldehído al 40% a 10 ml de ácido sulfúrico concentrado. G. Reactivo de Dragendorff Solución madre: disolver 0. Las aminas primarias no se pueden detectar en razón de la baja sensibilidad del sistema a este grupo de sustancias. No se recomienda rociar con el reactivo de Marquis debido a la presencia de ácido sulfúrico concentrado.5-dimetoxi-4-((4-nitrofenil)azo)benceno diazonio tetraclorozincato (2:1)] Solución B: 1N NaOH Rociar la placa con la solución A y observar las manchas de colores. Colocar la placa en un tanque de desarrollo vacío junto con un vaso de precipitación con acetaldehído. Reactivo de Simon7 Disolver 100 mg de nitroprusiato de sodio y 2 g de carbonato de sodio en 10 ml de agua (es decir. verter el reactivo de Marquis con una pipeta Pasteur sobre las manchas ya detectadas.D. Preparar diariamente. H. La anfetamina da una mancha fluorescente amarilla brillante. F.1 µ (LOD). 35 (0.24) C (0.32 0.35 (0.33 (0.15) (0.47) (0. marcar las manchas (por ejemplo.30) (0.52) B 0.48 (0.40 0.41) 0.56 0. En el cuadro 2 se dan los valores Rf de algunos de los ETA más comunes. y calcular los valores del factor de retardación (Rf): Rf = Distancia de migración: del origen al centro de la zona del analito (mancha) Distancia de desarrollo: del origen al frente del disolvente Es muy común expresar factores de retención como Rf x 100.43)** 0.73) 0.1mol/l).37 0.25) (0.37 0.20 (0.36 0.33 0.03) (0. con lápiz).22 (0. Valores Rf de los ETA y adulterantes que se encuentran con mayor frecuencia A 0.32 0.52) (0.51) 0.5) Sistema B: acetato etílico: metanol : amoníaco concentrado (85:10:5) Sistema C: ciclohexano : tolueno : dietilamina (75:15:10) ** Los valores Rf entre paréntesis se obtuvieron utilizando placas de sílica impregnadas con KOH metanólico (0.43) 0.24) (0.28) (0.39) 0.31 (0.31 (0.13) (0. B o C.33) 0.35 (0.47 0. 24 .05) (0.23) (0.25mm Sistema A: metanol : amoníaco concentrado (100:1.37 (0.Interpretación Después de la visualización.19) (0.41 (0. denominado hRf.31 0.20) Sistema de CCD* Nombre del ETA Anfetamina Catinona DOB DOET DMA N-Etilanfetamina Metanfetamina MDA MDMA MMDA PMA STP/DOM TMA Efedrina Cafeína *Sistemas de disolventes: A.39) 0.43) 0.37 0.42) 0.42) 0.36 (0.18) (0.31) 0.21 (0. Cuadro 2. placa de CCD: Gel de sílica G con espesor de capa de 0. RESULTADOS Comparar los colores y los valores Rf de la muestra del ETA desconocido con los de normas de referencia de ETA auténticos que se analizaron simultáneamente en la misma placa.66 0.33 (0. (1982). y Hase... se puede aumentar significativamente la posibilidad de reproducción utilizando compuestos de referencia y valores Rf corregidos (Rfc). J. Practical Thin-Layer Chromatography. A. CROMATOGRAFÍA EN FASE GASEOSA (CG) — DETECTOR DE IONIZACIÓN POR LLAMA (FID) Para el análisis de ETA por CG. 107. En la actualidad el instrumento preferido de CG para trabajos analíticos de rutina es el cromatógrafo de columna capilar de calibre menor. H. C.2 (1992). Stead. Nachweis und Identifizierung von Feniletilaminen (Stimulantien und Halluzinogene). en una edición anterior del presente manual se describe un método que utiliza columnas rellenas. Alternativamente. A. Thin-Layer Chromatography. Se reconoce que. Sherma (Eds. Vol. págs. los valores proporcionados deben considerarse sólo como una indicación del comportamiento cromatográfico de los ETA y adulterantes enumerados. Los procedimientos de CG que utilizan una columna capilar de calibre mayor (0. la saturación del tanque o la distancia de desarrollo pueden resultar en cambios significativos en los valores Rf. Jork y otros. Sci. Moffat. vol. T. (1987). Reagents and Detection Methods.Notas analíticas Debido a que pequeños cambios en la composición y activación de la placa de CCD. y son más robustos que los sistemas de columna capilar de menor calibre. se pueden adaptar para utilizarlos con columnas de mayor calibre.). (1990): Fast black K salt: a versatile thin-layer chromatographic visualization reagent for the differentiation of aliphatic amines. Es esencial que los patrones de referencia de los ETA se analicen simultáneamente en la misma placa. por diversas razones.. Boca Raton Press. 1 a 11. H. A los fines de la identificación. 1106-1168.. los principios generales de las técnicas son válidos. K. VCH. Weinheim. Analyst. C. T.. Gill. Wähälä. A Multidisciplinary Approach. P. págs.1 (1990). R. Neumann.. siempre se deben considerar tanto los valores Rf como los colores de las manchas después del rociado con reactivos de visualización Lecturas recomendadas Fried y J. vol. 115. que fueron diseñados para columnas rellenas.53 mm de diámetro interno) representan un medio de mejorar el poder de resolución en comparación con las columnas rellenas. Wright. 263 a 267. Standardized thin-layer chromatographic systems for the identification of drugs and poisons. I. A. 1995. Gibbs. Pharm. Para esos laboratorios.32 mm. Ojanperä. hay laboratorios que quizá deseen mantener un sistema de columna rellena.. 25 . vol. 55. Los sistemas de CG más antiguos. los sistemas de disolventes. Analyst.2 y 0. utilizando columnas capilares con diámetros internos entre 0. Colocar con una pipeta una alícuota de 1 a 5 ml de esta solución en un tubo de ensayo de vidrio con tapón de rosca de 10 ml. En general. Tapar e invertir el tubo de ensayo por lo menos 10 veces o mezclar en un mezclador Vortex durante 1 minuto y dejar reposar hasta que se separen las capas. se pueden formar emulsiones. o utilizando el siguiente método aproximativo: disolver 100 mg de la muestra en 2-3 ml de cloroformo. Inyectar 1-2 µl de la capa de disolvente en el CG. La cantidad soluble (es decir. que éste método puede resultar en una pureza anticipada de la muestra inferior a la real para las sales que no son solubles en cloroformo (véase el capítulo VI. la adición de NaCI mejora la taza de extracción al romper la emulsión. 11 La pureza de la muestra se puede determinar en base a la experiencia del químico.2. Añadir por goteo una solución de hidróxido de sodio al 5% hasta obtener un pH 10. no se requiere extracción. Colocar con una pipeta una alícuota de 1 a 5 ml de esta solución en un tubo de ensayo de vidrio con tapón de rosca de 10 ml. y éste último debe ser inmiscible con una capa acuosa. supra) 26 8 . transferir la capa de disolvente a través de la capa de sulfato de sodio anhidro a un vial de CG. se pueden tomar muestras directamente en etanol/amoníaco acuoso (99:1). sin embargo. recoger los insolubles. En esos casos. Inyectar 1-2 µl de la capa de disolvente en el CG. Añadir por goteo una solución de hidróxido de sodio al 5% hasta obtener un pH 10. Si se utilizan agitadores modernos y luego se centrifuga la muestra para la separación de las dos capas. cloroformo). la condición del inyector y la columna pueden deteriorarse más rápidamente que Ocasionalmente. Hay que tener presente. Utilizando una pipeta Pasteur. secar y pesar. La pureza prevista de la muestra se determina empíricamente11. Utilizando una pipeta Pasteur. Con el empleo de este método.A. b) Soluciones de muestras de ETA (muestra de ETA desconocido) Pesar de 25 a 150 mg de la muestra. el peso original menos los insolubles secos) es la pureza prevista de la muestra. Los disolventes adecuados son. cloruro de metileno y acetato de butilo. e inyectarlas en el cromatógrafo de fase gaseosa. sin embargo. filtrar la solución. Si se requiere una muestra rápida del producto. entre otros. sobre el ensayo de aniones. y colocarla en una probeta graduada y añadir agua hasta la marca. n-hexano. normalmente no se forman emulsiones. Añadir luego 5 ml de disolvente de extracción (por ejemplo. cloroformo. los estándares de ETA se pueden obtener en forma de base. según la pureza anticipada. En esos casos. 9 Todos los analitos deben ser completamente solubles en el disolvente de extracción. el cloroformo) a través de la capa de sulfato de sodio anhidro a un vial de CG. en una probeta graduada de 25 ml y añadir agua hasta la marca. 10 Cuando se emplea cloroformo como disolvente de extracción. transferir la capa de disolvente (por ejemplo. Análisis cualitativo a) Soluciones estándar de ETA Preparación de muestras y soluciones estándar de ETA Poner unos 25 mg de sales estándar de ETA8 (debidamente pesados). es importante que la forma de los estándares y las muestras sea siempre la misma. Tapar e invertir el tubo de ensayo por lo menos 10 veces o mezclar en un mezclador Vortex durante 1 minuto y dejar reposar hasta que se separen las capas10. Luego añadir 5 ml de disolvente de extracción9.MÉTODOS 1. para obtener una concentración final de aproximadamente 1 mg/ml de sal del analito. 50 µm Nitrógeno. helio o hidrógeno. Análisis cuantitativo A continuación se presentan tres métodos para el análisis cuantitativo de ETA por CG-FID: Un método estándar único (A) y dos métodos estándar múltiples (B y C). o equivalente 10-30 m. El orden de elución es como sigue: anfetamina < metanfetamina < seudoefedrina < efedrina < PMA < PMMA < MDA < MDMA < 4-MTA < MDEA < MBDB < 2C-B. En las condiciones descritas. DB-1 (100% dimetilpolisiloxano). a 280°C. Los tres métodos se describen para uso general. Comprende la preparación de sólo una solución estándar de ETA en una concentración similar a la concentración prevista del analito.con las muestras extraídas. (Nota: Este método no es adecuado para análisis cuantitativos dado que es difícil producir una buena cromatografía en presencia de amoníaco. mientras que el método C requiere sililación. n-tetradecano u otros n-alcanos con un número par de átomos de carbono. 27 . a una tasa de 12°C/min. elucidan después de 2C-B.2 ml/min (He o H2) 20:1 a 50:1 La temperatura inicial debe ser suficientemente baja (por ejemplo. cloroformo). 2. 0. a aprox.5 min.8ml/min (N2) o 1-1. 60°C. o difenilamina) y disolver en 25 ml de disolvente de extracción (por ejemplo. si está disponible o es conveniente) DB-5 (5% fenil.10-0. ID 0. si está disponible. En el anexo IV hay ejemplos de métodos de CG validados para la cuantificación de ETA seleccionados. i. mantener la temperatura final durante 30 min. 60-90°C) en razón de la alta volatilidad de los ETA bases. se puede utilizar la programación del gradiente de presión. Si la solución estándar 12 El flujo de gas depende de la columna ID. Método A: método estándar único El método A es adecuado para la cuantificación de la mayoría de los ETA. la cafeína y la ketamina. Los métodos A y B no requieren derivatización.20-0.53 mm 0. 210-250°C 310°C Temperatura de inyección: Temperatura del detector: RESULTADOS La identificación se realiza comparando el tiempo de retención del analito con el de una norma de referencia. por ejemplo. Preparación de la solución estándar interna (SI) Pesar con precisión unos 25 mg de la solución estándar interna seleccionada (por ejemplo. mantener por 0. que se encuentran con frecuencia en las muestras de ETA en algunas regiones.) Condiciones de trabajo con un CG Detector: Columna: Longitud: Espesor de la película: Gas portador12: Tasa de desdoblamiento: Temperatura de la columna: FID (o NPD. 95% dimetilpolisiloxano). ponerla en una probeta graduada y añadir agua hasta la marca. la concentración objetivo se debe preparar dentro del intervalo lineal del instrumento (no más de 0. no se requiere extracción. Analizar la solución de la muestra del ETA desconocido de preferencia dos veces o más. 13 28 . para obtener una concentración final de aproximadamente 1 mg/ml de sal del analito. transferir la capa de disolvente a través de la capa de sulfato de sodio anhidro a un vial de CG. utilizando la solución estándar interna para la extracción de muestras y estándares de ETA. Añadir luego con precisión 5 ml de la solución estándar interna. poner una alícuota de 1 a 5 ml de esta solución en un tubo de ensayo de vidrio con tapa de rosca de 10 ml. Utilizando una pipeta Pasteur. Las muestras y soluciones estándar de ETA y sus concentraciones están diseñadas para usar con columnas capilares y los procedimientos que se describen más abajo. Añadir por goteo una solución de hidróxido de sodio al 5% hasta obtener un pH 10. Para una cuantitación precisa. El empleo de columnas y sistemas de CG alternativos puede requerir cambios en términos tanto de la composición relativa como de las concentraciones de los diferentes componentes. Inyectar 1-2 µl de la capa de disolvente en el CG. de la siguiente manera: a) Soluciones estándar de ETA Pesar con precisión unos 25 mg de sales estándar14 del ETA de interés en una probeta graduada y añadir agua hasta la marca. b) Soluciones de muestras de ETA (muestra de ETA desconocido) Pesar con precisión de 25 a 150 mg de la muestra. En esos casos. Condiciones de trabajo con CG Las mismas que para el análisis cualitativo por CG (pág.5 mg/ml). Tapar e invertir el tubo de ensayo por lo menos 10 veces o mezclar en un mezclador Vortex durante 1 minuto y dejar reposar hasta que se separen las capas. Inyectar 1-2 µl de la capa de disolvente en el CG. es importante que la forma del analito (sal o base) sea igual a la del estándar de ETA. Añadir por goteo una solución de hidróxido de sodio al 5% hasta obtener un pH 10. Preparación de muestras y soluciones estándar de ETA13 Las muestras y soluciones estándar de ETA se deben preparar siguiendo los procedimientos esbozados más arriba para el análisis cualitativo. Añadir luego con precisión 5 ml de solución estándar interna. 