Objetivos Aislar los microorganismos que serán utilizados en las diferentes practicas del laboratorio Purificar y mantener viables las cepas aisladas Emplear el método más adecuado para aislar y purificar las cepas en función del tipo de muestra que será utilizado Introducción Los microorganismos más utilizados a escala industrial son los hongos y algunas bacterias, especialmente el género Streptomyces. Los microorganismos industriales son especialistas metabólicos capaces de ser manipulados en cultivos a gran escala para producir uno o más compuestos con un alto rendimiento[1]. Los productos de mayor interés para su producción en masa: los propios microorganismos como las levaduras, que se utilizan en la industria panadera y para la producción de cerveza; antibióticos, como la penicilina o la tetraciclina; esteroides como la cortisona; enzimas, muy utilizadas en la industria alimentaria para múltiples aplicaciones; productos químicos especializados y aditivos alimentarios; productos químicos genéricos baratos como por ejemplo el etanol y el ácido cítrico; vitaminas, como la B12 y la riboflavina (B2) [2]. Uno de los retos de los microbiólogos industriales es desarrollar procedimientos para obtener metabolitos y existen 5 diferentes pasos[1]. 1. Screening para la producción de nuevos aislados o métodos de prueba. 2. Modificación química de sustancias microbianas conocidas. 3. Biotransformación 4. Fusión interespecífica de protoplastos 5. Clonación de genes Aspergillus niger: es el hongo de los hongos más comunes en el medio ambiente, se desarrolla mayormente en un ambiente húmedo, cítrico y templado. Sus características más comunes se pueden observar en la imagen 1, son cabezas conoidales de tonos negro a negro grisáceo, negro café, negro purpura o negro carbón, son globosas, radiadas o divididas formando columnas de cadenas de conidios irregulares o bien definidas. Los conidióforos son de color hialino a café típicamente lisos o en pocas especies ligeramente granulares, de paredes robustas, quebradizas, dividiéndose longitudinalmente al ser trituradas [3]. Imagen 2. Estructura microscópica de la levadura Saccharomyces cerevisiae Leuconostoc mesenteroides: Leuconostoc mesenteroides es un estreptococo láctico heterofermentativo osmofílico se puede observar en la imagen 3. sin embargo. como por ejemplo en la extracción de azúcar a partir de caña o remolacha azucarera[5]. Imagen 1. Produce gran cantidad de mucílago en medios que contienen sacarosa. Las células de la levadura se multiplican rápidamente por gemación. de forma más o menos redondeada. caramelo líquido. esto significa que es capaz de crecer en concentraciones de sacarosa iguales o mayores al 10%. . crema de helado. lo que permite su desarrollo en jarabes. en condiciones óptimas. etc. Tiene gran tolerancia para desarrollarse en concentraciones azucaradas de hasta 55 a 60%. Saccharomyces cerevisiae que se puede apreciar en la imagen 2 es un organismo unicelular. una forma asimétrica de reproducción asexual: a partir de una célula se origina una protuberancia que va creciendo y acaba dando lugar a otra célula. este tipo de reproducción dura unas dos horas y permite la colonización total de los mostos en cuestión de horas o días[4]. esto es deseable cuando es necesaria la producción de dextrano (polisacárido gomoso). en otros casos representa un contratiempo.Estructura microscópica de hongo Aspergillus niger Saccharomyces cerevisiae: su aislamiento se realiza a partir de muestras ricas en azucares. sobre todo en la elaboración u obtención de alimentos ricos en este disacárido. a esta caja la etiquetará como caja muestra . marcar como para