Práctica No.3: Prueba de alcaloides en Hygrophyla tyttha Daniel Felipe Victoria Muñoz 125355, Aida Johanna Rivera Hurtado 125336 Fitoquímica y Farmacognosia, Departamento de Farmacia, Facultad de Ciencias Universidad Nacional de Colombia _____________________________________________________________________ Objetivo general Determinar la presencia de alcaloides en Hygrophyla tyttha Objetivos específicos Comparar los métodos de identificación de alcaloides. Determinar en las semillas de Malus domestica la presencia de glicósidos cianogenicos. Marco teórico No existe una definición exacta para los alcaloides, pero se ha llego al consenso de que son compuestos orgánicos de origen natural, nitrogenado, encontrándose generalmente intraciclico, derivados de los aminoácidos, de carácter más o menos básico, de distribución restringida, con propiedades farmacológicas importantes a dosis bajas que responden a reacciones comunes de precipitación1. De acuerdo a las características de esta definición, algunos autores han divido a los alcaloides en cuatro clases: 1. Alcaloides Verdaderos: Cumplen estrictamente con las características de la definición de alcaloides: son formados de aminoácidos, tienen siempre un nitrógeno intraciclico, son de carácter básico y existen en la naturaleza normalmente en estado de sal. 2. Protoalcaloides: Son aminas simples con nitrógeno extraciclico, de carácter básico y son pero son productos del metabolismo de los aminoácidos. 3. Pseudoalcaloides: Presentan algunas de las características de la definición de alcaloide, pero son derivados de aminoácidos. 4. Alacaloides Imperfectos: Son derivados de bases puricas, no precipitan con los reactivos específicos para alcaloides. existen algunas sugerencias sobre el papel que poseen estos compuestos en las sustancias vegetales como: Desecho o almacenamiento del nitrógeno sobrante en la planta Sirven como transporte del nitrógeno no metabolizado dentro de la planta Cumplen funciones de protección de la planta. la sanguinarina (rojo). algunas bases como la tiamina ampliamente distribuida en los seres vivos y los alkil aminas de bajo peso molecular. Ruta sintética de los alcaloides1 La función de los alcaloides en las plantas no es aun clara. porfirinas. la mayoría son incoloros a excepción de los altamente conjugados como la berberina (amarillo). las vitaminas nitrogenadas. La propiedades fisicoquímicas varían dependiendo del alcaloide de que se esté hablando. la urabaina (verde) y las oxoaporfinas que van de amarillo a rojo. las betalainas. vincristina C46H56N4O10=824). sin embargo estos deben participar en secuencias metabólicas y no son solamente producto de desecho del metabolismo. en la siguiente tabla se muestra la ruta sintética de las clases de alcaloides: Fig 1. son normalmente solidos a temperatura ambiente. . las masas de estos pueden varían entre 100 y 900 (coniína C8H17N=127. los aminoaucares. lo cual sugiere que los alcaloides no son esenciales para la vida de la planta. los péptidos. la nicotina y la esparteina que son líquidas2. solo las bases no oxigenadas como la o la coniína. por el mal sabor que poseen estos Reguladores del crecimiento en la planta Se ha demostrado que la perdida de los alcaloides no impide el desarrollo de la planta.No son alcaloides aminoácidos. Mayer. luego se afora a 100ml.Las técnicas de reconocimiento están basadas en la capacidad que tienen los alcaloides en estado de sal.2g de yoduro de potasio en 50ml de agua. mercurio. se decanta y se afora a 100ml. Su preparación se describe a continucacion3 Reactivo de Dragendorff: se prepara mezclando 8g de nitrato de bismuto pentahidratado en 20 ml de acido nítrico al 30% con una solución de 27.. en estas también se utilizan los reactivos de precipitación. mientras que los reactivos organonitrados (Reineckato de amonio) forman precipitados cristalinos que se descomponen por alcalisis.H2O Tabla 1: reactivos de precipitación Los reactivos de precipitación utilizados en esta práctica fueron Dragendorff. Mayer. para realizar la identificación de los alcaloides. Reactivo de Mayer: se prepara mezclando 1. Reineckato de amonio. Valser. .1% p/v de clorhidrato de hidroxilamina. los reactivos yodados (Dragendorff. tungsteno.3g de bicloruro de mercurio en 