14 Si se utilizan estándares de ETA en forma de base. transferir la capa de disolvente a través de la capa de sulfato de sodio anhidro a un vial de CG. Tapar e invertir el tubo de ensayo por lo menos 10 veces o mezclar en un mezclador Vortex durante 1 minuto y dejar reposar hasta que se separen las capas. 26). Con una pipeta. La pureza prevista de la muestra se determina empíricamente. pesar no menos de unos 10 mg del estándar de ETA y disolver directamente en 10 ml de solución estándar interna dispensada con precisión.interna se utiliza para la extracción. Analizar la solución estándar tres veces o más. Transferir con precisión una alícuota de 1 a 5 ml de esta solución a un tubo de ensayo de vidrio con tapón de rosca de 10 ml. según la pureza anticipada. Utilizando una pipeta Pasteur. 8 mg/ml. Método B: método estándar múltiple sin derivatización El que sigue es un método de calibración de puntos múltiples recomendado. 15 Si se utiliza un estándar interno en forma de sal (por ejemplo. El porcentaje de contenido de droga de la muestra se puede calcular utilizando la siguiente fórmula: ATS (%) = donde ATS (%) = CSt CATS AATS/IS ASt/IS Contenido del ETA desconocido (como base o sal. una media de dos determinaciones) = Recuentos del área del pico del ETA estándar dividido por el recuento del área del pico del estándar interno (de preferencia. con y sin derivatización.3 a 0. De esta forma. en el anexo IV figuran métodos de CG validados para el análisis cuantitativo de ETA. preparada de conformidad con a) supra (= peso del ETA estándar puro por mililitro de disolvente) = Concentración de la solución de la muestra del ETA desconocido (mg/ml). se pueden preparar concentraciones estándar de ETA.6 a 0. otros n-alcanos. En esos casos. difenilamina o ETA estructuralmente relacionado en forma de base)15 en una probeta graduada de 500 ml y diluir al volumen con cloroformo para obtener una solución estándar interna de 0. calcular las tasas medias de las áreas del pico: 1) del estándar de ETA pertinente en relación con el estándar interno (ASt/IS). véase la nota 14) en el material de muestra original (= pureza de la muestra) CSt CATS * AATS/IS ASt/IS * 100 = Concentración de la solución estándar de ETA (mg/ml). se requiere una extracción. y lograr una calibración de puntos múltiples. preparada de conformidad con b) supra (= peso de la muestra del ETA desconocido por mililitro de disolvente) = Recuentos del área del pico del ETA desconocido dividido por el recuento del área del pico del estándar interno (de preferencia. una media de dos determinaciones) El método A se puede modificar de único a múltiple diluyendo secuencialmente alícuotas de la solución estándar de ETA con la solución estándar interna utilizando probetas graduadas de 10 ml. 29 . la sal de un ETA estructuralmente relacionado). Preparación de la solución estándar interna (SI) Pesar cuidadosamente de 0. y 2) del ETA desconocido en relación con el estándar interno (AATS/IS).Cálculos De las inyecciones múltiples. ii. pesar no menos de unos 10 mg de estándar de ETA y disolver directamente en 10 ml de solución estándar interna dispensada con precisión. en función de la concentración apropiada dentro del intervalo lineal del instrumento.4 g de la solución estándar interna seleccionada (ntetradecano. Para la preparación de los estándares de calibración en una calibración de 5 puntos. la cantidad de muestra utilizada deberá ser aproximadamente 60 mg. Nota: La cantidad de la muestra que se pese dependerá de la pureza anticipada. Utilizando una pipeta Pasteur. homogeneizar las muestras antes de iniciar cualquier ensayo o submuestreo. Preparación de soluciones de muestras de ETA (muestra de ETA desconocido) En general. Cerrar y agitar bien. Hacer básica al tornasol añadiendo unas pocas gotas de solución de amoníaco concentrada. añadir agua hasta la marca. Para la preparación de soluciones madre: a) b) Pesar con precisión unos 1000 mg de la sal o sales del ETA de interés y ponerlos en una probeta graduada de 1000 ml. como se indica en el método de clasificación preliminar. transferir aproximadamente 1 ml de la capa de cloroformo a través de sulfato de sodio anhidro a un pequeño vaso de precipitación. Transferir con precisión mediante una pipeta. Agregar agua hasta la marca. Hacer básica al tornasol añadiendo unas pocas gotas de solución de amoníaco concentrada. Por ejemplo.2-1 mg/ml del analito.Preparación de soluciones estándar de ETA (soluciones de calibración de CG) Las soluciones madre estándar deben contener todos los compuestos de interés en concentraciones de aproximadamente 1000 mg/l. 30 . y dejar reposar hasta que se separen las capas. por lo menos tres veces. 1-2 µl de cada nivel en el CG y utilizar los valores medios para establecer la curva de calibración. Se pueden mantener en una probeta cerrada en un refrigerador por un período de hasta un año. pero específicamente para los análisis cuantitativos. b) Transferir con precisión mediante una pipeta 5 ml de esta solución a un tubo de ensayo de vidrio con tapa de rosca de 20 ml. preparar los diferentes niveles de la siguiente manera: Preparación de estándares de calibración de puntos múltiples Nivel de calibración Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 Nivel 4 Nivel 5 Solución estándar de ETA (µl) 20 40 60 80 100 Solución SI (µl) 100 100 100 100 100 CHCl3 (µl) 880 860 840 820 800 Concentración aproximada de sal de ETA (mg/l) 20 40 60 80 100 c) d) Inyectar. 5 ml de esta solución a un tubo de ensayo de vidrio con tapa de rosca de 20 ml. si la pureza anticipada es de un 40%. Esta solución estándar no debe permanecer en reposo más de media hora antes de utilizarla para la calibración. Añadir con precisión 5 ml de cloroformo. Añadir con precisión 5 ml de cloroformo. a) Pesar con precisión una cantidad de muestra suficiente en una probeta graduada de 25 ml para obtener una concentración final de aproximadamente 0. pasos (c) supra) junto con una alícuota de 100 µl de solución estándar interna. produciendo datos espectrales muy específicos de compuestos individuales en una mezcla compleja de compuestos sin separación previa. 750 µl de cloroformo y 50 µl de BSTFA (o BSTFA + TMCS al 1%) a un vial de muestras de CG. D. CROMATOGRAFÍA EN FASE GASEOSA — ESPECTROMETRÍA DE MASAS (CG-EM) La CG-EM es una de la técnicas más utilizadas para la identificación. y dejar reposar hasta que se separen las capas. Método C: método estándar múltiple con derivatización Preparar muestras y soluciones estándar de ETA derivatizadas midiendo una alícuota (por ejemplo. Con instrumentos y programas informáticos de CG modernos. iii. 100 µl de la solución estándar interna y 800 µl de cloroformo y ponerlos en el vial de CG. seguir el método B (véase el cuadro titulado “Preparación de estándares de calibración de puntos múltiples”). como la pureza de la muestra (peso del analito en relación con el peso de la muestra). y recientemente también para la cuantificación de muestras de drogas forenses. Cálculos El porcentaje de droga contenido en la muestra se calcula a partir de la concentración de la solución de la muestra del ETA desconocido y los correspondientes valores de la curva de calibración. y añadiendo cloroformo hasta 1 ml. La preparación de derivativos es particularmente conveniente cuando el espectro de masas de la molécula no derivatizada tiene poco valor de 31 . Se mejoran la sensibilidad del análisis y la especificidad del espectro de masas del ETA mediante derivatización (véase el anexo VII). de preferencia dos veces o más. Las condiciones de trabajo pueden ser las mismas que para el análisis cualitativo (pág. Para la calibración de puntos múltiples. es decir. se establece la curva de calibración y se realizan los cálculos automáticamente para un punto único de la curva a la terminación del análisis. Normalmente. el resultado se expresará como contenido porcentual de la droga desconocida en el material de muestra original. combina el poder de separación y la sensibilidad de la CG-FID con la especificidad por analito de una técnica espectroscópica. Condiciones de trabajo con un CG Para los análisis cuantitativos. es preferible utilizar un CG equipado con un instrumento de muestreo automático. Como técnica compuesta. Medir 100 µl de la solución de la muestra. Analizar la solución de la muestra del ETA desconocido. Utilizando una pipeta Pasteur. 26). Preparación de muestras y soluciones estándar de ETA: Se preparan las muestras en la forma descrita más arriba para los métodos de CG. utilizando 50 µl de BSTFA en cada paso para la preparación de muestras y soluciones estándar. después de haber transferido las muestras y soluciones estándar a través de sulfato de sodio anhidro a un pequeño vaso de precipitación. y después de conocer a través del operador las concentraciones de los diferentes estándares de calibración y la solución de la muestra desconocida.c) d) Cerrar y agitar bien. Inyectar 1-2 µl en el cromatógrafo de fase gaseosa. transferir aproximadamente 1 ml de esta muestra a través de sulfato de sodio anhidro a un pequeño vaso de precipitación. 100 µl de base seca liberada (es decir. baja intensidad y sólo un ion fragmentado más abundante (pico básico). Condiciones de trabajo con CS-EM Condiciones del horno de CG: Columna: Igual que para el análisis de CG (se pueden utilizar las condiciones de los métodos A. Para utilizar en CG-EM. si se prefiere) 280°C 230°C Cámaras de escaneo de imágenes térmicas (microscopio de escaneo de iones. sólo con fines de referencia. B o C) Igual que para el análisis de CG. En general. La mayoría de los ETA no derivatizados tienen fragmentos de iones de bajo cociente masa/carga (m/z). la condición del inyector y de la columna se puede deteriorar más rápidamente que con las muestras extraídas. 32 . como material de la purga de la columna u otros contaminantes. 70 eV (Modalidad CI. ya que no se ven afectados por iones de fondo que interfieren. por ejemplo: DB-5 (5% fenil. Todos los compuestos identificados por CG-EM y comunicados por el analista se deben comparar con un espectro de masas actual del estándar de referencia apropiado. DB-1 (100% dimetil-polisiloxano). se puede tomar directamente en el etanol/amoníaco acuoso (99:1) e inyectar en el CG-EM. Ahora bien. es importante utilizar las bibliotecas de espectros de masas. Respecto de la mayoría de los instrumentos de CG-EM. La derivatización de ETA produce por lo general iones fragmentados de cociente m/z más alto y mayor abundancia. 1 ml/min Flujo constante (o presión constante) Punto de inyección Modalidad: Temperatura: Gas portador: Modalidad: Detector Modalidad de ionización: Temperatura de la transferencia: Temperatura de la fuente de iones: Parámetros de escaneo: Modalidad EI. 0. un derivativo que da un espectro de masas más característico que los compuestos iniciales. ya sea de una fuente comercial o generada por el usuario. Igual que el análisis de CG descrito más arriba. Los iones de gran masa son más específicos y tienen un mayor valor de diagnóstico. muchas de esas referencias están disponibles en línea. si se requiere). de preferencia obtenido con el mismo instrumento y utilizado en las mismas condiciones. en este caso.diagnóstico. que resulta en la formación de una isotiocianato. sin embargo. Se cuenta con varias bibliotecas de referencia comerciales sobre espectro de masas. intervalo de escaneo: 35-450 (para sustancias como 2C-B se puede comenzar a m/z 29) RESULTADOS La identificación se realiza comparando el tiempo de retención y el espectro de masas del analito con el de un estándar de referencia.25mm x 30m x 0. las muestras de aminas primarias también se pueden tomar directamente en disulfito de carbono (CS2). o equivalente Desdoblada/sin desdoblar 250°C Helio. si se requiere una muestra rápida. 