Aislamiento de hongos fitopatógenos en lesiones (1)

REBIOL 2012; 32(2):56-61 (julio-diciembre 2012) Revista Científica de la Facultad de Ciencias Biológicas Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo. Perú Aislamiento de hongos fitopatógenos en lesiones de hoja y tallo de cultivos de vid, Vitis vitícola, de Cascas, La Libertad (Perú). 2012 Isolation of fungal pathogens in leaf and stem lesions of grapevine, Vitis viticola, crops from Cascas, La Libertad (Peru). 2012 Juan Wilson Krugg y Hugo Requejo Valdivieso Laboratorio de Fitopatología, Departamento de Microbiología y Parasitología. Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo. Perú RESUMEN Se aislaron u observaron hongos fitopatógenos en lesiones de hoja y tallo de Vitis vinifera “vid” procedentes del distrito de Cascas, La Libertad, en el 2012. Para esto, durante los meses de Enero a Agosto del 2012 se recolectaron muestras de hojas, tallos y fruto de plantas con síntomas o signos sospechosas de ser producidas por hongos, los que fueron observados macro y microscópicamente, para esto último se realizaron cortes histológicos los que fueron colocados en una solución de KOH al 10%. Para realizar el aislamiento a partir de las muestras con síntomas se procedió a cortar del borde de las lesiones y que contengan parte enferma y parte sana del tejido, pequeñas muestras en forma de cuadrado, las que fueron desinfectadas con hipoclorito de sodio al 2% durante 3 minutos y posteriormente lavados por tres veces con agua destilada estéril para finalmente colocar los cortes en placas de petri conteniendo agar papa sacarosa, incubándose a temperatura ambiente hasta la aparición de colonias, las que fueron resembradas en tubos de ensayo conteniendo agar papa sacarosa, Para la determinación de los hongos aislados se realizaron microcultivos a partir de las colonias que crecieron. Se encontró a Alternaria sp, Botrytis cinérea y Plasmopara viticola en hojas y a Uncinula necator, en hojas y tallos. Palabras clave: Hongos fitopatógenos, Vitis vinifera, Cascas (Perú) ABSTRACT Plant Pathogenic fungi in injuries of leaf and stem of Vitis vinifera “grapevine” were observed coming from the Cascas district, La Libertad, in the 2012. For this, during the months of January to August of the 2012 samples of leaves and stems of plants with symptoms were collected or suspicious signs of being produced by fungi, those that were observed macro and microscopically, for this We complete were made histological cuts those that were placed in a KOH solution to 10%. In order to make the isolation from the samples with symptoms it was come to cut off the edge of the injuries and that contains ill part and healthy part of the weave, small samples in form of square, those that they were disinfected with hypoclorhyte of sodium to 2% during 3 minutes and later washed by three times with distilled water sterile finally to place the cuts in plates of petri containing to agar potato saccharose, incubating themselves to room temperature until the appearance of colonies, those that they were reseeding in test tubes containing to agar potato saccharose, For the determination of the isolated fungi were made microcultures from the colonies that grew. It was found Alternaria sp, Botrytis cinerea, and Plasmopara viticola in stem, while, Uncinula necator in both: leaves and stems. Keywords: Pathogenic fungi, Vitis vinifera, Cascas (Peru) Pag. 56 principalmente las hojas. tejido que se torna de consistencia algodonosa y de color blanco. es otra fungosis importante en los cultivos de vid. Más tarde. conocido también como “cenicilla”. Es el principal limitante de la producción de uva para vino a nivel mundial.INTRODUCCION Las pérdidas ocasionadas por las enfermedades causadas por hongos y virus son muy limitantes en el cultivo de la vid. que luego se tornan oscuras. reducen la calidad. las que se deforman y detienen su crecimiento.9. Los primeros síntomas aparecen en forma de pequeñas manchas esparcidas o densamente distribuidas de color amarillo en el envés de las hojas y ocasionalmente aparece en los peciolos.21. información que se hace necesaria para realizar un mejor control fitosanitario de dichas enfermedades y así disminuir las pérdidas económicas.19. causado por el hongo Uncinula necátor.15. estas