UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE YUCATÁNFACULTAD DE QUÍMICA “MÉTODOS, ÓPTICOS, ELECTROQUÍMICOS Y CROMATOGRÁFICOS” “ANÁLSIS DE PARACETAMOL, ÁCIDO ACETILSALICÍLICO Y CAFEÍNA EN TABLETAS”. INTEGRANTES: • Ayil Tuz Edgar Gregorio • Chan Balan Reyna Guadalupe • Chan Chalé Laureano de Jesús • Palma Chim María del Socorro • Tun González Álvaro Manuel SALÓN: Audio 1 PROFESORAS: M. en C. Durcy V. Ruiz Ciau M. en C. Ligia Alcocer Can 1 Fecha de entrega: lunes 17 de mayo de 2010 ÍNDICE OBJETIVOS……………………………………………………………………….4 PROCEDIMIENTO……………………………………………………………....4 JUSTIFICACIÓN……………………...2 INTRODUCCIÓN………………………………………………………………….6 REFERENCIAS……………………………………………………………………9 2 ....……………………………………………..2 MATERIALES Y MÉTODOS……………………………………………………. Su efecto terapéutico se prolonga hasta seis horas sin producir irritación gástrica a dosis terapéuticas. La aspirina o ácido acetil salicílico es el NSAID (fármaco antiinflamatorio no esteroidal) de uso más extendido. 200 mg y 25 mg respectivamente. cuya absorción se lleva a cabo en el tubo digestivo. Funciona bloqueando las enzimas cicloooxigenasas (COX) que realizan las síntesis corporal de las prostaglandinas y previene la formación de tromboxano A2. alcanzando las concentraciones plasmáticas máximas entre 15 minutos y 2 horas después de su administración oral. INTRODUCCIÓN Para el tratamiento de la migraña suelen administrarse tabletas compuestas de ácido acetilsalicílico (AAS). Por otro lado. Sólo 3% se elimina sin cambios. paracetamol. se une a proteínas plasmáticas en 35% aproximadamente.OBJETIVOS Proponer un método viable para la separación y determinación cuantitativa de aspirina. La cafeína se distribuye ampliamente en el organismo con un volumen de distribución aparente de 0. la cafeína es un alcaloide que funciona como un estimulante cardiovascular y del sistema nervioso central (SNC). disminuyendo la agregación plaquetaria. y cafeína con un contenido de 250 mg.55 L/kg. cafeína y ácido acetilsalicílico que son constituyentes usuales en algunos analgésicos. El paracetamol es un analgésico antipirético no narcótico con acción selectiva en el sistema nervioso central sin bloqueo cortical. aproximadamente de 90 a 95% se conjuga primariamente con el ácido gluconórico y se elimina por excreción urinaria a través de metabolitos. y es un adyuvante del analgésico. Las dosis más altas de ácido acetilsalicílico no 3 . cromatografía de adsorción (sólido-sólido). Se estima que más de las tres cuartas partes de las separaciones por cromatografía de líquidos de alta resolución se realizan habitualmente en fase inversa. Existen cuatro tipos principales de cromatografía de líquidos en columna: cromatografía de reparto (líquido-líquido). se alinean paralelamente entre sí y perpendicularmente a la superficie de la 4 . Los grupos hidrocarbonados de cadena larga de estos empaquetados de columna. en cromatografía de fase normal. pero parecen asociarse a una mayor incidencia de efectos secundarios (hemorragia gastrointestinal. todo el efecto antitrombótico tarda 2 días en manifestarse. En cromatografía de fase inversa. En la primera. Por lo tanto. Se pueden distinguir dos tipos de cromatografía de reparto en función de las polaridades relativas de las fases móvil y estacionaria. mientras que con dosis estándar el efecto aparece en horas. usualmente con un grupo funcional octadecilo (C-18) u octilo (C-8) y una fase móvil polar. la cromatografía de fase normal y de fase inversa. frecuentemente una fase móvil parcial o totalmente acuosa.tienen un efecto beneficioso mayor. la cromatografía de fase inversa utiliza un empaque enlazado hidrofóbico. el componente más polar es el primero que se eluye y al aumentar la polaridad de la fase móvil aumenta el tiempo de elución. al aumentar la polaridad de la fase móvil disminuye el tiempo de elución. ulceración gástrica). de intercambio iónico y de excusión molecular. la polaridad es inversa. HPLC (de High-Performance Liquid Chromatography) es un proceso de migración diferencial en el cual los componentes de una mezcla son transportados por una fase móvil líquida y posteriormente los componentes son retenidos selectivamente por una fase estacionaria. la fase estacionaria es muy o moderadamente polar y la fase móvil no polar. Con dosis bajas de AAS. Como se ha mencionado. en el método de fase inversa. La cromatografía líquida de alta resolución. el componente menos polar es el primero que se detecta. En cambio. 