Universidad Nacional Autónoma de MéxicoFacultad de Estudios Superiores Zaragoza Microbiología General II COPROPARASITOSCOPICO Integrantes: Alvizuri Fernández Juan de Dios Equipo: Grupo: Pérez Piedras Guadalupe 5 2752 OBJETIVOS Realizar un examen macroscópico y microscópico de la materia fecal. Determinar la presencia de parásitos en la materia fecal. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA DE HECES. Por expulsión natural. Por purgantes solo para casos de amebosis. intestinal crónica y estrongiloidosis. Por cucharilla rectal solo para recién nacidos. Recipiente de recolección Frasco de boca ancha con tapa de rosca. Cantidad de muestra requerida 2-5 g. Examen macroscópico Permite observar directamente las características morfológicas de los parásitos, enteros o fraccionados , así como los cambios en las características organolépticas de las heces eliminadas (color, consistencia, olor y elementos). PRESENCIA DE SANGRE SANGRE Formes hemorroides sangrantes blandas MOCO Y SANGRE amibiana liquidas SANGRE OCULTA ulceración hemorragias internas DETECCION DE PARASITOS MACROSCOPICOS Ascaris adultos Fragmentos de D. latum Proglotides de T. saginata y T. solium Larvas de Strongyloides Examen directo Este método permite buscar principalmente en muestras frescas, la presencia de formas evolutivas móviles de parásitos de tamaño microscópico trofozoitos, quistes de protozoos, así como larvas o huevos de helmintos Examen microscópico En un portaobjetos se colocan dos gotas, de solución salina y de lugol tomar la muestra de materia fecal, se debe escoger la parte que tenga elementos anormales se homogeniza en la lámina primero en la solución salina y luego en el lugol, se le colocan los cubreobjetos Entamoeba histolytica Entamoeba coli Entamoeba hartmanni Endolimax nana Iodamoeba beutschlii q u i s t e T r o f o z o i t o DEFINICIÓN CPS: Es el estudio de la materia fecal para la búsqueda e identificación de formas parasitarias con fines diagnósticos. CLASIFICACIÓN DE EXÁMENES COPROPARASITOSCÓPICOS POR SU EXPRESIÓN NUMÉRICA CUALITATIVOS: a.En fresco b.Centrifugación Flotación (Faust) c.Flotación (Willis) d.Sedimentación (Ritchie) CUANTITATIVOS: a.Concentración (Ferreira) b.Dilución (Stoll) c.Técnica de Beaver d.Método modificado de KatoMiura e.Técnica de Kato.katz MÉTODOS ESPECIALES Tamizado Graham Baermann Harada-Mori EXAMENES CUALITATIVOS CPS de flotación con solución de sacarosa Técnica que se utiliza para casos de emergencia cuando no se tienen otros reactivos a la mano. Este procedimiento es muy útil para trabajo de campo. Limitaciones: La solución de sacarosa atrae moscas, provocando las molestias consiguientes. CPS de concentración por centrifugación flotación (FAUST, 1938) Se basa en que los quistes y/o huevos de los parásitos flotan en la superficie por ser de menor densidad que el sulfato de zinc a 33,3%, cuya densidad 1.180 Método indicado para el diagnóstico de huevos livianos de helmintos (Necator, tricocéfalos, Ascaris, H. nana). METODOLOGIA Hacer una suspensión homogénea con 1 o 2 gramos de material fecal y 10 ml de agua Se filtra a través de gasa colocada en el embudo y se directamente en el tubo Se agregan 2 a 3 ml de solución de sulfato de zinc tubos y se homogeneiza. Se colocan 2 gotas de lugol, se homogeneiza con el ángulo de un cubreobjetos y se pone este sobre la preparación. Se centrifugan a 2000 rpm durante 1 min. Se centrifugan a 2000 rpm durante 1 min. Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con agua. Se recoge la con el asa la muestra de la película superficial que se encuentra en el menisco, durante 2 o 3 ocasiones sucesivas y se deposita en el portaobjetos Se observa con objetivos de 10x y 40x. Método de salmuera de Willis Este método basado en la propiedad que tienen las soluciones de densidad alta, de hacer flotar objetos menos densos, la salmuera de 1.200° Bé, es lo que hace que la mayor parte de huevos de helmintos floten. CPS de concentración por sedimentación con centrifugación (Ritchie) Es usado para concentrar huevos, quistes y larvas de helmintos. No importa la densidad que tenga, los detritus orgánicos se eliminan con el éter. El motivo por el cual se utiliza el formol es para mantener la integridad de los parásitos. EXAMENES CUANTITATIVOS Examen CPS cuantitativo por dilución de Stoll FUNDAMENTO: Este método se basa en los principios de saponificación, homogenización y aclaración. El fundamento es básicamente aritmético, se basan en diluciones empleadas. Es útil para saber la intensidad de la infección por ciertas uncinarias y helmintos. FORMA DE REPORTAR HECES Duras Pastosas Líquidas Duras MUESTRA (mL) 0.075 0.075 0.075 0.150 FACTOR 50 100 200 100 Pastosas Líquidas 0.150 0.150 200 400 Ejemplo: Si la materia fecal es pastosa y se encontraron en todos los campos 4 huevos de uncinaria en 0.15ml de la muestra: 4 x 200 = 800 Se reportará así: 800 h. mL. h. de uncinarias CPS cuantitativo de Ferreira Es un método de concentración de una suspensión de materia fecal 1:10, que tiene la característica de