plantas son afectadas por diversas enfermedades bióticas. especialmente en las variedades que pertenecen a Vitis vinifera.4. también ocasiona la brotación de las yemas durante el periodo de descanso. causada por el hongo Phakopsora uva. El haz y el envés son igualmente susceptibles a la infección en cualquier edad de la hoja. donde se presentan manchas amarillentas de apariencia aceitosa. Causada por el hongo Botrytis cinérea. lo que conlleva a pérdidas económicas entre los agricultores. unos 60-70 días después de la poda. racimos y sarmientos. debido a que ataca todas las partes verdes de la planta.16. Los primeros síntomas aparecen en la lámina foliar y en las venas como pequeñas manchas de color oscuro con borde amarillo. La infección de los racimos ocurre durante periodos de lluvia. el llamado mildiu es una de las principales enfermedades que disminuyen la producción de vid. aproximadamente.17.6. dando una apariencia polvosa de color gris blanquecino a los órganos atacados. que es muy detrimental para la cosecha siguiente. casi negras. existiendo enfermedades causadas por hongos que son endémicas. brotes. también aparece entre las enfermedades más comunes de la vid. Las lesiones de las hojas son importantes como fuente de inóculo para la infección de inflorescencias y racimos y como órgano donde se efectúa la sobrevivencia del hongo entre los ciclos de producción. La defoliación prematura. Desde estos tejidos ataca el pedicelo y el raquis del racimo. en el haz aparecen manchas de tejido muerto. Es muy destructiva cuando no se controla oportunamente.12. Estas manchas coalescen y destruyen porciones del área foliar.15. Las infecciones severas de roya causan una defoliación prematura de la planta que ocasionan deficiencias en el llenado y madurez de los frutos. Los brotes afectados son muy débiles. el hongo reduce el número de racimos y el rendimiento.5.22 El Oidium. No existen antecedentes precisos que indiquen qué tipo de hongos son los que se encuentran afectando principalmente a estos cultivares. la llamada “pudrición gris” ocasiona una considerable pérdida en la calidad y rendimiento de la cosecha.13. Hacia la época de cosecha estas lesiones rodean el pedicelo y el raquis y las porciones del racimo por debajo de la lesión se secan.14. Generalmente. Los peciolos y el raquis del racimo son susceptibles a la infección durante todo el ciclo de crecimiento tornándose quebradizos. porque disminuye hasta un 80% de cada cosecha. que posteriormente ocasiona problemas de post – cosecha. pero afecta también las células vecinas. brotes jóvenes y raquis. El hongo causa pequeñas lesiones necróticas en hojas.4. son prevalentes y están bien establecidas.1. agente causal de manchas en hojas y sarmientos de la vid. esto es. principalmente de origen fúngico. Por tal razón el presente trabajo tiene como objetivo conocer a las especies de Pag.22. las primeras lesiones aparecen sobre las hojas maduras.2. Se considera que esta enfermedad es el principal problema de la producción de vid. las que actúan en detrimento del fruto.16 Desde hace unos seis años se detectó en Colombia la presencia del daño causado por Phomopsis vitícola. La producción de las esporas del hongo ocurre en el envés de lo hoja. 57 . Además.19 La roya. formando pequeñas lesiones de color café.19. El hongo invade la inflorescencia antes de la caída de las cubiertas florales. incrementan los costos de producción y reducen el vigor y longevidad de los viñedos. afectando el desarrollo de la siguiente cosecha.21. los que son mayormente exportados. Causado por Plasmopara vitícola. las condiciones climáticas son favorables para el desarrollo de epidemias causadas por las enfermedades de origen fungoso 17. al utilizar la planta las reservas que utilizará para la brotación y la formación inicial de los racimos. raquis del racimo.9 El distrito de Cascas es una zona que presenta grandes extensiones de suelos cultivados con vid. Ataca todos los tejidos verdes y penetra sólo las células epidermales. La Libertad. vinífera del distrito de Cascas. para esto último los cortes histológicos realizados fueron colocados en una solución de KOH al 10% previamente a la observación microscópica. procedentes del distrito de Cascas. para después hace un corte longitudinal a este nivel. tallos y