ESCUELA POLITECNICA DEL EJÉRCITOFACULTAD DE CIENCIAS DE LA VIDA INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA INFORME DE LABORATORIO INTEGRANTES: Lizeth Guerrero, Gabriela Sevillano y Carolina Varela. ASIGNATURA: Fitoquímica CURSO/PARALELO: A-302 NRC: 3367 FECHA: 03/12/2013 PRÁCTICA Nº 1-3-1 TITULO DE LA PRÁCTICA: EXTRACCION, SEPARACION E IDENTIFICACION DE LOS ALCALOIDES DE LA GUAYUSA (Ilex guayusa Loes) Y GUANTO (Brugmansia sanguinea) OBJETIVOS: General: Extraer, separar e identificar los alcaloides de muestras vegetales de guayusa (Ilex guayusa loes) y guanto (Brugmansia sanguinea). Específicos: Desengrasar las muestras vegetales que contengan alcaloides con un solvente adecuado. Purificar las muestras a través de un proceso ácido-base. Determinar la presencia de alcaloides en las muestras a través de pruebas cualitativas de coloración (Dragendorff, Mayer, Wagner) Identificar la presencia de alcaloides a través de la cromatografía en capa fina con un solvente de Metanol-NH4OH (200:3) y (100:1,5). OBSERVACIONES: Originalmente utilizamos una muestra de chilca (Baccharis latifolia), en la cual en la primer fase de acidificación se obtuvieron resultados positivos debido a la presencia de impurezas; después de un proceso de eliminación del marco se obtuvieron resultados prueba de Wagner positiva para alcaloides en guayusa (presencia de precipitado). Mayer (M) y Wagner (W) positivas para la muestra de guanto. prueba de Mayer positiva para alcaloides en guayusa (presencia de precipitado). En las muestras utilizadas para la extracción de alcaloides se obtuvieron las siguientes observaciones: A 3 B C D 4 E F Imagen 1: A. por lo tanto se procedió a cambiar la muestra a guanto y guayusa. . C. la posición 3 es ocupada por la muestra de guayusa que presenta una fluorescencia color melón y la posición 4 por la muestra de guanto que presenta una fluorescencia color azul. para ser purificada en presencia de cloroformo.negativos con respecto a la presencia de alcaloides. F. pruebas de Dragendorff (D). B. E. en la cual. Cromatografía realizada con todas las muestras elaboradas en el laboratorio. prueba de Dragendorff positiva para alcaloides en guayusa (presencia de precipitado). embudo de separación. en el cual se encuentra la muestra (guanto). D. RESULTADOS: Método de obtención de alcaloides Maceración por 8 días en etanol Muestra seca. Fase orgánica Alcaloides bases Pruebas Wagner (amarillento) Mayer (blanco) Dragendorff (naranja rojizo) Acidificación pH acido Fase acuosa Alcaloides positivos (en forma de sales) FASE ACUOSA guanto guayusa - ++ +++ - ++ +++ - Fase orgánica Alcaloides negativos (impurezas) Alcalinizar NH4OH (pH alcalino) Extraer CHCl3 Fase acuosa alcalina Alcaloides negativo (impurezas) FASE ORGANICA guanto guayusa ++ ++ Fase orgánica Alcaloides positivo (en forma de bases) Evaporación Alcaloides totales Pruebas Wagner (amarillento) Mayer (blanco) Dragendorff (naranja rojizo) FASE ORGANICA guanto guayusa ++ ++ FASE ACUOSA guanto guayusa - ++ +++ - ++ +++ - . triturada y desengrasada Acidificación de la muestra con HCl Eliminación del marco Pruebas Wagner (amarillento) Mayer (blanco) Dragendorff (naranja rojizo) guanto ++ guayusa ++ ++ +++ ++ +++ Filtrado más alcaloides Alcalinizar NH4OH (pH alcalino) Extraer CHCl3 Fase acuosa – alcaloides (realización de pruebas de presencia de alcaloides). Reporte de resultados: GUANTO (Brugmansia sanguinea) . GUAYUSA (Ilex guayusa Loes) . . hace que estas sustancias formen emulsiones estables. se usa como solventes el metanol y el etanol. como el éter etílico. la cafeína y teobromina son alcaloides imperfectos por lo tanto no dan positivo con estas pruebas. el reactivo de Dragendorff. con diazometano o yoduro de metilo. para liberar los alcaloides presentes en forma de bases. dieron positivo para estos tres tipos de reactivos. lo cual afirma que el guanto presenta escopolamina. el reactivo de Wagner produce un precipitado amarillento. emulsión y orgánica en la cual se evidenció la presencia de alcaloides. Esto confirma que en nuestro ensayo la fluorescencia que presento la guayusa. un precipitado blanco. uno de los cuales es la escopolamina. una gama de otras sustancias. taninos y otras impurezas. indica que el etanol al ser un disolvente universal extrae de la planta no solo los alcaloides. y el reactivo Meyer. Es por esta razón que es importante someter las muestras a un proceso de desengrasado previo con éter. 2007). Este proceso extrae a más de los alcaloides. sino también. y el guanto. Según Primo. teobromina y harmina. con el fin de extraer todos los alcaloides presentes en la planta en forma de bases libres y luego realizar una maceración con alcohol al 70%. es por esta razón que se debe someter a la muestra a un proceso de purificación. Esto nos indica que el proceso que llevamos a cabo en la práctica fue el correcto ya que. es decir aquellos que son de baja polaridad. 