1g. Los datos cromatográficos son procesados a través de una interfase por un ordenador que contiene un programa de integración. una válvula de inyección con un bucle de 20μL.45 μm de diámetro de poro y jeringuilla. PROCEDIMIENTO Preparación de patrones para determinar el tiempo de retención de cada compuesto.0mm de diámetro interno y 5 μm de tamaño de partícula. Disolución patrón de ácido acetilsalicílico de 100 ppm (0. como un cepillo. Filtros de membrana de nylon 0.1g L -1): pesar 0. originando una capa de hidrocarburos no polares. transferir la disolución 5 . Fase estacionaria: Columna cromatográfica C18 de 16 cm de longitud. disolver con la fase móvil. Aforar a ese volumen con más de la fase móvil.L -1): pesar 0.1g de paracetamol. Fase móvil: Análisis por gradiente con una velocidad de flujo de 1. MATERIALES Y MÉTODOS Equipo: Para realizar el análisis cuantitativo y cualitativo de la muestra se utiliza un cromatógrafo de líquidos adicionado con una bomba de alta presión con dos pistones. 4. 15:75:10 (v/v/v) y 10:20:70 (v/v/v) respectivamente.partícula (analito). detector UV fijado a 280 nm.5 ml/min. Disolución patrón de paracetamol de 100 ppm (0. disolver en la fase móvil y transferir la disolución obtenida a un matraz de 100 mL. Disolventes: etanol/nitrometano/dioxano 80:10:10 (v/v/v).1g de ácido acetilsalicílico. Se toman 5 mL de la segunda disolución patrón y se enrasa a 10 mL. A partir de esta segundo se prepara un tercero operando de igual manera. Aforar a ese volumen con más de la fase móvil. siempre empleando fase móvil. Para ello pesan 100 mg de paracetamol. A partir de esta disolución se debe preparar otra mas diluidas que se inyectara en el cromatógrafo. se disuelve en fase móvil. se filtra si fuera necesario y se transvasa cuantitativamente a un matraz aforado de 100 mL donde se enrasa con la fase móvil.1 mg una muestra de aproximadamente 0. Para ello se toman 5 mL de la primera disolución patrón y se afora a 10 mL. A partir de este primer patrón se preparará un segundo y tercero mediante dilución. Preparación de la muestra Se pesan 3 o 4 comprimidos y se calcula el peso medio de un comprimido. Todo ello se enrasara a 100 mL con la fase móvil. Se introduce la muestra en un vaso de 100 mL. Añadir a este patrón ácido benzoico. y poder recalcular las concentraciones de cada sustancia patrón. Disolución patrón de cafeína de 100 ppm (1gL -1) pesar 0.1g. 300 mg de ácido acetilsalicílico y 50 mg de cafeína. Se emplearan 50mg de ácido benzoíco para 100 mL. disolución multicomponente. y cafeína 50 ppm. Se preparará una única disolución en la que se encuentren concentraciones de: paracetamol 100 ppm. que se emplea como patrón interno.obtenida a un matraz de 100 mL. disolver y aforar a 100 mL con la fase móvil. para ello será necesario conocer la cantidad aproximada de cada compuesto por comprimido (indicado en el 6 . se disuelve con la fase móvil y la disolución obtenida se transfiere a un matraz de 100 mL. ácido acetilsalicílico 300 ppm. 25 y 12 ppm de cafeína y 150 y 75 ppm de Acido acetilsalicílico. obteniéndose disoluciones estándar 50 y 25 ppm de paracetamol. Preparación de patrón de cuantificación.1g de cafeína. Se trituran en un mortero y se pesa con una presición de 0. prospecto del medicamento). con una fase móvil relativamente no polar. utilizando como sistema de filtración una jeringuilla. se utiliza la cromatografía de partición de fase inversa con una fase móvil polar como metanol. Finalmente se filtra una pequeña cantidad de la muestra a través de la membrana. Una vez conocida se diluirá de tal manera que la concertación quede entre el primer y el segundo patrón. A continuación se filtra una cierta cantidad de las disoluciones patrón a través de una membrana de nylon de 0. Análisis de la muestra Antes de inyectar cualquier componente es necesario acondicionar la columna cromatográfica. Posteriormente inyectar los patrones de distintas concentraciones para obtener las rectas de calibrado correspondientes. Si es polar se utiliza la cromatografía de partición en fase normal.45 μm de poro. Existen dos modalidades: de partición en fase normal o en fase inversa. La fase inversa permite variar más parámetros. para lo cual se hace circular la fase móvil por el sistema aproximadamente durante 15 minutos. Si el fármaco es iónico (por tanto hidrosoluble) se utiliza la cromatografía de intercambio 7 . La disolución se hace en fase móvil. acetonitrilo o mezclas acuosas. se inyecta y se identifican los picos a través de los tiempos de retención identificados previamente. JUSTIFICACIÓN Se eligió la cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) porque se utiliza de forma sistemática con una preparación de muestra muy sencilla en el análisis de fármacos