frutos de diversos vegetales de Vitis vinifera “vid”. Botrytis cinerea.hongos fitopatógenos que se encuentran en lesiones en hoja. La Zona de muestreo.5cm. Para realizar el aislamiento del posible patógeno se procedió a hacer cortes en cuadrados de aproximadamente 0. Región La Libertad y la recolección de muestras se llevo a cabo durante los meses de Enero a Setiembre del 2012 y estuvo dirigida hacia aquellas plantas que presentaban síntomas o signos. De la zona de la lesión expuesta. Procesamiento de tallo1. e incubadas a temperatura ambiente por 3 a 5 días. donde se aisló a Alternaria sp. haciendo uso de las claves de identificación correspondientes. DISCUSIÓN En relación a los hongos fitopatógenos aislados en cultivos de vid procedentes del distrito de Cascas. 27-30. Plasmopara vitícola y Uncinula necátor. en la Tabla 1 se observa que en hoja se aisló a Alternaria sp. para luego ser lavados en agua destilada estéril por tres veces y finalmente ser colocados en placas de petri conteniendo agar papa sacarosa (APS) con estreptomicina. dejando en incubación a temperatura ambiente por un periodo de 3 a 5 días. en el 2012 MATERIAL Y METODOS Material de estudio: Hojas. No fue necesario que la muestra fuera representativa y adecuada. por lo dependiendo del tamaño del campo a muestrear se colectaron entre 4 a 8 muestras por campo de muestreo. el lugar donde se localizaban estas lesiones fueron desinfectadas externamente con alcohol y luego se flamearon ligeramente al mechero. Procesamiento de hoja y flor1. Las colonias que desarrollaron en las placas de petri con APS fueron resembradas en tubos conteniendo APS con estreptomicina para obtener los cultivos puros y a partir de estos realizar el microcultivo correspondiente Determinación30-32 Se realizaran en base a las características macroscópicas de las colonias. RESULTADOS En la Tabla 1 se observa que el órgano vegetal más afectado en las plantas analizadas fue la hoja. Previa observación macroscópicas de las lesiones presentes y trabajando en condiciones de asepsia. 58 . provincia de Gran Chimú. estuvo constituida por todos los cultivares de V. Estos cortes fueron tratados durante aproximadamente 3 minutos en una solución de hipoclorito de sodio al 2%. a las características morfológicas microscópicas de los microcultivos y. A cada una de las muestras colectadas se les etiqueto y colocó en bolsas de papel de primer uso para ser transportadas al laboratorio de Fitopatología de la Universidad Nacional de Trujillo. tallo y fruto de cultivos de vid. se tomaron muestras para observación microscópicas con KOH al 10% y para ser sembradas en placas de Petri con APS más estreptomicina. . Vitis vitícola. De cada una de las colonias que desarrollaron en las placas con APS se realizaron observaciones microscópicas con azul de lactofenol y paralelamente se sembraron en tubos conteniendo APS con estreptomicina a fin de obtener cultivos puros a partir de los que se realizo el microcultivo correspondiente. Las muestras de tallo fueron lavadas en agua de caño primero y en agua destilada estéril después para eliminar residuos de tierra. con signos o lesiones sospechosas de ser causadas por hongos fitopatógenos. de lado a partir del borde de la lesión que contengan tanto tejido sano como enfermo. Este hongo es considerado principalmente un oportunista y se le reporta como causante de enfermedades foliares en plantas que Pag. 27-30 De las lesiones presentes en hoja se realizaron observaciones macroscópicas y microscópicas para determinar las manifestaciones externas y presencia de hifas y/o esporas del posible patógeno. a lo más.25.33. Tabla 1: Género y/o especies de hongos encontrados en hoja y tallo de Vitis viticola “vid” procedentes del distrito de Cascas.7. de color gris en el anverso y oscuro en el reverso Algodonosa.25. hongo que es reportado como causante de la enfermedad conocida como podredumbre gris y que ha sido aislado en todas las zona viñeras del mundo. oscuros y pluricelulares.están en estado de senescencia o son jóvenes. en el cuál ocasiona caída prematura de racimos de los pámpanos o pérdida de jugo de las bayas o frutos. sino principalmente primario. En la misma Tabla también observamos la presencia de Botrytis cinerea. produce conidióforos cortos con conidios con forma de mazo o