considerarse como cuantitativo. Forma de reportar El total de huevos o larvas encontrados se multiplica por 5; de esta manera se obtiene el número de huevo s o larvas por gramo de heces. Método de frote grueso (Kato y Miura) FUNDAMENTO: Es un método cuantitativo de helmintos. El cual se basa en la acción que tiene la glicerina como aclarador de los huevos de helmintos y el verde de malaquita como colorante de contraste. FORMA DE REPORTAR El número de huevos o larvas observados en toda la preparación se multiplica por un factor constante de 20. CPS cuantitativo con frote grueso de Kato Y Katz Es un método que solo sirve para cuantificar huevos de helmintos. FORMA DE REPORTAR. De la misma forma que para la técnica de Kato y Miura Huevo de Necator tras la extensión de heces en un frotis grueso de kato (x 540) CPS directo cuantitativo Utilidad: Es un método excelente para grandes volúmenes de muestras y se presenta la necesidad después de hacer un cuantitativo, de hacer recuentos de huevo de helmintos Limitaciones: La pequeña cantidad de muestra que se utiliza. Forma de reportar: Según la cantidad de material fecal que se haya tomado, el cálculo se hace con una simple regla de tres para obtener la cuenta de hgh Exámenes especiales para el diagnostico de parasitosis del aparato digestivo Tamizado Es utilizado en el análisis cualitativo y se considera un método mecánico de separación. Utilidad: se usa para la recolección de parásitos o segmentos de estos en la materia fecal. RECOLECCIÓN PERIANAL Y PERINEAL CON CINTA DE CELOFÁN ADHESIVO (GRAHAM 1941) Esta técnica se basa en que la hembra adulta de Enterobius vermicularis habitualmente no deposita sus huevos en el interior del intestino, sino que por lo general emigra durante la noche, hacia las márgenes del ano, depositando los huevos en los pliegues perianales. . Preparación de Graham huevo de Enterobius vermicularis EXAMEN DE CONTENIDO DUODENAL Se usa para demostrar la presencia de parásitos o formas parasitarias que se alojan en el duodeno o bien en las parasitosis que son problemas de diagnostico como giardiosis, fasciolosis y estrongiloidosis; por medio de una capsula de gelatina que tiene en su interior un hilo de algodón absorbente. MÉTODO DE CONCENTRACIÓN CON EL DISPOSITIVO DE BAERMAN. Se utiliza para concentrar larvas de S.stercolaris, N.americanus y Ancylostoma spp; también se ha descrito su uso para la recuperación de larvas de T.spiralis después de la digestión de músculo infectado. Fundamento: Se basa en los tropismos positivos: geotropismo, termo tropismo e hidrotropismo de los trofozoítos de protozoos y larvas de helmintos.. MÉTODO Armar el dispositivo. Se llena el embudo con agua que previamente se calentó a 40°C de tal manera que la malla y la gasa se mojen. Se deja reposar durante 2 hrs, para que las larvas pasen al agua del embudo. Pasadas las 2hrs, se abre la pinza, se deja salir el agua y se recibe en el vaso de precipitados. Se coloca la materia fecal sobre la malla y la gasa. Se centrifuga el líquido durante un minuto a 2000rpm se toma del sedimento y se coloca entre porta y cubre y se examina con la lupa del microscopio Método de cultivo en papel filtro (HaradaMori) Es un dispositivo por medio del cual se verifica el desarrollo de huevos o larvas de N. americanus, Ancylostoma spp. y S. stercoralis, con objeto de obtener las filariformes infectantes, pues en este estadio es donde las características son diferenciables. Medio de Kupferber y Sprince Es un medio simple de tripticasa y suero para cultivo de Trichomonas vaginalis. Medio de N.N.N. (Novy, Nicolle, McNeal) Es un medio eficaz para el aislamiento y cultivo de Trypanosoma cruzy y Leishmania spp., es un medio sumamente económico. Constituido por dos fases: una sólida que es un agar sangre con una concentración elevada de sal y la líquida es con solución Ringer. Amiba en fresco. Ayuda a determinar la presencia en las evacuaciones de trofozoítos de Entamoeba histolytica, apoyando este diagnóstico. Es un método, sencillo de realizar y que nos ayudará en la búsqueda de protozoarios, así como sus quistes y trofozoitos. Huevos encontrados en heces humanos de nematodos Enterobius vermicularis Trichuris trichiura Ascaris lumbricoides fértil Ascaris lumbricoides infértil Taenia spp Hymenolepis nana Hymenolepis diminuta Diphyllobothrium latum Dipyllidium caninum Huevos encontrados en heces humanos de cestodos Paragonimus westermani Nanophyetus salmincola Fasciola hepatica Echinostoma spp. Huevos encontrados en heces humanas de trematodos Taenia solium Taenia saginata Diphyllobothrium latum Dipylidium caninum Hymenolepis nana Hymenolepis diminuta BIBLIOGRAFIA Irene H. A., Paz M.S.S., Margarita C.B. Diagnóstico Morfológico de las Parasitosis. 2ª Ed. México: Méndez Editores, 2002: 181-192,193-214 www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/parasitologia/pr%E1cticas_1-15.pdf . Markell Edwar. Parasitología medica, 6ª edic., Edit. Mac-Graw-Hill, Madrid, España 1990. Faust Ernest. 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