en líquidos biológicos y en el análisis de formulaciones farmacéuticas. Se inyectan los patrones en el cromatógrafo y se determina el tiempo de retención correspondiente a cada sustancia. Si el fármaco no es hidrosoluble. En cuanto a los detectores más populares. que resulta poco sensible. La HPLC en fase reversa se emplea para separar mezclas de polaridad media o alta. el AAS es capaz de formar puentes de hidrógeno por lo tanto es un compuesto polar al igual que en su estructura cuenta con varios átomos muy electronegativos como es el caso del oxígeno (figura 1.) y por otra parte la molécula de cafeína en su estructura tiene un anillo aromático con nitrógenos (base púrica)(figura 3. y si tiene un peso molecular superior a 2000. 8 .) disminuyendo su polaridad comparada con la del AAS y del paracetamol. se utiliza la cromatografía de exclusión molecular y una fase móvil polar. Por otro lado.iónico con fase móvil polar.). La elución se produce por la interacción del compuesto entre la fase móvil y la fase estacionaria. que son los más adecuados para fármacos o sus derivados que poseen grupos cromóforos con gran absorción. aparte del índice de refracción. una disminución de la polaridad de la fase móvil disminuye el tiempo de elución. Por último. los detectores de fluorescencia permiten determinar menores concentraciones. Los sistemas de inyección son variados y pueden ser automáticos. los detectores electroquímicos. los componentes eluyen de forma decreciente respecto a su polaridad. se encuentran los de absorción UV. son muy sensibles. en este análisis los compuestos a separar poseen polaridad intermedia. En fase reversa las columnas de uso más extendido son las compuestas de partículas de sílice fijas a cadenas de C18 (C 18H37). la molécula de paracetamol puede formar un puente de hidrógeno ya que cuenta con una átomo de hidrógeno (figura 2. cuando pueden aplicarse. Éstos pueden ser de longitud de onda fija (más sensibles y estables) o variable. pero requieren que los fármacos posean fluorescencia natural o se deriven con los reactivos adecuados. prosiguiendo con la separación del paracetamol con etanol (15%). Paracetamol Figura 3. En este caso los compuestos a separar van de un compuesto polar (AAS) hasta uno con polaridad muy baja (cafeína) en consecuencia la elección de la fase móvil tendrá que tener ciertas características. Para el análisis por gradiente se consideró que dentro del rango de los primeros 3 minutos se eluiran etanol (80%). nitrometano (20%) y dioxano (70%). Para la fase móvil utilizada en este análisis se eligió la elución por gradiente. dioxano (10%) para la separación del AAS. Se eligió este tipo de elución con preferencia sobre la elución isocrática porque esta última no puede separar una mezcla compleja con resolución adecuada en un tiempo razonable y con buena detectibilidad. estas proporciones fueron tomadas de acuerdo al orden de polaridad de los compuestos y de acuerdo al orden que eluirán. AAS Figura 2. Para la elección de la fase móvil se tendrá que tomar en cuenta que compuestos se desean separar. nitrometano (10%). la cual involucra el cambio de la composición de la fase móvil en forma escalonada o continua conforme la elución procede. para la optimización del análisis la elución por gradiente sería la más adecuada. 9 . Cafeína Fase Móvil: Etanol/Dioxano/Nitrometano. tomando como factor importante la polaridad de los compuestos para la correcta elección de los disolventes y sus respectivas proporciones. nitrometano (75%) y dioxano (10%) y para la separación de la cafeína se utilizó etanol (10%).Figura 1. Esto se debe a que la fase móvil se mantiene sin cambio durante todo el tiempo necesario para que los componentes de la muestra eluyan de la columna. J. et al. A. F. México...Además en la elución por gradiente frente a la isocrática se puede alcanzar un aumento potencial del doble o más de la sensibilidad. A. pp. Andrejus Korolkovas et al. H. 576. 577.. L. 1994. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1... Settle. M. España. Editorial Reverté S. 1997. F. Merrit. A. 2. West. Dean. Curtis M. Famacología integrada. D... Grupo editorial Iberoamérica. aun con muestras que no requieren de elución por gradiente. pp. 3. Holler. Skoog. pp.. Métodos instrumentales de análisis. 715. 10 . Fundamentos de química analítica. J. H. 4. La elución por gradiente proporciona anchos de las bandas más parecidos y separaciones globales más rápidas. 716. 4ª ed. 182.. 168. L. J. Compedio esencial de química farmacéutica. D. 616. Willard. pp. A..
Report "Análisis de AAS, paracetamol y cafeina por HPLC."