95% dimetilpolisiloxano).25µm. se recomienda la cromatografía de fase inversa para el análisis de ETA y sus análogos con anillo sustituido. Las soluciones de la muestra se deben filtrar antes del análisis. la CLGR es otra importante técnica de separación utilizada comúnmente en el análisis de drogas forense. el tamaño de las partículas. Fase estacionaria: Longitud de la columna: Diámetro de la columna: Columna preliminar: Temperatura de la columna: Tampón de la fase móvil: 33 . Los estándares de trabajo deben estar comprendidos en el intervalo lineal del detector y aproximadamente 80%-120% de la concentración objetivo.Lecturas recomendadas No se dispone de una fuente de bibliografía única para la interpretación del espectro de masas de los ETA. 50 mM fosfato de sodio monobásico ajustado con ácido fosfórico). Es conveniente realizar una calibración de puntos múltiples pero también es aceptable un método estándar único. el tamaño de los poros y la carga de carbono se deben examinar antes de la selección final de la columna. también está disponible en un CD-ROM. que en conjunto presentan datos razonablemente amplios. Hans H. a continuación sólo se dan directrices. pero hay varias fuentes generales buenas. La longitud y el diámetro de la columna. Para facilitar la preparación de muestras y obtener una mejor reproducibilidad y estabilidad.2 (por ejemplo. escaneo rápido o longitud de onda variable. longitud: 25 mm. Las soluciones madre y estándar se deben preparar a partir de estándares de referencia. La ONUDD también tiene una colección limitada de espectros de masas relativos a los principales ETA. fase inversa C8 o C18 15-35°C (se recomienda enérgicamente controlar la temperatura en entornos sin termostato) Tampón de fosfato pH 2. UV 200-210nm (utilizar también 280-290nm para las fenetilaminas con metilendioxi sustituido) C8 o C18 con partículas de 5 µm o más pequeñas < 30 cm < 5.05-0.50 mg/ml. CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE GRAN RENDIMIENTO (CLGR) Además de la CG. Poisons. La colección se puede consultar por la Internet o. previa petición. Condiciones de trabajo Detector: Detector de ordenación de diodos. Mass Spectral and GC Data of Drugs. Wiley. La columna más universal y versátil es una columna de sílica gel ligada con octadecilo (C18). MÉTODO Preparación de muestras y soluciones estándar de ETA Disolver una cantidad apropiada del estándar o la muestra en la fase móvil. por ejemplo: Karl Pfleger. Para los picos de los residuos.0 mm Diámetro: 2-4 mm. Pesticides. Dado que hay una gran variedad de fases estacionarias y móviles a disposición del analista. E. Armin Weber (2000). Pollutants and Their Metabolites: Parts I-IV. se pueden necesitar aditivos de fase móvil como sulfatos de alkilo o sulfonatos de alkilo o aminas.0-3. Maurer. apuntando a una concentración del componente activo entre 0. DeRuiter. E. 31. NY. RESULTADOS La identificación se realiza comparando el tiempo de retención del analito con el del estándar de referencia y. J. Cuantitación Se puede utilizar una calibración estándar externa o interna (se recomienda la calibración estándar externa especialmente si se utiliza un inyector basado en válvulas en modalidad de sobrecarga). sobre sulfatos de alkilo o sulfonatos de alkilo. si es posible. Valer. DeRuiter.. (1997). Chromatogr. J. o puede requerir ligeros ajustes de las condiciones de la CLGR. C. F. Chromatographic and Mass Spectral Methods of Identification for the Side-Chain and Ring Regioisomers of Methylenedioxymethamphetamine. Rapid Determination of anfetaminas by High-Performance Liquid Chromatography with UV Detection. La separación de los pares efedrina/seudoefedrina y norefedrina/ norseudoefedrina puede ser difícil.-L. 38. Giroud. Gas Chromatographic-Mass Spectrometric and Liquid Chromatographic Analysis of Designer Butanamines Related to MDMA.Modificador orgánico de fase móvil: Tasa de flujo: Volumen de inyección: Separación: Metanol o acetonitrilo entre 2% y 20% (con grupos alkilos más altos.. L. R. S. F. Chromatogr. Un orden de elución típico es el siguiente: norefedrina. cap. (1995). 329 a 337. y Clark. y Noggle. J. porque el aplastamiento del pico (disminución de la altura del pico) puede ocurrir como resultado del deterioro de la fase estacionaria. efedrina. J. 304 a 307. T. HPLC Quantication of Clandestinely Manufactured Mixtures of Amphetamine and Methamphetamine.. 0. MDA. Se recomienda el uso del área del pico para la cuantitación CLGR. I. Nueva York. 761. L. Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatographic Analysis of Drugs of Forensic Interest. Adamovics.71 a 78.. MDMA y MDEA. La especificidad del método es importante. F. Chromatogr. U. 33. se puedan requerir concentraciones orgánicas más altas). 34 ..0 ml/min 1-100 µl Se debe realizar un análisis isocrático o de gradiente referido a tiempos de retención de menos de 30 minutos. 51 a 132. y Veuthey. se pueden utilizar también escaneos fluorescentes. Malone. J.).. ya que siempre existe la posibilidad de que compuestos similares elucidan en el mismo tiempo de retención. Sci.. (1998). págs.. Lecturas recomendadas Aalberg. Marcel Dekker. En el anexo V se describe uno de método de CLGR validado para la cuantitación de ETA. (2000). C. (Ed. metanfetamina. A.S. J. Microgram. J. Se puede aumentar la especificidad de la detección utilizando métodos de detección fluorescente o de longitudes de onda UV múltiples.. págs. (1995). Sadeghipour. 4 en Analysis of Addictive and Misused Drugs.1-2. A. págs. págs. Rivier. Sci... J. utilizando múltiples longitudes de onda UV o detección por ordenamiento de diodos o escaneo rápido. Para los análogos con anillo sustituido como MDA. V. Sippola.. MDMA y MDEA. C. Noggle. págs. Clark. anfetamina. 328 a 337.. T.A. Lurie. R. haciendo que la altura del pico no sea adecuada para la cuantitación. la mezcla se imprime en un disco transparente delgado. (1997). A. Un enfoque similar. R. el material investigado se puede recuperar del disco de haluro para nuevos ensayos. especialmente cuando el analito es una sal clorhídrica (para eliminar el problema del intercambio de haluros). La desventaja evidente de este método es la interferencia del Nujol en el espectro. ESPECTROSCOPÍA INFRARROJA TRANSFORMADA DE FOURIER (FTIR) La espectroscopía infrarroja se utiliza mucho como método cualitativo. y desde hace también cuantitativo. J. El KCl y el KBr son igualmente apropiados. para la determinación y el análisis estructural de ETA.-L.137 a 143. KBr) y un disco similar colocado encima. o dejado en un horno y utilizado “cuando se necesite”. en que la muestra se dispersa en un haluro de potasio finamente molido (KBr o KCl) que se imprime en un disco delgado. La cantidad de Nujol añadido se ajusta para que la pasta final tenga la consistencia de una crema fina. El método de la pasta de Nujol requiere la mezcla de una muestra de polvo fino (2-3 mg) con una gota de Nujol (parafina líquida o perfluorinato alcano de cadena larga). Sensitive and Selective Determination of Methylenedioxylated Amphetamines by High-Performance Liquid Chromatography with Fluorimetric Detection. 35 . Chromatogr. 287 a 291. Analysis of Ecstasy with a Monolithic Reversed-Phase Column. págs. La película entre los discos de haluro no debe contener burbujas de aire. Proporciona más detalles sobre las características y usos prácticos para análisis de drogas de diferentes técnicas analíticas. Preparación de la muestra16 Los métodos preferidos para la preparación de muestras son la disolución de la muestra en un disolvente apropiado.. J. F. y ii) el disco de haluro de potasio por lo general se puede volver a analizar muchas veces si se lo almacena sobre un desecante. F. Se lo puede almacenar sobre un desecante fuerte (por ejemplo. y ii) diluir la muestra a fin de reducir al mínimo la absorción en el disco preparado. el KCI es ligeramente menos higroscópico y en general se lo recomienda en lugar del KBr. 787. K.Sadeghipour. Una técnica menos conveniente es la del método del disco de haluro. El método del disco de haluro17 consiste en golpear una muestra seca hasta obtener un polvo muy fino. la mayoría de los laboratorios forenses prefieren el método del disco de haluro por dos razones: i) los haluros de potasio son transparentes en IR en la denominada región de las huellas digitales ((2000-400 cm-1).. y luego moler la mezcla en un mortero de ágata. Asimismo. Esto puede ser importante en cualquier acción judicial subsiguiente. 17 Para sólidos. Ahora bien. y Veuthey. mezclar luego aproximadamente 1 mg del polvo de la muestra homogeneizado con 200 mg de haluro álcali molido y secado. págs. La pasta resultante se distribuye en un disco de haluro álcali (por lo general. Chromatographia. la técnica de la película delgada. Ahora bien. Tras la molienda. o su suspensión en una pasta aceitosa. (2003). 57.. El análisis puede ser particularmente útil para la clasificación rápida de tabletas y polvos de proporcionando indicaciones sobre la homogeneidad de las tabletas o la presencia de mixtos. Schneider. El KBr o el KCl que se utilicen deben ser de “pureza IR” y haber sido secado a 110ºC durante por lo menos una hora. pentóxido de fósforo) en un desecador. es importante i) reducir el tamaño de las partículas moliendo hasta una dimensión inferior a la longitud de onda analítica más corta (para evitar la dispersión). C. y Kovar. se 16 poco FTIR ETA. lotes Un manual separado complementa la serie de manuales de las Naciones Unidas sobre métodos recomendados. Filtrar. utilizando la técnica de la capa delgada en discos de KBr. Todas las fracciones se examinan por espectroscopía infrarroja con fines de identificación. reflectancia difusa ATR • Método de la reflectancia difusa El espectro de bases de ETA se registra utilizando muestras preparadas por los siguientes métodos: • Método de la película delgada • Tarjetas IR • Método directo. recoger el extracto y el concentrado utilizando un chorro suave de nitrógeno. Aislamiento de la droga pura de una muestra a) Aislamiento de la base libre del ETA Disolver 25-50 mg de la muestra en 1 ml de 0. el dispositivo “Golden Gate”) es un método relativamente nuevo para líquidos y sólidos. por ejemplo. filtrar. Dejar que una parte de la solución de cloroformo se evapore directamente en un disco de KBr y registrar el espectro infrarrojo de la base libre. El material insoluble se puede retirar luego de la pipeta. Lavar la muestra con dos partes de 1 ml de acetona y recoger la fracción de acetona. Después de secarla con aire. Dejar que la columna se vuelva a secar y luego enjuagarla con dos alícuotas de 1 ml de metanol y recoger la fracción de metanol. que no requiere de preparación de muestras. Inducir la cristalización. por ejemplo. Por último. El método ATR de diamante de reflexión simple (por ejemplo. por ejemplo. lavar la columna con dos partes de 1 ml de cloroformo y recoger la fracción de cloroformo. Separación física/recristalización selectiva 36 . el método de la célula de gas es un instrumento práctico para el análisis rápido de disolventes y algunos precursores de los laboratorios clandestinos. la reflectancia difusa ATR Métodos alternativos de preparación de muestras IR para la metanfetamina Método de extracción seca en serie Colocar 200 mg de muestra de metanfetamina en polvo en una pipeta Pasteur descartable con un tapón de lana de vidrio al final. Sin embargo. secar los cristales y analizar el espectro infrarrojo de la sal de ETA resultante utilizando uno de los métodos que se describen a continuación.utiliza también para el análisis directo de bases libres de ETA. Agregar 4-5 gotas de hidróxido de amoníaco y extraer con cloroformo. MÉTODOS El espectro de las sales del ETA se registra utilizando muestras preparadas por los siguientes métodos: • Disco de haluro KBr (1-1.5%) • Método del aceite de Nujol • Método directo. b) Aislamiento de las sales del ETA Triturar una porción de 20-50 mg de la muestra con 1-2 ml de cloroformo. que por lo general son líquidos aceitosos. Pasar la capa de cloroformo por una columna pequeña tapada con un algodón para eliminar las partículas en suspensión.1N de ácido tartárico. el espectro obtenido con este método no se puede comparar directamente con los obtenidos con cualquiera de los métodos descritos más arriba. van der Maas J. págs. Pseudoephedrine and Methamphetamine Mixtures. o de una biblioteca espectral. pág. editado por Willis. (1974). Chichester. R. Separation and Identification of Ephedrine. concentrar hasta aproximadamente la mitad del volumen original y añadir éter dietílico para precipitar la metanfetamina. metanfetamina y otros ETA en muestras incautadas sometidas a análisis De conformidad con el Convenio sobre Sustancias Sicotrópicas de 1971 de las Naciones Unidas. secar y obtener el espectro IR (hidrocloruro de metanfetamina). Añadir éter dietílico al precipitado de metanfetamina. Journal of the Clandestine Laboratory Investigating Chemists Association (JCLIC). R. J. John Wiley & sons. (1993). Separation and identification of amphetamine or methamphetamine in combination with ephedrine or caffeine. R. B. G. R. secar y recuperar con fines de examen (hidrocloruro de efedrina). H. Una mezcla con contenido de metanfetamina. por lo tanto. 