60ml de agua y 5g de yoduro de potasio. Reactivo de Valser: se prepara mezclando 50ml de una solución al 10% de yoduro de potasio a la que se le añade 10g de yoduro de mercurio. luego se afora a 100ml Reineckato de Amonio: una solución acuosa al 4% de reineckato de amonio se acidula ligeramente con HCl y se trata con 0. metales pesados como el bismuto. los principales reactivos de precipitación se describen a continuación3: REACTIVO Mayer Hager Valser Ácido Tanico Bouchardat Dragendorff Reineckato de amonio COMPOSCION HgCl2 + KI COLOR DE PRECIPITADO Crema Amarillo Crema Amarillo Rojo Pardo Anaranjado Crema o Blanco 3 C6H3N3O7 (acido pícrico) HgI2 + KI C76H52O46 I2 + KI Bi(NO3) + HNO3 + KI NH4[Cr(NH3)2(SCN)4]. que pueden ser fácilmente precipitados con reactivos de yodo. Valser) precipitan a los alcaloides como poliyodatos complejos. Es muy común utilizar también cromatografías en capa delgada. se deja reposar durante 24 h. etc. Con esta imagen se realiza la comparación entre antes de la prueba y después de la misma. Resultados En las tablas 2 y 3. que impide la respiración celular. sus efectos están dados principalmente en el sistema nervioso. ciruelas. Valser. relajamiento del peristaltismo y una acción espasmolitica neurotopica. aunque generalmente la hiosciamina es entre 10 y 50 veces más activa que la atropina. almendras. Meyer y Reinekato de sodio a los extractos de Hygrophila Tytta y Brugmansia spp. etc. bacterias y animales.. apoescopolamina y 6β hidroxi 3α tigloiloxitropano4. ellos se encuentran ampliamente distribuidos en los vegetales. una aceleración a nivel del corazón. generando síntomas como: midriasis. vasocontriccion de los vasos capilares. En la Brugmansia spp podemos identificar alcaloides de tipo tropanico como la hiocsiamina. ya que estos generan una coloración que nos permite indicar la presencia de cualquiera estos. . tanto en el central como en el autónomo. pero también los podemos encontrar en hongos. Cada imagen tiene dos tubos de ensayo a la izquierda e extracto sin ninguna prueba. cerezas. la cual consiste en que el HCN gaseoso se encuentre con una tira de papel absorbente impregnada con ácido pícrico y carbonato de sodio. aunque también en semillas de Malus domestica (manzana). atropina. pero en concentraciones muy bajas5 La prueba de identificación más utilizada para los glucósidos cianogenicos es la reacción de Guinard (para ácido cianhídrico). enzima de la cadena respiratoria. pero esta es mucho más estable.principalmente el reactivo de Dragendorff o uno organonitrado. estos alcaloides se encuentran principalmente en las flores y poseen las mismas propiedades farmacológicas. se observa las pruebas de tubo. si se llegase a presentar un viraje desde el color amarillo original a un color rojo ladrillo podemos indicar la presencia de los glucósidos. entre más fuerte sea el color rojo ladrillo más cantidad de ácido cianhídrico liberado por lo tanto hay una mayor cantidad de glucósidos cianogenicos6. Los glucósidos cianogénicos son cianohidrinas unidas a un azúcar cuya hidrólisis enzimática libera cianuro. duraznos. que se realizaron con los reactivos de Dragendorff. este actúa inhibiendo al citocromo oxidasa. en plantas se encuentran los glucósidos cianogénicos en la raíz de mandioca principalmente. todo esto debido a su acción antagonista sobre la acetilcolina. Reactivo Pruebas de tubo en comparacion con patron Resultado Dragendorff No precipitado NEGATIVO Valser No precipitado NEGATIVO Meyer No precipitado NEGATIVO Reinekato de sodio No precipitado NEGATIVO Tabla 2: Pruebas de tubo y resultado del precipitado del extracto de Brugmansia spp . .Reactivo Pruebas de tubo en comparacion con patron Resultado Dragendorff No precipitado NEGATIVO Valser No precipitado NEGATIVO Meyer No precipitado NEGATIVO Reinekato de sodio No precipitado NEGATIVO Tabla 3: Pruebas de tubo y resultado del precipitado del extracto de Hygrophila Tytta. Tabla 4 se observa imágenes de la CCD una revelada con reactivo de dragendorff y otra vista a luz UV. En la figura 2 se observa papel de ácido pícrico con viraje naranja. con el reactivo de dragendorff se evidencia la presencia de alcaloides es la Brugmansia spp. Fig 2. . Brugmansia spp y Banisteriopsis Caapi como patrón. Observación