agregarlo a la (1:1000) siguiente solución salina. virtiendo el PDA o anterioridad Tomar 1 mL de muestra y coloque en la caja Petri y AN correspodiente añada el AN o PDA según corresponda. ésta será (1:10) correspondiente Tome 1 mL de muestra de salina. A. durante 3-4 días de tierra sobre la un color negro superficie. Imagen 3. añadir el AN o PDA Preparar AN. ésta se etiquetara 1:10 y coloque en una caja como (1:1) Tome 1 mL del tubo 1:1 y Petri. añadirlo al 1:100 y añadirla a una caja Tomar 1 mL de muestra y siguiente tubo de solución Petri con su AN o PDA añadirlo en la solución salina. Estructura microscópica de bacteria Leuconostoc mesenteroides Metodología A) Aislamiento de Aspergillus niger Cortar en rodajas el limón y colocar sobre la cama de Observar el crecimiento.1) Realización del cultivo puro de Aspergillus niger Observar crecimiento y Tomar una asada del hongo y realizar preparación en fresco sembrar por estría en PDA Incubar a 28 °C por 24-48 h con azul de metileno para inclinado observar al microoscopio B) Aislamiento de Saccharomyces cerevisiae y Leuconostoc mesenteroides De la muestra 1:100 tomar nuevamente 1 mL y Tomar 1 mL y agregar a la agregar a la solución caja Petri con su PDA o AN Del tubo 1:10 tome 1 mL salina. la Colocar algodón húmedo Exponer al medio ambiente algodón. esta se marcara como Agite este tubo y tome 1 Agarrar 1 mL de la muestra (1:100) mL de muestra. PDA y añadalo a la siguiente caja soluciones salinas con Petri. agregar un poco cual se verificara al obervar dentro de la caja Petri. Imagen 5. tierra y agua (5 días de crecimiento).1) Realización de cultivo puro Saccharomyces cerevisiae y Leuconostoc mesenteroides Incubación: Tinción de Gram para bacteria Tomar una asada del cultivo Saccharomyces cerevisiae: 28 Fundir el PDA o AN y dejar y tinción simple para la correspondiente e inocule por °C / 3 días enfriar levadura y observar al estría o picadura Leuconostoc mesenteroides: microscopio 37 C / 24-48 h Resultados y discusión Aspergillus Niger Observaciones macroscópicas Como se puede observar en la imagen 4 se puede notar un hongo filamentoso con 5 días de crecimiento. Que en comparación con la literatura se puede ver en la imagen 5 que es una foto compartida por Pinterest de colonias inicialmente blancas hasta negro-verdoso en un medio de agar malta. en un medio cítrico. B. Aspergillus niger en un medio preparado con rodajas de limón. con apariencia algodonosa de color blanco. Imagen 4. . Aspergullus niger crecimiento en agar malta. húmedo y con tierra. Aspergillus Niger a 40x Para las observaciones en el microscopio a 100x en la imagen 7. En la imagen 6 se puede observar algunos conidióforos y conidios de Aspergillus Niger a 40x con una tinción simple de azul de metileno. Aspergillus Niger a 100x Con las imágenes anteriores a 40x y 100x y las imágenes 8 y 9. se pueden ver todas las partes de la estructura asexual del hongo filamentoso los conidios. la vesícula que conforman la cabeza aspergilar y el conidióforo respectivo a Aspergillus Niger con una tinción simple de azul de metileno. vesículas. ya que las estructuras de reproducción asexual coinciden con la literatura como su cabeza aspergilar donde se observa el conidióforo.Observaciones Microscópicas. . la fialide. Imagen 7. se puede apreciar que efectivamente se obtuvo el hongo Aspergillus niger. Imagen 6. fiálides y cadenas de fialoconidias. Imagen 8. Agregar imágenes . En la imagen 11 se inoculo Saccharomyces cerevisiae por método de aislamiento por estría en agar sabouraud dextrosa. Saccharomyces cerevisiae en un medio de agar de patata dextrosa Para una mejor apreciación de la morfología de la levadura. Imagen 