claviformes. que reduce seriamente la calidad y calidad de la cosecha. como se observa en la tabla 1. grandes. está en calidad de agente causal primaria de la misma o de un hongo oportunista.y hortalizas. al desecar en forma deseada a la baya durante su infección1. siendo el principal causante de enfermedades relacionadas con pudrición en diversos frutales.33.2.7.15. siendo esta la característica de la colonia1. por esta razón es probable que su presencia en las hojas de vid ocurra porque las plantas muestreadas estén débiles por otros factores bióticos o abióticos que las estaban afectando en el momento del muestreo1.7.15. con esporangióforos que se ramifican en ángulo de 90° y en cuyo extremo se disponen en forma individual esporangios globosos que fácilmente se desprenden y son arrastrados por el viendo hacia otras plantas sanas1. unicelulares Esporangios globosos. Debido a que son polífagos tienen la capacidad de infectar a un amplio rango de vegetales en todo el mundo. la infección de Botrytis en los racimos toma el nombre particular de “podredumbre noble”. Plasmopara vitícola es un hongo parásito obligado o biotrofo. Pag. hifas cinocíticas Organo afectado hoja hoja hoja Hoja y tallo Alternaria sp Botrytis cinerea Plasmopara viticola Uncinula necator Alternaria sp tiene un micelio oscuro y en los tejidos viejos infectados así como cuando se desarrolla como saprófito. Sus macroconidias son piriformes. Sin embargo en algunos cultivares y especialmente en determinadas condiciones climáticas en el período de sobremaduración. ya que se considera beneficiosa al contribuir a la producción de un vino blanco dulce excepcional. razón por la cuál no fue posible aislarlo en medio de cultivo.2. que es el clima que predomina en Cascas.7. Su colonia es gris. en el 2012.2. Muchas de las especies de Alternaria son principalmente saprófitas. cinerea se caracteriza por ser un Monilial con hifas tabicadas y ligeramente pigmentadas.33. es decir.25.15. no pueden infectar a los tejidos vivos de las plantas y solo se desarrollan sobre tejidos vegetales muertos o en proceso de descomposición y. Este hongo se caracteriza por presentar hifas cenocíticas.25. La Libertad. B. Produce la enfermedad conocida como “mildiu de la vid” y se encuentra presente en regiones con clima cálido a templado.7.33. ligeramente levantada y al igual que Alternaria sp es un hongo saprófito y polífago. pluricelulares Macroconidias piriformes. sobre tejidos viejos o senescentes como hojas. gris oscuro en el anverso No crece en medio de cultivo No crece en medio de cultivo Características microscópicas* Macroconidias claviformes.3. así como en plantas silvestres. Estos conidios se desprenden con facilidad y son diseminados por las corrientes de aire.33.3.3.2.25. Alternaria está clasificado como perteneciente a la familia dematiaceae. esporangióforo simple y alargado. hifas cenocíticas Esporangios piriformes. radicando allí la dificultad en decidir si al aislarse un hongo del género Alternaria sobre un tejido vegetal enfermo. esporangióforo ramificado en ángulo de 90°. y se caracteriza por presentar hifas y conidias de color oscuro.15. Los climas húmedos y templados existentes en la localidad de Cascas favorecen la presencia de este patógeno.15.3. Especie signo Mancha foliar Micelio gris Micelio blancogris Micelio blanco Características de la colonia Algodonosas. sin embargo su principal daño no es en hoja sino en fruto.3. unicelulares y se disponen a manera de racimo sobre un conidióforo simple dilatado en su extremo anterior. 59 .2. siendo sus conidias diseminadas principalmente por el viento y la lluvia1. aunque es un patógeno no solo secundario. observándose su micelio desde un color blanco a gris conforme va envejeciendo1. a pardo rojizo y limitadas a por las nervaduras. L. Actualmente a este hongo puede encontrársele en la mayoría de las áreas vitícolas del mundo. introduciendo a sus haustorios dentro de ellos a fin de poder obtener los nutrientes de estas células. U. 1982. 1990. Hemisferios sur Bs. España. E. 2006. Mundiprensa. México. CABI. Atlas de diagnóstico micológico. 1987. Perú. Introducción a la fitopatología. UK. San José. Finch. Perú. 3. 1994. razón por la cuál se observa como un signo. Edit.15. IICA. 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