37 . ANÁLISIS DE ISÓMEROS ÓPTICOS La mayoría de los ETA tiene un átomo de carbono asimétrico resultante en un par de enantiómeros para cada ETA. Filtrar. H. Dry Serial Extraction of Illicit metanfetamina Powders For the Identification of Adulterants and Diluents By Infrared Spectroscopy. Disolver la otra mitad de la muestra en 2 ml de cloroformo y añadir 1.). Lecturas recomendadas (métodos alternativos de preparación de muestras IR para la metanfetamina) Ely. y Berry. 21 a 25.Los procedimientos que se explican a continuación funcionan bien para el tipo de mezclas indicado. Stinson. 1987 G. Microgram. A. y concentrar la solución hasta aproximadamente la mitad del volumen original. 7(4). 3(1). M. Filtrar... no funcionan tan bien con hidrocloruro de anfetamina. Lecturas recomendadas Laboratory Methods in Vibrational Spectroscopy (third ed. RESULTADOS La identificación se logra comparando el espectro del analito con el del estándar de referencia. secar y obtener el espectro IR (hidrocloruro de seudoefedrina). S. A. secar y obtener el espectro IR (hidrocloruro de metanfetamina). 51. Evaporar la solución original hasta que se seque y dividirla en dos partes iguales. En función de la fuente. Filtrar. Oulton. se pueden encontrar formas enantioméricas diferentes de anfetamina. Una mezcla con contenido de metanfetamina Mezclar en un vaso de precipitación 25 mg de una muestra con 20 ml de una mezcla 2:1 de cloroformo y hexano. Disolver la mitad de esta muestra en 20 ml de una mezcla 2:1 de cloroformo y hexano. (1997). y Miller. 289 a 296. seudoefedrina y efedrina Colocar 100 mg de muestra en un pedazo de papel de filtro y lavar con 40 ml de una mezcla 3:1 de cloroformo y hexano.6 ml de hexano para precipitar la seudoefedrina. págs. S. Lavar la parte insoluble con cloroformo. 30(12). normalmente se utiliza la técnica de la “gota en suspensión”. Por ejemplo.y la l-anfetamina dan microcristales idénticos. y añadir una o dos gotas del reactivo de volatilización (solución de NaOH al 5%). Esta técnica requiere una placa con cavidades. que produce cristales diferentes. así como la mezcla racémica (dl) de anfetamina y metanfetamina. que emerge de la solución como un vapor. pero una mezcla de cantidades iguales de ambos isómeros ópticos (mezcla racémica) tiene un punto de fusión más bajo (130-135°C). una cubierta de vidrio. Esto libera la amina libre en forma de base libre volátil. El reactivo reacciona entonces con el vapor de aminas presente en la cavidad. el reactivo de ensayo y un reactivo de volatilización. Punto de fusión La comparación del punto de fusión de la mezcla de la muestra con el estándar de referencia enantioméricamente puro es un ensayo rápido y sencillo para distinguir isómeros ópticos. En general. que se asemejan a largas varillas amarillas o agujas ásperas y largas hojas angostas.y I-). A tal fin. supra. El racemato de dl-anfetamina da al principio gotas “aceitosas” y luego cristales escamosos coloreados. se pueden utilizar los siguientes procedimientos analíticos. 2.y l-hidrocloruro de metanfetamina tienen el mismo punto de fusión (170-175°C). Estos cristales se forman en general después de la inversión.o l-anfetamina. Ensayos de microcristales (Véase también la sección sobre el ensayo de microcristales como ensayo presuntivo. están sometidos a fiscalización.y l-anfetamina Si el ensayo explicado más arriba indica que la muestra es de d. En los países en que la legislación nacional exige la identificación del isómero óptico específico presente. Ensayos de microcristales para isómeros ópticos de anfetamina Ensayo del cloruro de oro [HAuCl4 al 5% en H3PO4] Transferir una pequeña cantidad del polvo de la muestra a la depresión de la placa de cavidad. Con respecto a la mayoría de los ETA con anillo sustituido.) Para los ETA. los puntos de fusión se deben determinar utilizando muestras secas.cada isómero óptico ( d. d. Los isómeros ópticos difieren en cierta medida en cuanto a la actividad farmacológica y en ciertos países están sujetos a diferentes medidas de reglamentación. o ensayo de volatilidad. volver a invertir la placa del reactivo y examinar los cristales en el reactivo o en el borde de la cuota de reactivo. Este método requiere muestras bastante puras. y los enantiómeros genéricos se incluyen mediante una frase genérica. En el anexo III se describen los reactivos de ensayo y de volatilización. sólo los racematos están sometidos a fiscalización. Transferir inmediatamente una gota del reactivo de ensayo (HAuCl4 al 5% en H3PO4) a la placa de vidrio e invertir y cruzar la placa sobre la cavidad de muestra. RESULTADOS La d. Distinción de d. Tras un intervalo apropiado. añadir parte del polvo de la muestra desconocida a una pequeña cantidad de sal de d-anfetamina conocida en una cavidad y a una pequeña cantidad de 38 . se debe determinar cuál está presente. La forma de distinguirlas es formar el racemato. 1. Microcrystal Test. MDMA La MDMA ensayada con HAuCl4 al 5% en H3PO4 da cristales blancos en forma de “X” de doble refacción con conglomerados en forma de estrella bajo luz polarizadora. La dl-Metanfetamina da varillas naranjarojizas características con extremos sesgados. Nota: Dado que la MDMA es muy sensible a la reacción con el reactivo de cloruro de oro. 39 . El ensayo del cloruro de oro es también útil para los precursores efedrina y seudoefedrina. 1996 (presenta una introducción amplia a la técnica de los ensayos de microcristales. La mezcla que sea (d+l) dará los cristales escamosos del racemato descritos más arriba. Microgram.sal de l-anfetamina en otra. Estos cristales son similares a los de la d. Wiley-Interscience. Metanfetamina La d-metanfetamina ensayada con HAuCl4 al 5% en H3PO4 da hojas “V” con un lado más corto que el otro. págs. RESULTADOS La d-metanfetamina da agujas largas de color naranja.. Repetir el ensayo. Los extremos de la hoja sólo están afilados en un lado.C. Japón.l-metanfetamina con cloruro de oro. e incluye fotografías de resultados de ensayo de microcristales de 39 ETA y sus precursores). sólo basta una parte muy pequeña para obtener buenos resultados. que forman extremos en forma de cigarros característicos (afiladas a ambos lados en el extremo de la hoja). y puede ser útil para la nicotinamida y la cafeína. Lecturas recomendadas Fulton. La mezcla que sea (d+d) o (l+l) producirá largas varillas amarillas. Modern Microcrystal Tests for Drugs. (1986). Ruybal. o más lentamente si la muestra se diluye o el ensayo se realiza utilizando la técnica de la gota en suspensión La l-metanfetamina da hojas cruzadas singulares y hojas “V”. Éstas se desarrollan muy rápidamente si el ensayo se realiza directamente sobre la muestra seca. Nueva York Ōno. C. Microcrystalline test for MDMA. R. Se deben utilizar muestras de referencia de estas sustancias para obtener cristales de referencia.l-metanfetamina forma hojas singulares y “X”. 79 y 80. 19 (6). pero con un poco de práctica se pueden diferenciar. Ensayos de microcristales para isómeros ópticos de la metanfetamina [H3BiI6 en H2SO4] Utilizar el procedimiento de la gota en suspensión descrito más arriba para la anfetamina pero utilizando el reactivo de ensayo H3BiI6 en H2SO4 (véase el anexo III en relación con la preparación del reactivo). M. La d. que a veces tienen forma de “cuchillo”. igual que un cuchillo. etcétera. (1969). MÉTODO La preparación (extracción) de muestras para análisis por CG quiral es igual a la de la CG normal (véase supra). The separation of methamphetamine and procaine utilizing the volatility test / hanging drop method for amphetamines. utilizando fases estacionarias quirales y/o aditivos quirales como tampón de corrida (EC).5°C/min a 175°C. La fase estacionaria quiral más común utilizada para los ETA es la betaciclodextrina hecha base.25 micrones.25 mm x 30m x 0. o métodos indirectos. la sensibilidad. 704 a 714. La elección del método depende del alcance del análisis y la disponibilidad de equipo y otros instrumentos de laboratorio. Técnicas instrumentales Hay varios métodos instrumentales directos (CG quiral. i. ya que ninguno ofrece una solución universal para la separación quiral. Los métodos directos e indirectos se deben considerar como complementarios.American Society of Analytical Chemistry: AOAC Official Methods of Analysis (1984). película de 0. 3. Los métodos instrumentales directos permiten analizar los isómeros ópticos sin derivatización. como el poder de separación. 148. luego 1. Técnicas de CG La cromatografía de fase gaseosa es una técnica probada de separación quiral. empleando columnas capilares quirales. mantener durante 1.2 ml/min 120°C durante 1 min. Se puede realizar utilizando métodos directos. pág. El uso de columnas aquirales normales facilita la integración de las separaciones quirales en programas de análisis de rutina. a) Cromatografía en fase gaseosa quiral (método directo de CG) Las fases estacionarias disponibles en el comercio para la separación de isómeros ópticos por CG se producen normalmente añadiendo macromoléculas de ciclodextrina a una fase estacionaria común. Condiciones de trabajo con CG Columna: Gas portador: Temperatura del horno: Volumen de inyección: Temperatura del inyector: Temperatura del detector: Dexcst. Los métodos indirectos se basan en la derivatización del analito con un reactivo quiral para producir dos diastereoisómeros diferentes con propiedades físicas y químicas diferentes que se pueden separar en una fase estacionaria aquiral. J. Microgram. W. (1981). la eficiencia de la derivatización y sus compatibilidades con la técnica instrumental.5 min 1 µl 190° C 280° C 40 . Las ventajas y desventajas de ambos criterios se deben examinar con cuidado. Los métodos que emplean la derivatización quiral son normalmente menos costosos y no requieren columnas o equipo especializado. págs. que logran la separación utilizando reactivos quirales y fases estacionarias aquirales. CLGR o EC) y métodos de derivatización indirectos que se pueden utilizar en el análisis de los isómeros ópticos de ETA. 14 (10). La elección del reactivo quiral depende de varios factores. o equivalente Helio a aprox. 1. Stall. En el anexo VII figuran detalles de la preparación de muestras de ETA utilizando ácido de Mosher para las derivatizaciones quirales. págs. Assoc. 1443.. cloruro de ácido de Mosher’s. J. Chromatogr.. J. y Ku. pág. Forensic Sci. Las condiciones de trabajo con CG para análisis cualitativos (véase más arriba) también se pueden utilizar para el análisis de derivativos quirales. H.. W. Chem... págs. MDA. 2180. con excepción de la efedrina y la seudoefedrina. DOB. y Fitzgerald. Ku. T. (1972). Esta referencia incluye la derivatización de enantiómeros de anfetamina. J. A. (1983). 53. propilhexedrina y PMA. El ácido de Mosher y el ácido clorhídrico dan lugar a una derivatización cuantitativa de la mayoría de las aminas. vol. y Kim. lo que da lugar a picos más amplios. 41 . McKibben. y otros (1998). Separation and Identification of Drug Enantiomers via N-TFA-(S)-Prolyl Chloride Derivatization. Chem. efedrina. H. págs. también conocido como TFAP-Cl). DOM. Chromatogr. Tsay. W... 285. H. págs. J. Stereochemical separation and configural assignment by gasliquid chromatography of N-trifluoroacetyl-l-prolyl amides of asymmetric l-fenilisopropyl-amines... B. (1992). metanfetaminas. J. W. W. Se pueden utilizar como reactivos para análisis de CG y CLGR. W. Ku.o S(-)-α-metoxi-a-(trifluorometil)-ácido fenilacetico]. seudoefedrina.4. y N-trifluoroacetil1-prolil cloruro (TPC. 96.6-TMA. 3. 