10. se realizó el procedimiento de siembra por estría.Estructura de Aspergillus niger Imagen 9. Para el otro caso del tubo inclinado de la levadura en caldo CSD se pudo apreciar en la imagen 12 cepas coloreadas blancas características. donde se obtuvo estos medios de aislamiento por el método de dilución y siembra en placa: concentrado y diluciones. Estructura de Aspergillus niger Levadura En el caso de la levadura en la imagen 10 se pueden ver Saccharomyces cerevisiae en un medio de agar de patata dextrosa. Saccharomyces cerevisiae a 100x Imagen 16. Imagen 13 Saccharomyces cerevisiae a 4x Imagen 14. Bacteria En el caso de la bacteria en la imagen 17 se puede observar Leuconostoc mesenteroide en un medio de agar nutritivo. . Saccharomyces cerevisiae a 10x Imagen 15. Imagen 17. Saccharomyces cerevisiae a 40x reportado en la literatura. donde se obtuvo estos medios de aislamiento por método de dilución y siembra en placa: concentrado y diluciones. 10x y 100x. se pueden observar cepas heterotálicas se comparó con la literatura con la imagen 16 por lo que coincidió con nuestros resultados.Saccharomyces cerevisiae en las siguientes imágenes a 4x. Leuconostoc mesenteroide en un medio de agar nutritivo. Leuconostoc mesenteroide a 10x Imagen 22. se comparo con la literatura con la imagen 22 donde se observan bacilos pero gram positivos uniformes. Imagen 20. Leuconostoc mesenteroide gram positiva. se puede observar una cepa de bacilos gram negativos. Leucnonostoc mesentetoide método de aislamiento por picadura en CDS. Agregar imágenes Imagen 18.Para el caso de la bacteria de igual manera se inoculo en un tubo inclinado por estría en agar nutritivo. . en la imagen 18 donde se puede observar cepas coloreadas blancas.Tinción Gram Leuconostoc mesenteroide a 4x Imagen 21. También se realizo el procedimiento por picadura pero ahora en CDS como se puede ver en la imagen 19. Tubo inclinado de Leuconostoc mesenteroide método de aislamiento por estria en agar nutritivo. Imagen 19. Para el caso de la bacteria Leuconostoc mesenteroide en la imagen 20 y 21 a 4x y 10x. . Manual de prácticas de Laboratorio de Procesos Microbiológicos Industriales.. Referencias [1] García Gómez N. Obtenido de http://depa.. aguamiel y uvas. agar sabouraud dextrosa y CDS). Recuperado el 28 de Agosto de 2017.. Ediciones Internas. V. los cuales fueron aislados e inoculados en medios de cultivo apropiados (agar nutritivo.). (22 de Julio de 2012).unam. para aislar los microorganismos Aspergillus niger. La levadura de la cerveza y. 34-36..csic. Cabe mencionar que para tener una mejor identificación de los microorganismos es necesario realizar pruebas bioquímicas.elespanol.es/llevat. pp. Caracterización de una cepa nativa de Aspergillus niger y evaluación de la producción de ácido cítrico. Omicrono.fquim. (21 de junio de 2007). Saccharomyces cerevisiae y Leuconostoc mesenteroides. F.. Universidad EAFIT.pdf . (s.com/2012/07/microorganismos-a-nuestro-servicio- la-microbiologia-industrial/ [3] Sáez Vega A.html [5] FQUIM-UNAM. de http://omicrono. Garza González M.mx/amyd/archivero/4Alteracion_6541. Además caracterizados mediante morfología macroscópica y microscópica. Con la finalidad de utilizarlos en prácticas posteriores de producción de sustancias de interés industrial. [4] CSIC.A. 2011. Microorganismos de alteración o deterioro. 7-16 [2] Desconocido. Almaguer Cantú V.f. (2002).T. Obtenido de Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC): http://seresmodelicos. del laboratorio. UANL. Conclusiones Se prepararon medios naturales a partir de tierra y limones en un ambiente húmedo.
Report "Aislamiento de Microorganismos Industriales"