de ácido pícrico en presencia de glicósidos cianogenicos de las semillas de Malus domestica (manzana). La capa es revelada con luz UV y reactivo de dragendorff. Revelado Imagen de Cromatografía de capa delgada Brugmansia spp Luz UV 365nm Banisteriopsis Caapi (yage) Hygrophila Tytta Brugmansia spp Reactivo de dragendorff Banisteriopsis Caapi (yage) Hygrophila Tytta Tabla 4: Cromatografía de capa delgada de los extractos de Hygrophila Tytta. lo cual evidencia la presencia de glicósidos cianogenicos en las semillas de Malus domestica (manzana). aunque las dos muestran manchas que nos indican la presencia de alcaloides. y según Molina e. . Esta diferencia entre los métodos de identificación puede ser explicada por la siguiente hipótesis. En la CCD revelada con reactivo de Dragendorff se observa manchas naranjas en la muestra patrón Banisteriopsis Caapi (yage) y en el extracto de Brugmansia spp lo que demuestra la presencia de alcaloides. Contrastado con las pruebas de tubo.Discusión de resultados En las pruebas de tubo para identificación de alcaloides que utilizan los reactivos de Dragendorff. estos resultados tienen correlación con los resultado mostrados en la literatura6. lo que es confirmado con las pruebas tubo. en el caso del reineckato de amonio es esperado que no de un precipitado ya que este reactivo sirve para la identificación de nitrógenos cuaternarios o N-oxidos5. Mayer. Se observa para Hygrophyla tyttha en la CCD la ausencia de alcaloides. Los RFs obtenidos en la CCD revelada con reactivo de Dragendorff son diferentes para los extractos de Brugmansia spp y de Banisteriopsis Caapi. después de 24 horas. aunque en la CCD revelada a la luz UV de longitud de 365 nm. El viraje de un color amarillo inicial a un color naranja en la tira de papel absorvente con ácido pícrico. esta diferencia de RFs es generada a que no son los mismos tipos de alcaloides. aunque por ser de color naranja no existe una gran cantidad de estos glucósidos en las semillas de Malus doméstica. se identifica una mancha de color rojo (Tabla 4) la cual se cree que es un compuesto cromóforo el cual no necesariamente es un alcaloide ya que las pruebas anteriores dieron negativas. Valser y Reineckato de amonio no se genero el precipitado en el extracto de Brugmansia spp. que dieron un resultado negativo para alcaloides. los que están caracterizados por tener el nitrógeno metilado lo que impide la formación de un N-oxido y se dificulta su cuaternizacion por el impedimento estérico.t en la Brugmansia spp encontramos alcaloides derivados del tropano. ya que son de uso común por todos los integrantes del laboratorio. nos indica la presencia de glucósidos cianogenicos. en al cual se plantea que los reactivos utilizados en la práctica pudieron estar alterados o contaminados. Mexico.F.. es importante tener cuidado en la pureza de los reactivos requeridos. en bajas concentraciones. Caracas. D. 2. 110-115 3. Fitoquimica Organica. Departamento de farmacia. 2008. en concordancia con la reacción de Guinard. Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco. 1ª edición. pp. Hasegawa M.Conclusiones En Hygrophyla tyttha se evidencio la ausencia de alcaloides. Cátedra de farmacognosia.. journal of medecine. Libro de trabajo practico N°8 alcaloides.. 5. Toxicología de Alimentos. publicacions edicions universitat de Barcelona. pp. aunque las pruebas de tubo resultan ser mas útiles a la hora de identificar la estructura de un alcaloide. Cuello J. 2002. prácticas de laboratorio de farmacognosia. Facultad de ciencias naturales. Instituto Nacional de Salud Pública. Estudio etnobotánico y etnofarmacológico de plantas medicinales de Tambopata. Marcanno D. alcaloides y compuestos nitrogenados. Valle P.1-8. Florentino B. pp 150-151 . Arango G. pp. Didáctica de la Genetica. Madre de Dios. Facultad de Química Farmacéutica. Barcelona. Molina Y. Universidad de Antioquia. pp 73-75 6.. 1995. 384-385 4.2000.. 2ª ediccion... estos fue confirmado por las diferentes pruebas de tubo y por la CCD revelada con Dragendorff y luz UV El método de identificación de CCD es menos susceptible a errores por parte del experimentador.. Editorial Torinio. Perú. Bibliografía 1. En Malus doméstica se evidencio la presencia de glucósidos cianogenicos. 1983.