61 a 70. M. 0. Anal. Journal of the Clandestine Laboratory Investigating Chemists Association.. Cody. Forensic Sci. Liu. J. alkilsulfonatos. P. W. Approaches to drug sample differentiation. Determination of enantiomeric N-trifluoroacetyl-l-prolyl chloride amphetamine derivatives by capillary gas chromatography/mass spectrometry with chiral and achiral stationary phases.. págs. Los más populares son el ácido de Mosher [R(+).. J. 39 a 48. T. 21 a 20. M. Separation and characterization of amine drugs and their enantiomers by capillary column gas chromatography—mass spectrometry. Fitzgerald. J. 69. cloroformatos. Methamphetamine—properties and analytical methods of enantiomer determination. H. MDMA. incluidas las efedrina. 77 a 95. T. 580.5-TMA. (1992). Él empleo de nitrógeno como gas portador requiere tasas de flujo más bajas (aprox. Lecturas recomendadas Beckett. (1981). b) Derivatización quiral (método de CG indirecto) Se pueden preparar diastereoisómeros de ETA utilizando diferentes reactivos como acilcloruros. III: A comparative study of the use of chiral and achiral capillary column gas chromatography/mass spectrometry for the determination of methamphetamine enantiomers and possible impurities. 2. D. pero hay que ensayarlas para la separación óptima de compuestos quirales. P. Jirovský.Nota: Se pueden utilizar otras condiciones de trabajo con la CG. 66.4. isotiocianatos. 27 (1). (1982). Off Anal. pág.. Liu. Int. Liu. Se presta mejor al análisis por CG. J. y Testa.8 ml/min) para la velocidad óptima. 2 (1). Determination of methamphetamine enantiomer ratios in urine by gas chromatography-mass spectrometry. S. Se sabe que el TPC produce de derivativos estables de casi todos los ETA. . Sellers. S. págs. R. Pastor-Navarro. Shirota. T. 3015. Automated determination of amphetamine enantiomers using a two-dimensional columnswitching chromatographic system for derivatization and separation. Off Anal. Effect of the Eluent on Enantiomer Separation of Controlled Drugs by Liquid Chromatography-Ultraviolet Absorbance Detection-Electrospray Ionisation Tandem Mass Spectrometry using Vancomycin and Native β-Cyclodextrin Chiral Stationary Phases. 8. iii. Rizzi. R. C. y Seveik. Methamphetamine and Ring Substituted Amphetamines by Means of a βCyclodextrin-Chiral Stationary Phase. L.. Shin. Technol.. (1994). Forensic Sci. y Liu. y Clark. Gaines.. Chem. E. M. aunque esos análisis siguen siendo costosos. y el empleo de fases estacionarias quirales. T. Effect of Some Parameters on Enantiomer Separation of Ephedrine. Wells. Herráez-Hernández. and hidroxiamines and quantification of the enantiomers by capillary GLC/MS. O. Kaslauskas. Campins-Falco. y Veuthey. (1996).. incluida la derivatización con reactivos quirales. Suzuki.. Cladrowa-Runge.. Liq. Duffitt. Ogawa. 729. High Performance Liquid Chromatographic Analysis of Enantiomeric Composition of Abused Drugs... En el comercio hay una variedad de columnas para CLGR quirales. págs. (1986). Sadeghipour. (1999). F. págs. Y. 91 a 99. Anal. 97 a 101. & Rel.. R. (1996). J. R. D. Chromatographia. phenol alkylamines. J. Técnicas de EC La electroforesis de zona capilar es muy ventajosa para el análisis quiral ya que permite la separación sumamente eficiente de enantiómeros sin derivatización ni columnas especiales 42 . A.. 319. P.. pág. 92 a 108.. ii.. Rev. págs.Moshers acid.. Chromatographia. pág. la incorporación de aditivos quirales en la fase móvil. págs. J. DeRuiter. C.. 47. K. D. Técnicas de CLGR Para la CLGR se han utilizado varios criterios. M. M. 3173 a 3191. A. (1970). 285 a 290. H. J. K. 123. J. Stereospecific derivatization of amphetamines. Analyst. D. K. Assoc. Jirovsky. H. (2004). pág. Methamphetamine and Selegiline using HPLC with β-Cyclodextrin Stationary Phase. Chromatography B. El comportamiento de las fases estacionarias quirales se ha mejorado mucho en los últimos años. Makino. H. Anal. G. Chrom. Enantiomeric Separation of Four Methylenedioxylated Amphetamines on β-Cyclodextrin Chiral Stationary Phases. 1643 a 1648. F. Hirz. 1033. págs. 19. R. (1996). L.131 a 137. A. 16 Seminario de Colonia sobre análisis de presencia de drogas.. Noggle. S. Chromatogr.113. M. Direct analysis of methamphetamine enantiomers in urine with strong cation exchange pre-column and bcyclodextrin-bonded semi-micro column. págs. Shirota. J. (1998). Chem. Pihlainen. Lissi (AGAL). GLC determination of the optical isomers of anfetamina. G. 58. y Kostiainen. L. R. Liquid Chromatographic Determination of the Enantiomeric Composition of Methamphetamine Prepared from Ephedrine and Pseudoephedrine. y Jonsson. y Donike. Trouth and A. Porras-Serrano. 39. (1998). J. 68. Lecturas recomendadas Lemr. Chem. Enantiomeric Separation of Amphetamine. R. 53. S. Lurie. se prepara un disco de KBr con los cristales y se adquiere el espectro infrarrojo. El cloruro de metileno se seca sobre sulfato de sodio anhidro y se concentra hasta aproximadamente 2 ml. Electrophoresis. págs.. 1580 a 1591. Lecturas recomendadas Iwata.. A. S. H. Central Composite Design in the Chiral Analysis of Amphetamines by Capillary Electrophoresis. 25. Y. T. Técnicas IR Aunque los enantiómeros tienen el mismo espectro infrarrojo. Después de secada. F. RESULTADOS La identificación de los isómeros ópticos se logra comparando el espectro resultante con uno de los obtenidos a partir de los estándares de referencia puros. LeBelle. por ejemplo. T. El espectro IR de las sales de isómeros ópticos de anfetamina con ácido mandélico figuran en una edición anterior de manual de las Naciones Unidas sobre “Métodos recomendados para el ensayo de anfetamina y metanfetamina” (ST/NAR/9)... The Use of Highly Sulfated Cyclodextrin for the Simultaneous Chiral Separation of Amphetamine-type Stimulants by Capillary Electrophoreis. R. (1997). E. Klein.. Anal. T. Kishi. iv. Lurie.(capilares). Chiral Resolution of Cationic Drugs of Forensic Interest by Capillary Electrophoresis with Mixtures of Neutral and Anionic Cyclodextrins. K. Capillary Electrophoreis Analysis of a Wide Variety of Seized Drugs Using the Same Capillary with Dynamic Coatings. Veuthey....y l-anfetamina. Hays. la espectroscopia IR se puede utilizar para distinguir los enantiómeros de un compuesto determinado después de convertirlos en los correspondientes diastereómeros. El procedimiento se repite utilizando isómeros conocidos ópticamente puros de los ETA correspondientes. se pueden acoplar con d-ácido mandélico para formar dos diastereómeros. la solución se filtra por succión. P. Las bandas de IR en la región de 800-1600cm-1 proporciona la información analíticamente más diferenciada. (2004). (1994). como todas las bases orgánicas. págs 1328 a 1334. 18. Varesio. Dal Cason. 43 . Longeray. Gauvrit. d-anfetamina-d-mandelato y lanfetamina-d-mandelato.. I. I. págs. Electrophoreis. Lanteri. Chem.. Los datos se pueden consultar en la página web de la Sección de Laboratorio y Asuntos Científicos. MÉTODO Se hace básica una solución acuosa de sal de ETA (10-50 mg) y se extrae el ETA en cloruro de metileno. se utilizan normalmente aditivos quirales como tampones de corrida (como hidroxil-propil beta-ciclodextrin).. I. A. varias gotas a la vez. K. P.. Brenneisen y R. S. J. Para la separación de ETA. se pueden hacer reaccionar fácilmente con ácidos orgánicos quirales para formar diastereómeros. 23. T. Garcia. J. y los cristales se lavan con una pequeña parte de cloruro de metileno. Y. págs. 66. (2002). L. hasta que la solución de ETA se neutraliza (papel pH). Kanamori.. 4019 a 4026... R. Se añade una solución saturada de d-ácido mandélico en cloruro de metileno.. Weinberger. Los ETA.. P. Electrophoresis. que tiene un espectro IR diferente. Las d. y Lurie. 931 a 937. y Parker. Inoue. R. M. Se deja cristalizar la sal de d-mandelato-ETA. Lecturas recomendadas Chappell. Proceedings of the American Academy of Forensic Sciences. 42 (1970).S. 755 a 760. (1998). 1459. A novel infrared method for the determination of the enantiomeric composition of methamphetamine salts. Chappell. 122. 4. J. J. Heagy. 32. Infrared method for distinguishing optical isomers of amphetamine. 44 . pág.S. (1970). Analyst. J. Analytical Chemistry. (1997). Infrared discrimination of enantiomerically enriched and racemic samples of methamphetamine salts. OTRAS TÉCNICAS ANALÍTICAS PARA EL ANÁLISIS DE ETA Hay otras técnicas analíticas adecuadas para la identificación forense y/o la cuantitación de ETA. CG-SPME y CG-FTIR porque constituyen opciones específicas atractivas para el análisis de ETA. 45 . el espectro integrado y la pauta de las señales de protones aromáticos permite distinguir unos de otros. La RMN permite al analista distinguir inequívocamente entre diferentes derivativos de anfetamina con anillo sustituido. Registrar el espectro de esta solución que contiene el ETA en forma de sal.VII. Aunque ciertas pautas de sustitución se asemejan entre sí en el área correspondiente a los protones de la cadena lateral alkil. requiere instrumentos eficaces que proporcionen la información estructural necesaria para su diferenciación. Los datos se pueden consultar también en la página web de la Sección de Laboratorio y Asuntos Científicos. A continuación se describen brevemente cuatro técnicas cualitativas: RMN. “Métodos recomendados para el ensayo de anfetamina y metanfetamina” (ST/NAR/9) y “Métodos recomendados para el ensayo de los derivados anfetamínicos ilícitos con anillo sustituido” ((ST/NAR/12). por lo que el analista debe remitirse a un manual complementario de carácter general sobre técnicas analíticas. Si hay materiales insolubles. especialmente ETA con anillo sustituido. entre ellas: • Electroforesis capilar (EC) • Cromatografía en fase gaseosa — espectroscopía infrarroja transformada de Fourier (CG-FTIR) • CL-EM y CG-EM • Espectroscopía casi infrarroja (NIR) • Espectroscopía de resonancia magnética nuclear (RMN) (cualitativa y cuantitativa) • FTIR cuantitativa • CCD cuantitativa • Espectroscopía FTIR Raman • Cromatografía en fase gaseosa-microextracción en fase sólida (CG-SPME) La descripción de la mayoría de estas técnicas escapa al alcance del presente manual sobre métodos recomendados para el análisis de ETA. Comparar el espectro de la sustancia desconocida con el espectro de referencia. transferir directamente el supernatante a un tubo de RMN. TÉCNICAS DE RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR 1H (RMN) La disponibilidad de un gran número de isómeros posicionales de ETA estructuralmente relacionados. que se registró en un instrumento de transformación de Fourier a 90 MHz utilizando un ángulo de 18º (1 µsec) sin demora tras la adquisición de los datos. El espectro de RMN de referencia del ETA seleccionado figura en una edición anterior de los dos manuales de las Naciones Unidas relativos al análisis de ETA. EC.5 ml de CDCl3 y registrar el espectro de la base libre. Aunque se trata de un poderoso instrumento para la identificación de análogos. sus características y sus usos prácticos para el análisis de drogas. MÉTODO Disolver unos 20 mg de la muestra de la droga en 1 ml de D2O. en caso contrario. es decir. Liberar la base libre del ETA in situ añadiendo 20-30 mg de K2CO3 sólido y 0. centrifugar. aun en presencia de diluyentes y otros adulterantes. A. el costo de la espectroscopía de RMN y la experiencia técnica necesaria impide su aplicación en gran escala a los análisis de rutina. ). 