2007. razón por la cual los vegetales deben ser sometidos un pretratamiento con solventes no miscibles con el agua. produce un precipitado naranja rojizo. y la guayusa. diclorometano.Discusión: Sharapin.. color melón. antes de extraer el alcaloide. Climent. Para la cromatografía de columna es conveniente disminuir la polaridad de la muestra mediante metilación de los OH libres. sean diferentes. otras sustancias básicas. etc. . los cuales permiten obtener los alcaloides tanto en la forma libre. adicionamos NH4OH y CHCl3. color azul. harmina. mientras que para liberar los alcaloides de sus sales. ácidas y neutras. obteniendo así tres fases: acuosa. 2000. etc. Presentan una fluorescencia característica bajo la luz UV. Según Roca y Mroginski. tanto en su forma libre como en su forma de sales. obteniendo de esta manera los alcaloides presentes tanto de su forma libre. Nuestras muestras de guanto y guayusa. La fase fija a utilizar es sílica gel y el solvente de corrida habitual es la mezcla metanol: amoníaco (99/1) (Primo. 1991. la alcalinización del medio y la adición de solventes clorados. Mientras Radice y Vidari. como en la forma de sus sales. del alta polaridad. lo cual indica la presencia de alcaloides en la muestra. 2007. afirma que los alcaloides están presentes en vegetales. 2005. amoniaco. cuando se pone en contacto con la solución ácida de alcaloides. que difícilmente pueden ser separadas por procesos mecánicos. así como pigmentos. Todos los alcaloides son activos a la luz polarizada. la planta de guanto contiene varios alcaloides. afirman que las especie Ilex guayusa Loes (guayusa) es fuente de varios alcaloides entre los cuales se destacan la cafeína. como en forma de sales. ya que es característica para cada alcaloide. . En las plantas los alcaloides se encuentran en forma de sales de las bases alcaloideas. El método de desengrasado. producen habituación. ya que dieron positivo para estas pruebas. mientras que la de la guayusa es la harmina.Conclusiones: El alcaloide presente en la plana de guanto es la escopolamina. ANEXOS CUESTIONARIO: 1. estas sales son solubles en agua mientras que las bases libres son insolubles en agua y solubles en disolventes orgánicos no polares” (Primo. 2003. una de ellas considera los núcleos que lo forman. “Son estupefacientes y tóxicos. con lo que se concluye que ésta es específica para cada alcaloide. otros se usan como medicamentos. ¿Cómo se los puede clasificar? Para clasificar alcaloides existen diferentes maneras. Tomado de: Remington. puede tener una estructura compleja con varios ciclos. purificación y extracción que llevamos a cabo fue el correcto ya que se logró obtener alcaloides en las dos muestras. Mediante los reactivos de identificación usados se pudo concluir que tanto la guayusa como el guanto presentan alcaloides. ¿Cuáles son las principales características de los alcaloides? Los alcaloides en su estructura química tienen una molécula de nitrógeno que presenta carácter básico. 1995). 2. Las muestra vegetales en la cromatografía presentan diferente fluorescencia. 245. María José. Cultivo de tejidos en la agricultura: fundamentos y aplicaciones. Número 151. Editorial Panamericana. Editor Convenio Andrés Bello. ¿Cuál es su rol en la naturaleza? En servir de reserva para la síntesis de proteínas De materiales de protección contra ataques de insectos u otros animales herbívoros. Edición 20. (2005).873. 4. México. Argentina-Buenas Aires. 659 . 678. Págs. Pág.3. (1995). Italia. Bibliografía: Primo. (2003).3 Roca William y Mroginski Luis. Volumen 2. Tomo I. Universidad di Pavia. Remington. Pás.235. Pág. De estimulantes o reguladores de crecimiento o metabolismo interno o de reproducción. (2000). Caracterización Fitoquímica de la especie Ilex guayusa Loes y elaboración de un prototipo de fitofármaco de interés comercial. Fundamentos de tecnología de productos Fitoterapéuticos. 489. (2007). De agentes finales de desintoxicación por transformaciones simples de otras sustancias cuya acumulación puede resultar nociva para la planta. Climent Olmedo. Págs. Química Orgánica básica y aplicada: de la molécula a la industria. Valencia. Pág. Ed. Farmacia. Editor CIAT. (1991). Volumen 78 de Ciencia y Tecnología. Sharapin Nikolai. Univ.76 Radice Matteo y Vidari Giovanni. Editorial Reverte. Experimentación en química: química orgánica. E. 117. Politéc. ¿Cuál es el objetivo por el que un organismo vegetal la produce? El principal objetivo por una planta produce este tipo de sustancias es como medio defensa a otros insectos y plagas que afecten o alteren su metabolismo.