761 a 771.. Durante el muestreo. Rothchild. P. lo que confiere mayor rapidez al análisis. igual que la CLGR.. El empleo de capilares revestidos dinámicamente constituye una importante mejora en la precisión. T.. (1999). S. Forensic Sci.. 25. I.. (2001). Sahai... Además... CROMATOGRAFÍA EN FASE GASEOSA — MICROEXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA (CG-SPME) La SPME (microextracción en fase sólida) es una técnica de preparación de muestras libres de disolventes. Gough (ed. Wiley & Sons Ltd.. MDA. 345 a 352. A. C. J.and two-dimensional proton and carbon13 NMR studies of procaine hydrochloride: computational studies of procaine and its conjugate acid. 44 (4). B. D. Spectroscopy Letters. F. y Meyers. A. o que se puede utilizar para análisis (de trazas) de soluciones acuosas que contienen ETA. el enfoque de los capilares dinámicamente revestidos puede facilitar el análisis quiral rápido de una muestra utilizando el mismo capilar y el mismo vial de muestra pero con una corrida de tampón diferente.. Analysis of 3. Conn C. H. Garcia. ELECTROFORESIS CAPILAR (EC) La EC. 36 (1 & 2). S. 46. págs. Analysis of Illicit Amphetamine Seizures by Capillary Zone Electrophoreis. K. la eficiencia de los picos y/o los tiempos de separación para los compuestos de ETA en comparación con métodos semejantes que utilizan capilares no revestidos. Chew. Dawson. Lurie. P. J.. S. y Parmentier. Forensic Sci. A. Robertson J. págs. A. P. S. The use of Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy for the detection and quantitation of abused drugs. J. En contraste con la CLGR. McKibben. I. el revestimiento de fibra absorbe los compuestos de la fase gaseosa en la cabeza. que se puede utilizar para análisis de cabeza sobre soluciones o directamente sobre polvos de ETA. Lee G. no requiere pasos de derivatización o extracción y. 292. MDEA and Cocaine using Capillary Electrophoresis. por lo tanto. T. J. la EC ofrece un mayor poder de resolución para el análisis de estos solubles. Electrophoresis. A.. Forensic Sci. (2002).. es más conveniente que la CG para el análisis de compuestos de ETA. Amphetamine. R. MDMA. C. L. M. en: The analysis of drugs of abuse. Hays. A. J. Chromatogr. (2003). V. págs 1580 a 1591.. 35 a 42. (1991). Identification and quantitation of gamma-hidroxibutyrate (NaGHB) by nuclear magnetic resonance spectroscopy.. 979. 48 (2). B. M. (2004). A. págs. La fibra está revestida con una fase polimérica como las que se utilizan en las columnas capilares. A. y Weinberger R. G. 1025 a 1032. y Parker. Craig D. Hays.. Kannangar G. Bethea. Lecturas recomendadas Lurie. Identification of heroin diluent: one. Pellegrini. R. J. P. Use of Dynamically Coated Capillaries for the Routine Analysis of Methamphetamine. Capillary Electrophoreis Analysis of a Wide Variety of Seized Drugs Using the Same Capillary with Dynamic Coatings. o directamente 46 . K. En el anexo VI se incluye un método de EC para la cuantitación de ETA seleccionados y para la metodología de diferenciación de isómeros ópticos.4-methylenedioxy-N-methylamphetamine (MDMA) in “ecstasy” tablets by 13 C solid state nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy.Lecturas recomendadas Dawson. 284 a 296. Wilson M. S. Piette.. La SPME se realiza normalmente con una jeringa especial con una fibra de silicio colocada en la punta del pistón de la jeringa. (2003). C.. A. Forensic Science International.. Analytical Chemistry. por lo que es ideal cuando se la utiliza con columnas cortas de gran calibre. 169 a 177. La solución de la muestra se revuelve para aumentar el intercambio de los compuestos entre la solución y la fibra. págs. (1996). N. Quantitative and Qualitative analysis of MDMA.. Nagasawa. 1 a 7. aumentando de esta forma su volatilidad. Y. 47 . L. Wiley-VCH.. Screening procedure for 21 amphetamine-related compounds in urine using solid-phase microextration and gas chromatography-mass spectrometry. Marquet. K. Kojima. otra técnica compuesta. 161 a 166. MDEA.17. F. J. Yang.de la fase acuosa. Solid Phase Microextraction.. M. 2. págs. las aminas extraídas son desorbidas en forma térmica. Lecturas recomendadas Battu. Sin embargo. aunque con diferentes coeficientes de distribución. Uno de los más utilizados es una fibra revestida de polidimetilsiloxano (PDMS). Masti. El análisis de la muestra se realiza en la misma forma que se describió para el método del análisis de cabeza. 844A a 855A. que permiten análisis eficientes y rápidos. Fauconnet. P. Detection of amphetamines in urine using head space-solid phase microextration and chemical ionization selected ion monitoring. y Barni Comparini. En CLGR. 36.. como esta técnica es más bien insensible. G. En la situación de equilibrio. Sci. (1995). a fin de acelerar la extracción.. J. (1998)... Centini. La CG-FTIR con una célula de flujo ligera no tiene limitaciones en cuanto a la corriente de gas portador. Nueva York. vol. Hay muchos revestimientos de fibra diferentes disponibles para el análisis de ETA y otras sustancias. CROMATOGRAFÍA EN FASE GASEOSA — ESPECTROSCOPÍA INFRARROJA TRANSFORMADA DE FOURIER (CG-FTIR) La CG-FTIR. vol. Solid-Phase Microextraction. La muestra se puede también calentar para aumentar la cantidad de aminas en la fase gaseosa sobre la solución de la muestra. MA and amphetamine in urine by head-space/solid phase micro-extraction (SPME) and GC-MS. Chromatogr. Forensic Science International. 1. M. CEC y EC. la mezcla disolvente produce la elución de las aminas de la fibra.. Pawliszyn. D. (1994). y Pawliszyn. hay que insertar grandes cantidades de sustancia. J. A. 83. Una vez completada la extracción. Z. I. Zhang. Cuando la fibra se inserta en el punto calentado del inyector de CG. combina las ventajas de la técnica de separación por CG con la alta especificidad por analito de la IR. vol. E. No. págs. la jeringa se transfiere al instrumento de análisis escogido. los ETA más comunes se pueden analizar en menos de cinco minutos. la cantidad extraída de cada compuesto absorbido en la fibra es proporcional a su concentración en la solución. 66. Yashiki. 1997. págs. Por ejemplo. y Hara. y Lachâtre. Iwasaki. Método de análisis de cabeza Una muestra acuosa de ETA se hace alcalina para convertir las aminas en bases libres.. Lacassie. y el espesor de la película de la fase estacionaria es fundamental para no sobrecargar la columna. La jeringa con la fibra expuesta se coloca en el espacio superior sobre la solución y las bases libres del ETA son absorbidas en la fibra. J. T. T. Miyazaki. 76. Análisis (de trazas) de muestras acuosas La fibra se sumerge directamente en la solución de la muestra acuosa. vol. que se hizo alcalina a fin de liberar las bases libres de ETA. A. págs.53 mm ID 3-10 m >1. P.. Columna de calibre mayor 0.32-0. Riva del Garda. Proceedings of the Thirteenth International Symposium of Capillary Chromatography. Huertig.MÉTODO Preparación de muestras de ETA La preparación de la muestra es similar a la del análisis por CG cualitativo descrito más arriba. Eyem. Griffiths. (Ed). J. 1988.. con las siguientes modificaciones: Columna del CG: Longitud de la columna: Espesor de la película: Temperaturas de la línea de transferencia: Resolución espectral: RESULTADOS La identificación se realiza comparando el tiempo de retención y el espectro FTIR del analito con el de un estándar de referencia. métodos CG-FID or CG-EM). L. 26.. John Wiley & sons. W. Heidelberg. W. P. 1986. y Soine.0 µm 300°C 8 cm-1 48 . y Lundberg. H. H. en: Sandra. Lecturas recomendadas Bergkvist. pero las concentraciones del analito objetivo deben ser de 1-10 mg/ml. Condiciones de trabajo con CG Se pueden utilizar las condiciones de trabajo con CG indicadas más arriba (por ejemplo.. 13 a 16 de mayo de 1991. Duncan. R. Nueva York. Identification of Amphetamine Isomers by GC/IR/MS. J. Fourier Transform Infrared Spectrometry. Chromatogr. J. Sci. y de Haseth. 521 a 526. 1160 a 1170. ANFETAMINAS SIN ANILLO SUSTITUIDO R4 R1 N R3 R2 Nota: A menos que se indique específicamente.7dihidro-1H-purina-2.N-dimetil-N-(1-metil-2-feniletil)amina N-(1-metil-2-feniletil)hidroxilamina N-metil-N-(1-metil-2-feniletil)hidroxilamina (1S. los nombres no se refieren a enantiómeros individuales Nombre común Anfetamina Metanfetamina N-etilanfetamina Dimetilanfetamina N-hidroxianfetamina N-hidroximetanfetamina Catina Catinona Metcatinona Fenetillina Fenilpropilmetilamina (PPMA) Nombre de la IUPAC 1-metil-2-feniletilamina N-metil-N-(1-metil-2-feniletil)amina N-etil-N-(1-metil-2-feniletil)amina N.2S)-2-amino-1-fenilpropano-1-ol 2-amino-1-fenilpropano-1-ona 2-(metilamino)-1-fenilpropano-1-ona 1.3-dimetil-7-{2-[(1-metil-2-feniletil)amino] etil}-3.ANEXOS Anexo I. Estructuras químicas de ETA seleccionados Cuadro 3.6-diona N-metil-N-(2-fenilpropil)amina R1 H CH3 C2H5 CH3 H CH3 H H CH3 H CH3 R2 H H H CH3 OH OH H H H teofillina H R3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 R4 H H H H H H OH =O =O H CH3 49 . los nombres no se refieren a enantiómeros individuales Nombres comunes (acrónimos) 3.3-benzodioxol-5-il)-1-metiletil]-N-metilamina N-[2-(1.3-benzodioxol-5-il)propan-2-amina R1 H CH3 C2H5 CH3 H CH3 CH3 H H R2 H H H CH3 OH OH H H H R3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 C2H5 C2H5 CH3 R6 H H H H H H H H OCH3 50 .4-metilenedioxianfetamina (Nhidroxi-MDA.4-metilenedioxifenil)-2-butanamina (MBDB) 1-(3.N-dimetilanfetamina (MDDM) N-hidroxi-3.4-metilenedioxianfetamina (N-hidroxi-MDMA.4-metilenedioxi-N.Cuadro 4.3-benzodioxol-5-il)-1-metiletil]hidroxilamina N-[2-(1.3-benzodioxol-5-il)propan-2-amina N-[2-(1. N-hidroxitenanfetamina) N-hidroxi-N-metil-3. FLEA) N-metil-1-(3. MDEA) 3. tenanfetamina) 3.4-metilenedioxianfetamina (MMDA) Nombre IUPAC 1-(1.3-benzodioxol-5-il)butan-2-amina 1-(7-metoxi-1.Ndimetilamina N-[2-(1.4-metilenedioximetanfetamina (MDMA) 3.4-metilenedioxietilanfetamina (MDE.3-benzodioxol-5-il)-1-metiletil]-N-etilamina N-[2-(1.3-benzodioxol-5-il)-1-metiletil]-N.4-metilenedioxifenil)-2-butanamina (BDB) 5-metoxi-3. ANFETAMINAS SUSTITUIDAS CON METILENEDIOXI R1 N R2 R3 O O R6 Nota: A menos que se indique específicamente.3-benzodioxol-5-ilmetil)propil]-N-metilamina 1-(1.4-metilenedioxianfetamina (MDA.3-benzodioxol-5-il)-1-metiletil]-Nmetilhidroxilamina N-[1-(1. 4.5-dimetoxi-4-(metiltio)fenil]etanamina 2-[4-(etiltio)-2. los nombres no se refieren a enantiómeros individuales Nombres comunes (acrónimos) 4-bromo-2. STP) 4-bromo-2. Nexus) 4-metiltio-2.5-dimetoxifenil)propan-2-amina 1-(4-yodo-2.5-dimetoxifenetilamina (2C-T) 4-etiltio-2.5-dimetoxifenetilamina (2C-T-2) 4-propiltio-2. bromo-STP.5-Anfetaminas con anillo sustituido 1-(2.5-dimetoxifenetilamina (2C-C) 4-yodo-2.5-dimetoxifenetilamina (2C-I) 2.5-dimetoxifenil)etanamina 2.5-dimetoxifenil)etanamina 2-[2.4. BDMA) 4-cloro-2.5-dimetoxianfetamina (DOB.5-dimetoxifenil)propan-2-amina 1-(4-cloro-2.5-trimetoxifenil)propan-2-amina 1-(2.5-dimetoxifenetilamina (2CT-7) 4-cloro-2.5-dimetoxifenil)propan-2-amina H H H H H H CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 OCH3 OCH3 OCH3 OCH3 OCH3 OCH3 H H H H H H OCH3 CH3 Br Cl I C2H5 OCH3 OCH3 OCH3 OCH3 OCH3 OCH3 R1 H H H H H H R3 H H H H H H R5 OCH3 OCH3 OCH3 OCH3 OCH3 OCH3 R6 H H H H H H R7 Br SCH3 SC2H5 SC3H7 Cl I R8 OCH3 OCH3 OCH3 OCH3 OCH3 OCH3 2.5-dimetoxianfetamina (DOET) Nombre de la IUPAC 2-(4-bromo-2.5-dimetoxifenetilamina (2C-B.Cuadro 5.4.5-Fenetilaminas con anillo sustituido 51 .5-trimetoxianfetamina (TMA-2) 4-metil-2. OTRAS ANFETAMINAS CON ANILLO SUSTITUIDO R1 R8 R3 NH R7 R6 R5 Nota: A menos que se indique específicamente.5-dimetoxi-4-(propiltio)fenil]etanamina 2-(4-cloro-2.5-dimetoxianfetamina (DOM.4.5-dimetoxianfetamina (DOI) 4-etil-2.5-dimetoxifenil]etanamina 2-[2.5-dimetoxianfetamina (DOC) 4-yodo-2.5-dimetoxifenil)etanamina 2-(4-yodo-2.5-dimetoxifenil)propan-2-amina 1-(4-etil-2.5-dimetoxi-4-metilfenil)propan-2-amina 1-(4-bromo-2. 4.5-trimetoxifenil)etanamina 3-(4-metoxifenil)-1-metilpropilamina N-[2-(4-metoxifenil)-1-metiletil]-N-metil.4.5-dimetoxianfetamina (DMA) 3.5-trimetoxifenetilamina (mescalina) para-metoxianfetamina (PMA) para-metoximetanfetamina (PMMA) 2.Otras pautas de sustitución de anillos (fenetilaminas y anfetaminas) 3.5-dimetoxifenil)propan-2-amina 1-(3.4.amina 1-(2.5-trimetoxianfetamina (TMA) 4-metiltioanfetamina (4-MTA) 2-(3.5-trimetoxifenil)propan-2-amina 1-[4-(metiltio)fenil]propan-2-amina H H CH3 H H H H CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 H H H OCH3 H H OCH3 H H H OCH3 H OCH3 OCH3 OCH3 H OCH3 SCH3 OCH3 H H OCH3 OCH3 H 52 .4. al 5%).1 g de ácido gálico en 20 ml de ácido sulfúrico concentrado (= 0.7%). Ensayo de Chen Reactivo 1: Reactivo 2: Reactivo 3: Añadir 1 ml de ácido acético glacial a 100 ml de agua (= 1% (v/v) solución de ácido acético acuosa) Disolver 1 g de sulfato de cobre (II) en 100 ml de agua (= solución acuosa (v/v) de CuSO4 al 1%) Disolver 8 g de hidróxido de sodio en 100 ml de agua (= 2N solución acuosa de hidróxido de sodio). por ejemplo.Anexo II.9 g de nitroprusiato de sodio en 90 ml de agua (= solución acuosa de nitroprusiato de sodio al 1%) Mezclar 10 ml de solución de acetaldehído y 10 ml de etanol (= solución etanólica de acetaldehído (v/v) al 50%) Ensayo del sulfato Disolver 5 g de cloruro de bario dihidrato en 100 ml de agua (= solución acuosa de cloruro de bario aprox.5% (p/v) solución) Ensayo de Marquis Reactivo 1: Reactivo 2: Ensayo del fosfato Molibdato amónico: Ácido nítrico: Disolver 10 g de molibdato amónico [(NH4)6Mo7024 x 4H20] en 100 ml de agua (=solución acuosa (p/v) de molibdato amónico al 10%) Añadir cuidadosamente 10 ml de ácido nítrico a 90 ml de agua (= solución de ácido nítrico (v/v) al 10%) Añadir de 8 a 10 gotas (aproximadamente 0.25 ml) de solución de formaldehído al 37% a 10 ml de ácido acético glacial Ácido sulfúrico concentrado Ensayo del nitrato de plata (también conocido como el ensayo del cloruro) Disolver 1. 53 . Preparación de reactivos para ensayos cromáticos y de aniones Todos los reactivos se deben preparar de conformidad con un procedimiento establecido. el método de Clarke. Ensayo del ácido gálico Reactivo : Disolver 0.7 g de nitrato de plata en 100ml de agua (= solución acuosa de nitrato de plata al 1. Ensayo de Simon Reactivo 1: Reactivo 2: Reactivo 3: Disolver 2 g de carbonato de sodio en 100 ml de agua (= solución acuosa de carbonato de sodio al 2%) Disolver 0. Hay también otros procedimientos establecidos para la preparación de reactivos para ensayos cromáticos. que muestra una ligera variación en las recetas. 0 ml de agua. 54 . fino o cuadrangular a los términos básicos Fuente: Ōno. M.25 g de yoduro de potasio en 2. empleando los términos descriptivos que se indican a continuación.5 ml de solución de Bi(NO3)3 concentrada y 0. La solución madre de Bi(NO3)3 concentrada se prepara disolviendo 50 g de subnitrato de bismuto en 70 ml de una solución de HNO3 (diluida al 1:1 con agua) y completada a 100 ml con agua. Añadir 2. Japón. 0.. 1996 Reactivos Reactivo de ensayo — HAuCl4 en H3PO4 al 5% Disolver 1 g de ácido tetracloro áurico (HAuCl4. El reactivo de ensayo se puede mantener durante varios meses. Reactivo de ensayo — H3BiI6 in H2SO4 Disolver 1. Ensayos de microcristales Microcristales típicos clasificados Las formas típicas de los microcristales se pueden clasificar en nueve grupos.1 g de hipofosfito de sodio. Microcrystal Test.5 ml de una solución de H2S04 diluida al 1:7 con agua.4H2O) en 20 ml de una solución que contenga un volumen de H3PO4 concentrado y dos volúmenes de agua.Anexo III. se pueden añadir adjetivos como irregular. A fin de describir todos los tipos de microcristales. 55 .Reactivo de volatilización Preparar una solución acuosa de NaOH al 5%. Para la preparación de estándares de calibración para una calibración de 5 puntos. el método C requiere sililación. Se pueden mantener en una probeta cerrada en un refrigerador hasta un año. luego dejar reposar hasta que se separen las capas. preparar los diferentes niveles de la siguiente manera: c) d) 56 . Para la preparación de soluciones madre: a) b) Medir con exactitud unos 1000 mg del compuesto o los compuestos de interés en una probeta graduada de 1000 ml y completar hasta la marca con agua. Todos los reactivos deben ser de calidad analítica. El método B no requiere derivatización. Las soluciones estándar y muestras de ETA descritas y sus concentraciones están diseñadas para usar con columnas capilares y con los procedimientos que se describen más abajo. metanfetamina. Métodos de CG validados para la cuantitación de ETA seleccionados A continuación se proporcionan ejemplos de métodos de CG validados para el análisis cuantitativo de ETA seleccionados.4 g de PBA en una probeta graduada de 500 ml y diluir a volumen con cloroformo para obtener una solución estándar interna de 0. Preparación de la solución estándar interna (SI): fenilbencilamina (PBA) Pesar con exactitud 0. MDMA.3 a 0.0001 g. MDEA y MBDB. Utilizando una pipeta de Pasteur. Balanza analítica capaz de pesar con una exactitud de ±0. Esta solución estándar no se debe dejar reposar más de media hora antes de utilizarla en la calibración.6 a 0. Añadir exactamente 5 ml de cloroformo. Cromatógrafo de gas con detector de llama de ionización. Tapar y batir bien. transferir exactamente 5 ml de esta solución a un tubo de ensayo de vidrio con tapa de rosca de 20 ml. MDA. Preparación de soluciones estándar de ETA (soluciones de calibración de CG) Las soluciones madre estándar deben contener todos los compuestos de interés en concentraciones de aproximadamente 1000 mg/l.Anexo IV. El empleo de columnas y sistemas de CG alternativos puede requerir cambios tanto en la composición relativa como en las concentraciones de componentes individuales. específicamente los siguientes: anfetamina. Hacer básica a tornasol añadiendo unas pocas gotas de solución de amoníaco concentrada. Equipo y reactivos • • • • Contenedores de cristal graduados de grado B o mejores.8 mg/ml. Con una pipeta. transferir aproximadamente 1 ml de la capa de cloroformo a través de sulfato de sodio anhidro a un vial pequeño. Método de calibración de puntos múltiples sin derivatización MÉTODO B: El método B es un método validado para el análisis cuantitativo por CG de ETA no derivatizados. y luego dejar reposar hasta que se separen las capas. Utilizando una pipeta de Pasteur. Nota: La cantidad de muestra que se pese dependerá de la pureza anticipada en función del método de clasificación preliminar. a) Pesar exactamente una cantidad de muestra suficiente en una probeta graduada de 25 ml para obtener una concentración final de aproximadamente 0. Por ejemplo. 100 µl de la solución estándar interna y 800 µl de cloroformo en un vial de muestra de CG. b) Con una pipeta. Se reconoce que el empleo de instrumentos diferentes puede requerir ajustes en las condiciones de trabajo. si la pureza anticipada es del 40%.32mm x 30m x 0. Colocar 100 µl de la solución de muestra.2-1 mg/ml del analito. 0. transferir exactamente 5 ml de esta solución a un tubo de ensayo de vidrio con tapa de rosca de 20 ml.16 min 57 . Completar con agua hasta la marca.5µm Helio a aprox. Inyectar en el cromatógrafo de gas. c) d) Condiciones de trabajo con CG Para el análisis cuantitativo. Agregar exactamente 5 ml de cloroformo. transferir aproximadamente 1 ml de esta solución de muestra a través de sulfato de sodio anhidro a un vial pequeño. es preferible un CG equipado con un extractor de muestras automático.Preparación de estándares para una calibración de 5 puntos Nivel de calibración Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 Nivel 4 Nivel 5 Solución estándar de ETA (µl) 20 40 60 80 100 Solución SI (µl) 100 100 100 100 100 CHCl3 (µl) 880 860 840 820 800 Concentración aproximada de sal de ETA (mg/l) 20 40 60 80 100 Preparación de soluciones de muestras de ETA (muestra de ETA desconocido) En general. la cantidad de muestra debe ser aproximadamente 60 mg.25 min 13. 1.18 min 8. Columna: Portador de gas: Temperatura del horno: Volumen de inyección: Temperatura del inyector: Detector: HP-5. y mantener 1 minuto 1 µl 190°C Detector de llama de ionización a 270°C Tiempos de retención aproximados Anfetamina Metanfetamina MDA 7. pero específicamente para análisis cuantitativos. luego 10°C /min a 270°C. Cerrar y batir bien.2 ml/min (presión de cabeza 12 psi) 100°C durante 4 min. homogeneizar las muestras antes de iniciar cualquier ensayo o submuestreo. Hacer base a tornasol añadiendo unas pocas gotas de solución de amoníaco concentrada. si la pureza anticipada es de un 40%. seudoefedrina. 750 µl de cloroformo y 50 µl de BSTFA en un vial de muestra de CG. que frecuentemente no se resuelven con otro tipo de analitos y producen picos amplios. MÉTODO C: Método de calibración utilizando BSTFA como un reactivo de derivatización (calibración de puntos múltiples o de punto único) El método C es un método validado para el análisis cuantitativo por CG de ETA derivatizados. que contiene detalles sobre derivatización. añadir 100 µl de la solución estándar interna.33 min En los análisis de rutina. Hacer base a tornasol añadiendo unas pocas gotas de solución de amoníaco concentrada. Completar con agua hasta la marca. peso del analito en relación con el peso de la muestra). Por ejemplo. 40.93 min 14.5dimetoxianfetamina) y 2C-B El empleo del método C se recomienda específicamente para muestras de ETA que contienen efedrina y/o seudoefedrina. Cerrar y batir bien. Véase el anexo VII. b) Con una pipeta. para cada nivel de calibración. Preparación de la solución estándar interna (SI): fenilbencilamina (PBA) Igual que para el método B. El resultado se imprimirá automáticamente en un informe expresado como %w/w del analito como una base (es decir. Añadir cloroformo hasta completar 1 ml.58 min 15. supra. c) 58 . preparar los diferentes niveles igual que para el método B supra. específicamente los siguientes: efedrina. la cantidad de muestra debe ser aproximadamente 60 mg.17 min 16. y luego dejar reposar hasta que se separen las capas. 60. 80 y 100 µl de soluciones madre estándar de ETA. Nota: La cantidad de la muestra dependerá de la pureza anticipada en función del método de clasificación preliminar. Añadir exactamente 5 ml de cloroformo.92 min 18. transferir exactamente 5 ml de esta solución a un tubo de ensayo de vidrio con tapa de rosca de 20 ml.MDMA MDEA MBDB Fenilbencilamina (IS) Cafeína Ketamina Cálculos 13. transferir aproximadamente 1 ml de esta solución a través de sulfato de sodio anhidro a un vial pequeño.2-1 mg/ml de analito. Utilizando una pipeta de Pasteur. BDMA (4-bromo-2.33 min 17. Colocar 100 µl de la solución de muestra. de la siguiente manera: tomar 20. y 50 µl de BSTFA. Preparación de soluciones estándar de ETA (soluciones de calibración para CG) Para las calibración de puntos múltiples utilizando BSTFA. el programa informático realizará los cálculos una vez terminado el ensayo analítico. Preparación de soluciones de la muestra (muestra de ETA desconocido) a) Pesar con precisión la muestra en una probeta graduada de 25 ml hasta obtener una concentración final de aproximadamente 0. El resultado se imprimirá automáticamente en un informe expresado como %w/w del analito como una base (es decir. 59 .49 min 26.. luego 10°C/min a 270°C.16 min 23.32 mm x 30m x 0. y mantener 1 minuto 1 µl 190° C 270°C Tiempos de retención aproximados Seudoefedrina-TMS Efedrina-TMS Fenilbencilamina-TMS (SL) Cafeína Ketamina-TMS 2C-B-TMS 14. Condiciones de trabajo con CG Columna: Portador de gas: Temperatura del horno: Volumen de inyección: Temperatura del inyector: Detector (FID): HP-5.99 min 15.91 min Cálculos En los análisis de rutina. luego 5°C/min a 200°C.22 min 26. peso del analito en relación con el peso de la muestra). el programa informático realizará los cálculos una vez terminado el ensayo analítico.75 min 27. 1. 0.5 µm Helio a aprox.2 ml/min (presión de cabeza 12 psi) 100°C 4 min.d) Inyectar en el cromatógrafo de gas. 2)*. la fentermina y la MDMA.28 0.04 1.5 ml de ácido fosfórico concentrado en 4 l de agua de calidad para CLGR.09 1.93 1.00 (2. Tiempos de migración relativos aproximados Nicotinimida Fenetilamina Fenilpropanolamina Doxilamina Procaina Efedrina Seudoefedrina Anfetamina Acetominifen metanfetamina MDA Quinina Cloroquina Dimetilanfetamina 0. 90% (50 mM fosfato + 50 mM trietanolamina. USA) 150 x 3.55 0.Anexo V.2.12 60 .65 0.64 0.0 ml/min 210 nm *El tampón se prepara disolviendo 22.0 mm 35°C 5 µl 10% acetonitrilo. la metanfetamina. Diluir a volumen con metanol. CA.7 min) 1.56 0. Torrance. MÉTODO CLGR PARA LA CUANTITACIÓN DE ETA Preparación de muestras y soluciones estándar de ETA Solución estándar de ETA Pesar una cantidad apropiada de estándar de ETA en una probeta graduada hasta obtener una concentración final de aproximadamente 0.82 0. Añadir lentamente unos 25 ml de trietanolamina para ajustar la solución a un pH de 2. Método CLGR para la cuantitación de ETA seleccionados A continuación se examina un método validado para la cuantitación por CLGR de ETA seleccionados solubles.50 mg/ml. Diluir a volumen con metanol. tasa de flujo 1.00 1.62 0. incluidas la anfetamina. Condiciones de trabajo con CLGR Columna: Temperatura de la columna: Inyección: Fase móvil: Longitud de onda UV: 5 µm Luna C18 (Phenomenex.56 0. pH 2. Solución de la muestra del ETA Pesar una cantidad apropiada de muestra en una probeta graduada para obtener una concentración final de fenetilamina aproximadamente igual a la de la solución estándar. 95 1.50 3.48 1.61 5.99 3. Lecturas recomendadas Malone. V.50 1. Microgram. HPLC Quantification of Clandestinely Manufactured Mixtures of Amphetamine and Methamphetamine. (1998).MDMA Cafeína Lidocaina MDEA Ketamina Clorofeniramina P2P Safrol Quaifenesin Aspirina 1. 304 a 307 61 . págs.55 1.09 Cálculos El porcentaje de contenido de ETA de la muestra se calcula a partir del área de pico del ETA y el área de pico y la concentración del estándar de ETA pertinente.18 1. J.17 3. 31. Diluir a volumen con agua de calidad para CLGR. 2 min CElixir B.5 cm a la ventana del detector) por 50 µm i. Esta solución final contiene 3. transferir una cantidad apropiada de solución estándar interna para obtener una concentración final de 0. Solución estándar de ETA Pesar una cantidad apropiada de estándar de ETA en una probeta graduada para obtener una concentración final de aproximadamente 0. Con una pipeta. MDMA y MDEA en un instrumento de EC Agilent HP3D. Diluir a volumen con disolvente de inyección. MDA. los tiempos de lavado y las presiones y parámetros de sección pueden cambiar con otros fabricantes de instrumentos.5 (MicroSolv). 1 min agua. Transferir el contenido a una probeta graduada de 2000 ml con ayuda de agua de calidad para CLGR. Solución estándar interna de ETA Pesar una cantidad apropiada de N-butilanfetamina HCl (o un estándar interno apropiado a una probeta graduada) y colocar en una probeta graduada para obtener una concentración final de aproximadamente 1. Alternativamente.75 mM de fosfato.d.Anexo VI.1 mg/ml. 15°C 1 min 0. MÉTODO DE CAPILARES DINÁMICAMENTE REVESTIDOS PARA CUANTITACIÓN DE ETA Preparación de muestras y soluciones estándar de ETA Disolvente de inyección Pesar 1034 mg de fosfato de sodio monobásico en una probeta graduada de 100 ml. Condiciones de trabajo para EC (aquiral) Capilaridad: Temperatura capilar: Acondicionamiento: Inyección: Corrida de tampón: Voltaje: Longitud de onda UV: Sílica pura 32 cm (23.6 utilizando ácido fosfórico y añadir por goteo). Eatontown. pH 2. transferir todo el contenido (con ayuda de agua de calidad para CLGR) de la botella de 250 ml de concentrado de disolvente de inyección (MicroSolv. Hay que tener presente que algunas condiciones.2. como la longitud capilar. Diluir a volumen con disolvente de inyección.08 mg/ml. Con una pipeta. USA) a una probeta de 5 litros. pH 2. Diluir a volumen con agua de calidad para CLGR. con un pH de 3. Método de EC validado para cuantitación de ETA seleccionados A continuación se explica un método validado para la cuantitación por EC de ETA seleccionados solubles. 50 milibares x 2 s de muestra seguida de 35 milibares x 1 s de agua CElixir B. incluidas la anfetamina. 1 min CElixir A (MicroSolv).1N hidróxido de sodio.1 mg/ml.5 10 kV 195 nm 62 . transferir una cantidad apropiada de solución estándar interna para obtener una concentración final de 0. la metanfetamina. NJ.0 mg/ml. el voltaje. Diluir a volumen con agua de calidad para CLGR (ajustar el pH a aproximadamente 2. Solución de muestra de ETA Pesar una cantidad apropiada de muestra en una probeta graduada para que la concentración final de fenetilamina sea aproximadamente igual a la de la solución estándar. Diluir a volumen con disolvente de inyección. 81 0.76 0.87 0.84 0.92 0.00 (4.91 0.96 0.00 1.14 2.88 0.78 0.95 0.14 2.40 2.92 0.Tiempos de migración relativa aproximados Doxilamina Clorfeniramina Quinina Beta-fenetilamina Cloroquina Nicotinimida Anfetamina Metanfetamina Procaína MDA Norseudoefedrina MDMA Norefedrina Seudoefedrina Tetracaína Efedrina Fenilefrina MDEA Ketamina Feniltoxilamina N-butilanfetamina (SI) Metorfán Lidocaína Benzocaína Acetominofén Cafeína Quaifenesina P2P DMSO (marcador neutral) Aspirina 0.6 min) 1.11 2.91 0.96 0.90 0. y el área de pico y la concentración del estándar de ETA.88 0.80 0.97 1.71 Cálculos El contenido (%) del ETA desconocido se calcula a partir de su área de pico.81 0.24 2.93 0.03 1.25 2.93 0. 63 . en relación con el área de pico del estándar interno (estándar y muestra). . 1 min CElixir A (MicroSolv). I. A.89 0. MDA. Pellegrini.83 0.5 + 50 mM 2-hidroxipropil-Β-Ciclodextrina (MicroSolv).04 1. 0. P. Capillary Electrophoresis Analysis of a Wide Variety of Seized Drugs Using the Same Capillary with Dynamic Coatings. T.86 0. pH 2. Garcia. Forensic Sci. J. Bethea. 1 min agua. y Weinberger R. 1580 a 1591.10 1.1N hidróxido de sodio. Lurie. A. P.90 1.87 0. G.81 0.86 0.o l-enantiómero. (2001). A. Electrophoresis. 25.00 (3.. M.5 cm a la ventana del detector) por 50 µm i.d. I. 50 milibares x 2 s de muestra seguido de 35 milibares x 1 s de agua 20kV 195 nm (longitud de banda 10 nm) Tiempos de migración relativa aproximados l-norseudoefedrina d-norefedrina l-norefedrina l-seudoefedrina l-anfetamina d-efedrina d-anfetamina l-efedrina l-metanfetamina d-norseudoeferina d-metanfetamina d-seudoefedrina N-butilanfetamina* N-butilanfetamina* MDA* MDA* MDMA* MDMA* MDEA* MDEA* * d.75 min) 1. J. K. D.83 0. Sahai. MDMA. 2 min CElixir B. Hays..87 0.Condiciones de trabajo para EC (quiral) Capilaridad: Temperatura capilar: Acondicionamiento: Inyección: Voltaje: Longitud de onda UV: Sílica pura 32 cm (23. P. págs. 64 .02 1. págs. S. MDEA and Cocaine using Capillary Electrophoresis. R.83 0. Hays.07 1. McKibben.12 Lecturas recomendadas Lurie... P. Use of Dynamically Coated Capillaries for the Routine Analysis of Methamphetamine. S. 15°C 1 min 0.05 1..88 0. y Parker. Amphetamine.. 1025 a 1032.85 0...03 1. (2004). 46. transferir la capa orgánica a un tubo de ensayo limpio. o alternativamente a 30ºC. 65 . así como las interferencias con la matriz. Procedimiento B (acetilación con anhídrido en presencia de un catalizador básico) Añadir 50 µl de 0. Si no se dispone de viales especializados. como el tiempo o la temperatura de reacción. la extracción de la muestra se debe realizar en la forma descrita en las secciones pertinentes más arriba. e inyectar 1-2 µl en la columna del CG. Evaporar el exceso de reactivo. este paso se debe realizar con mucho cuidado. batir por 30 segundos e incubar durante 20 min a 75ºC. Nota analítica Si se escoge la derivatización como método de preparación de muestras. Después de mezclar y centrifugar. especialmente para el análisis cuantitativo de ETA. e insertar 1-2 µl en la columna del CG. A fin de evitar pérdidas del analito por evaporación. y añadir 50 µl de HFBA. Procedimientos de derivatización Acetilaciones Anhídrido heptafluorobutírico (HFBA) Procedimiento A (acetilación con anhídrido) Añadir 50 µl de HFBA al residuo seco del ETA extraído en un vial de reacción18. se puede continuar la evaporación hasta que quede sólo una delgada capa de disolvente. Anhídrido pentafluoroacético (PFAA) Añadir 50 µl de PFAA al residuo seco del ETA extraído en un vial de reacción. Centrifugar el tubo de ensayo hasta que se separe la capa superior de tolueno.5M hidróxido de potasio al residuo seco de ETA extraído y seguidamente 500 µl de tolueno. Evaporar el exceso de reactivo. Derivatizaciones La derivatización de ETA no es obligatoria. por lo general con un fondo cónico dentro del vial. Reconstituir el residuo seco en 50 µl de acetato etílico. Los métodos de derivatización que se recomiendan más abajo funcionan bien para la mayoría de los ETA que se encuentran con más frecuencia. la derivatización se puede hacer en cualquier tubo de ensayo revestido de Teflon con tapa de rosca. el disolvente debe secarse por evaporación bajo una ligera corriente de nitrógeno a temperatura ambiente. No obstante. Después de la extracción.Anexo VII. algunas condiciones de la reacción. ahora bien. 18 Los viales de reacción son viales con tapa de rosca de vidrio grueso resistente a las temperaturas. ya que la mayoría se presta a los análisis por CG y son termoestables. Tras añadir el conservador de disolvente. La forma más eficiente de prevenir la evaporación del analito es evaporar el disolvente hasta aproximadamente 1 ml y luego añadir unas pocas gotas (50 µl) de un disolvente con alto punto de ebullición (conservador de disolvente). Inyectar 1-2 µl de la capa de tolueno en la columna del CG. La muestra está ahora lista para la derivatización utilizando uno de los métodos recomendados. Tapar el vial. Mezclar cuidadosamente y en seguida añadir 500 µl de bicarbonato de sodio p/v al 10% mezclando continuamente. dimetilformamida. Reconstituir el residuo seco en 50 µl de acetato etílico. la derivatización de ETA (aminas primarias o secundarias) mejora sus propiedades cromatográficas al reducir la absorción en columnas no deseable y no específica. deben ajustarse. por ejemplo. en raras ocasiones. batir durante 30 segundos e incubar durante 20 min a 75ºC. Tapar el vial. 399. R. Reconstituir el residuo seco en 50 µl de acetato etílico. para evitar un pico temprano de MTBSTFA en el cromatograma de CG. Añadir 100 µl de agua para hidrolizar cualquier parte de MTBSTFA que no haya reaccionado. Kelly.-butil-dimetilsilil trifluoroacetamida (MTBSTFA) Añadir 100 µl de acetonitrilo y 150 µl de MTBSTFA al residuo seco del ETA extraído. Lecturas recomendadas R. J. combinar el residuo seco del ETA extraído con 100 µl de acetonitrilo y 100 µl de MTBSTFA en un vial de 3 ml. batir durante 30 segundos e incubar durante 30 min a temperatura ambiente. Toxicol. Decantar la capa superior de hexano e inyectar 1-2 µl en la columna del CG. Melgar. Evaporar el exceso de reactivo. Chromatography. Tapar el vial. Añadir 250 µl de n-hexano. 78. Tapar el vial y calentar durante 15 min a 90ºC./dec. la muestra se puede inyectar directamente sin dilución con acetonitrilo). Doneke. mezclar bien e inyectar 1-2 µl en la columna del CG (si se prevén concentraciones bajas del analito.O-bis-[(trimetilsilil)trifluoroacetamida] (BSTFA) Añadir 50 µl de BSTFA y 100 µl de acetonitrilo al residuo seco del ETA extraído en un vial de ο reacción. la evaporación del exceso de reactivo puede no ser necesaria si se prevé que la concentración de analito será suficientemente grande para la inyección directa de la mezcla de derivatización.. batir durante 30 segundos e incubar durante 20 min a 60ºC. batir e incubar durante 15 min a 70 C. 1993). Anal.. Dejar la muestra a temperatura ambiente por otras 2 horas. N. Evaporar el exceso de reactivo.Anhídrido trifluoroacético (TFAA) Añadir 100 µl de acetato etílico y 50 µl de TFAA al residuo seco del ETA extraído en un vial de reacción. N-metilbis-trifluoroacetamida (MBTFA) Añadir 500 µl de MBTFA al residuo seco del ETA extraído en un vial de reacción. 273 (1973). e inyectar 1-2 µl en la columna del CG. especialmente si se han de sililizar grupos amino secundarios. Dado que eluce temprano en el análisis de CG. Tapar el vial. 66 . Lecturas recomendadas M. Sellar el vial y dejar reposar la mezcla durante 2 horas. pág. Inyectar 1-2 µl en la columna del CG. Tapar el vial. 17 (nov. Añadir 500 µl de acetonitrilo. Sililación N-metil-N-tert. Reconstituir el residuo seco en 50 µl de acetato etílico. mezclar vigorosamente y centrifugar. e inyectar 1-2 µl en la columna del CG. Alternativamente. C. o más. J. se puede utilizar el cloruro correspondiente. Añadir MgSO4 y dejar reposar la mezcla durante 15 minutos. o TFAP-Cl) Disolver el residuo seco de la muestra del ETA extraído en 2 ml de cloroformo seco.5 ml de solución de bicarbonato de sodio p/v al 10%. Inyectar 1-2 ml en la columna del CG. Lavar con 3 ml de 6 N HCl y luego con agua. como los acilcloruros. y luego añadir 40 mg de trietilamina seca. alkilsulfonatos. 2. 1. En lugar del ácido de Mosher. Se sabe que el TPC produce derivativos estables de casi todos los ETA. con excepción de la efedrina y la seudoefedrina. tapar el vial y calentar a 65°C durante 1 hora. isotiocianatos. Ácido R(+)/S(-)-a-metoxi-a-(trifluorometil)-fenilacético (ácido de Mosher). pero los dos que se indican a continuación son los más populares. supra). 67 . Extraer la fase acuosa con cloroformo. Cloruro de N-trifluoroacetil-L-prolil (TPC. incluidas las efedrinas. cloroformatos. Continuar revolviendo durante 15 minutos. cloroformo. Reconstituir el residuo en un disolvente adecuado para el análisis por CG (por ejemplo.Derivatización quiral Se puedan preparar sustratos de diastereoisómero de ETA utilizando muchos reactivos diferentes. aunque el propio ácido de Mosher produce la derivatización cuantitativa de la mayoría de las aminas. Está disponible en el comercio o se puede preparar por reflujo del ácido con cloruro de tionilo. El ácido de Mosher o sus derivados se pueden utilizar como reactivos para análisis tanto por CG como por CLGR. véase la sección sobre análisis cualitativo por CG. secar con un sulfato de magnesio y secar por evaporación. Revolver la mezcla.5 ml de 0. Añadir 4 ml de reactivo de TPC. Se presta mejor al análisis por CG. Añadir 0.2 M solución de ácido de Mosher en THF en un vial de reacción revestido de Teflon con tapa de rosca. Los cloruros ácidos suelen ser más reactivos. o cloruro de ácido R(+)/S(-)-a-metoxi-a-(trifluorometil)-fenilacético (cloruro de ácido de Mosher) Disolver el residuo seco de la muestra del ETA extraído en 1 ml de THF y mezclar con 0.